李蜀平 劉冬平 劉魁英 戰(zhàn)嘉怡

隨著社會現(xiàn)代化的發(fā)展，因各種意外導(dǎo)致急性軟組織損傷患者也隨之日趨增多。急性軟組織損傷系跌撲、撞擊、重物擠壓等直接暴力作用于人體引起的韌帶及血管、神經(jīng)損傷，從而導(dǎo)致局部腫脹、疼痛、皮膚青紫等癥狀。本研究采用中藥化瘀止痛膠囊進(jìn)行了抗炎、小鼠耳廓微循環(huán)、鎮(zhèn)痛試驗(yàn)，進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)觀察，探討該藥的抗炎、活血化瘀、鎮(zhèn)痛作用，為該藥的臨床應(yīng)用提供藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 資料與材料

1.1 一般資料 健康SD雄性大鼠，150～180 g;ICR小鼠，20～22 g，雌雄兼用，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。許可證號:SCXK(京)2002-0003。

1.2 藥物 化瘀止痛膠囊，由本所制劑室提供，批號:060701。陽性對照藥物七厘膠囊，批準(zhǔn)文號:(94)衛(wèi)藥準(zhǔn)字Z-92號，生產(chǎn)單位:華禾藥業(yè)北京華頤中藥制藥廠，生產(chǎn)批號:06311。功能與主治:化瘀消腫、止痛止血。

1.3 試劑 冰醋酸，北京化工廠，批號:20050902。

1.4 主要儀器 電熱恒溫水浴鍋:上海醫(yī)療器械三廠;DM3-030秒表:上海秒表廠;BL-2200H電子天平，SHIMADZU CORPORATION JAPAN

2 方法

2.1 化瘀止痛膠囊對蛋清引起大鼠足腫脹的影響

2.1.1 分組與給藥 實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌、雄各半，設(shè)化瘀止痛膠囊高、中、低3個劑量組(分別為1.9、0.95、0.48 g生藥/Kg，分別為臨床人用量0.133 g生藥/Kg的14、7、3.5倍)，陽性對照組七厘膠囊1.05 g/Kg(為臨床人用量0.075 g/Kg的14倍)及空白對照組。大鼠灌胃給藥，1次/d，連續(xù)給藥10 d。

2.1.2 方法 于末次給藥后0.5 h在其右后足跖皮下注射10%新鮮蛋清 0.1 ml/只，測其致炎后 0、1、2、4、6 h 的足掌厚度。將致炎后的厚度減去致炎前的正常厚度即為足跖腫脹度。

2.2 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)的影響

2.2.1 分組與給藥 實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌、雄各半，設(shè)化瘀止痛膠囊大、中、小3個劑量組(分別為2.4、1.2、0.6 g生藥/Kg，分別為臨床人用量0.133 g生藥/Kg的18、9、4.5倍)，陽性對照組七厘膠囊1.35 g/Kg(為臨床人用量0.075 g/Kg的18倍)及空白對照組。小鼠灌胃給藥，每日一次，給藥10 d。

2.2.2 方法 于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天末次給藥后0.5 h，腹腔注射戊巴比妥鈉(40 mg/Kg)麻醉小鼠，剪去小鼠耳毛，將其置于顯微鏡載物臺上，觀察小鼠耳廓微靜脈、微動脈的管徑、交叉點(diǎn)數(shù)、毛細(xì)血管開放數(shù)及流速，鼠尾靜脈注射10%葡聚糖1 mg/Kg造成微循環(huán)障礙模型，立即觀察并記錄以上指標(biāo)，并比較給藥前后指標(biāo)變化情況(其中流速以4級記分法記錄，為便于進(jìn)行數(shù)理統(tǒng)計(jì)，流速“+”以1計(jì)算，“++”以2計(jì)算，“+++”以3計(jì)算，“++++”以4計(jì)算)。

2.3 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)［1-2］

2.3.1 分組與給藥 實(shí)驗(yàn)小鼠隨機(jī)分成5組，每組10只，雌、雄各半，設(shè)化瘀止痛膠囊高、中、低3個劑量組(分別為2.4、1.2、0.6 g生藥/Kg，分別為臨床人用量0.133 g生藥/Kg的18、9、4.5倍)，陽性對照組七厘膠囊1.35 g/Kg(為臨床人用量0.075 g/Kg的18倍)及空白對照組。小鼠灌胃給藥，1次/d，給藥 3 d。

2.3.2 方法 于末次給藥后1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 ml/只，記錄每只小鼠15 min內(nèi)因疼痛發(fā)生扭體的次數(shù)。

2.4 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用 (熱板法)［1-2］

2.4.1 動物篩選 調(diào)節(jié)恒溫水浴:水溫控制在55±0.5℃，熱板需預(yù)熱10 min。篩選合格小鼠:將18～22 g的雌性小鼠，每1只放在熱板上，凡舔后足時間小于5 s或大于30 s或跳躍者棄之。

2.4.2 分組給藥與測定 將合格小鼠50只，測定給藥前痛閾值并隨機(jī)分成5組。小鼠連續(xù)給藥3 d。末次給藥后1、2、4 h測小鼠痛閾值。

2.4.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法測定的數(shù)據(jù)均以 表示，以SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析，t檢驗(yàn)法比較給藥組與對照組間的顯著性差異。

3 結(jié)果

3.1 化瘀止痛膠囊對蛋清引起大鼠足腫脹的影響 試驗(yàn)結(jié)果顯示:與模型對照組比較，化瘀止痛膠囊高、中劑量組能明顯對抗蛋清引起的炎癥，具有明顯的抗炎作用。結(jié)果見表1。

表1 化瘀止痛膠囊對蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響(±s)

表1 化瘀止痛膠囊對蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響(±s)

注:與模型對照組比較:*P＜0.05

組別 劑量(g生藥/Kg) 動物數(shù)(只) 致炎后不同時間(h)足跖腫脹度(mm)1 2 4 6化瘀止痛膠囊 1.9 10 0.231±0.049 0.159±0.060* 0.131±0.053*0.089±0.020化瘀止痛膠囊 0.95 10 0.232±0.041 0.172±0.047* 0.133±0.039* 0.092±0.034化瘀止痛膠囊 0.48 10 0.268±0.038 0.199±0.029 0.176±0.044 0.102±0.046七厘膠囊 1.05 10 0.245±0.036 0.157±0.042* 0.161±0.038 0.116±0.049模型對照 -- 10 0.250±0.056 0.230±0.069 0.184±0.0554 0.120±0.045

3.2 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微循環(huán)的影響 試驗(yàn)結(jié)果顯示:與模型對照組比較，化瘀止痛膠囊可使微循環(huán)障礙小鼠流速變化較對照組小，并可縮短微循環(huán)障礙小鼠流速恢復(fù)時間。但未見其對管徑、交叉點(diǎn)數(shù)、毛細(xì)血管開放數(shù)的影響，具有改善小鼠耳廓微循環(huán)作用。結(jié)果見表2。

表2 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微靜脈循環(huán)的影響(±s)

表2 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微靜脈循環(huán)的影響(±s)

注:與空白對照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別 劑量(g生藥/Kg) 動物數(shù)(只) 流速變化(分) 流速恢復(fù)時間(分)化瘀止痛膠囊 2.4 10 1.35±1.78 1.60±3.45＊＊化瘀止痛膠囊 1.2 10 0.80±1.30* 0.65±1.06＊＊化瘀止痛膠囊 0.6 10 2.20±1.67 4.45±5.85七厘膠囊 1.35 10 0.40±1.10＊＊ 0.70±1.70＊＊模型對照10 2.65±1.65 8.67±6.88-

表3 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微動脈循環(huán)的影響(±s)

表3 化瘀止痛膠囊對小鼠耳廓微動脈循環(huán)的影響(±s)

注:與空白對照組比較:*P＜0.05;＊＊P＜0.01

組別 劑量(g生藥/Kg) 動物數(shù)(只) 流速變化(分) 流速恢復(fù)時間(分)化瘀止痛膠囊 2.4 10 0.70±1.49 0.30±0.62＊＊化瘀止痛膠囊 1.2 10 0.70±1.49 0.36±0.83＊＊化瘀止痛膠囊 0.6 10 1.05±1.62 3.50±6.15七厘膠囊 1.35 10 0.30±0.95 0.51±1.61＊＊空白對照10 2.20±1.95 7.80±7.64-

3.3 對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法) 試驗(yàn)結(jié)果顯示:與模型對照組比較，化瘀止痛膠囊高、中劑量組小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)明顯減少，P＜0.05，具有鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表4。

表4 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)(±s)

表4 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(扭體法)(±s)

注:與模型對照組比較:*P＜0.05

組別 劑量(g生藥/kg) 動物數(shù)(只) 15 min內(nèi)發(fā)生扭體次數(shù)(次)10 37.6±8.90七厘膠囊組 1.35 g/kg 10 27.8±8.53*化瘀止痛膠囊組 2.4 10 27.4±7.71*化瘀止痛膠囊組 1.2 10 28.6±9.09*化瘀止痛膠囊組模型對照組-0.6 10 29.8±8.86

表5 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)(±s)

表5 化瘀止痛膠囊對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法)(±s)

注:與模型對照組比較:*P＜0.05

組別 劑量(g生藥/Kg) 動物數(shù)(只) 給藥前痛閾(s) 去除藥物后痛閾(s)10 23.2±3.46 24.1±7.12 27.9±5.06 26.8±3.16七厘膠囊組 1.35 g/kg 10 22.8±5.65 30.3±5.22* 33.9±4.95* 31.1±3.38＊＊化瘀止痛膠囊組 2.4 10 23.3±3.46 32.8±9.22* 37.3±10.88* 32.2±8.16化瘀止痛膠囊組 1.2 10 23.0±2.98 30.7±4.52* 25.9±5.26 26.9±4.15化瘀止痛膠囊組 0.6 10 23.1±5.61 26.6±6.22 25.1±5.17 27.7±4.1 h 2 h 4 h模型對照組-47

3.4 對小鼠的鎮(zhèn)痛作用(熱板法) 試驗(yàn)結(jié)果顯示:與模型對照組比較，化瘀止痛膠囊高劑量組可提高藥后1、2 h小鼠的痛閾值，P＜0.05;中劑量組可提高藥后1 h小鼠的痛閾值，P＜0.05表明化瘀止痛膠囊可提高小鼠因熱引起疼痛的痛閾值，具有一定的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果見表5。

4 討論

急性軟組織損傷是骨傷科臨床常見病、多發(fā)病，臨床主要表現(xiàn)為局部腫脹、疼痛、功能障礙、青紫瘀斑等。急性軟組織損傷屬于中醫(yī)學(xué)“筋傷”的范疇。中醫(yī)理論認(rèn)為急性軟組織損傷，瘀血阻滯是其中主要病機(jī)。瘀血阻滯，經(jīng)脈血?dú)馐茏?，血?dú)獠煌?，不通故見疼痛，腫脹。離經(jīng)之血瘀于皮下，故見皮下青紫或血腫。本方以血竭、三七為君，意在活血化瘀、通絡(luò)止痛。其中血竭咸平，功專散瘀定痛，《海藥本草》稱本品:“主打傷折損，一切疼痛，補(bǔ)虛及血?dú)鈹嚧蹋瑑?nèi)傷血聚”;三七甘溫，善散瘀止血，消腫定痛，對于跌打損傷、杖瘡、金刃箭傷等均有卓效，故《玉楸藥解》謂之能“和營止血，通脈行瘀，行瘀血而斂新血……一切瘀血皆破?！倍帪榫Ａ?。配以乳香、沒藥等中藥合用，有活血化瘀、通行經(jīng)脈、消腫止痛之功。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，化瘀止痛膠囊具有活血化瘀、消腫止痛之功效。為該藥的臨床應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，1993:360-361、377-378.

［2］徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué).北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:886-887、882-883.