付 強(qiáng)，呂素芳，劉吉山 ，李 峰，連紅梅

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東濱州256600;2.山東綠都生物科技有限公司，山東濱州256600）

副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis，HPS)是豬Glasser’s病的病原體，可引起纖維蛋白性肺炎、腹膜炎及多發(fā)性關(guān)節(jié)炎等多種臨床表現(xiàn)。斷奶前后和保育舍仔豬發(fā)病率可達(dá)40%，致死率可達(dá)50%，已成為影響世界養(yǎng)豬業(yè)的又一種重要病原。該病造成我國養(yǎng)豬業(yè)巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 病原分離

HPS對(duì)生長條件要求比較苛刻，放置時(shí)間過長的病料往往難以分離出副豬嗜血桿菌，所以采集供分離HPS的樣品應(yīng)當(dāng)冷藏保存 (4℃)并及時(shí)分離(1～2d)。為了消除臨床上抗菌素的使用對(duì)細(xì)菌分離的影響，采集病料時(shí)應(yīng)當(dāng)選擇處于疾病急性期的豬并在應(yīng)用抗菌素之前進(jìn)行細(xì)菌的分離鑒定。從全身各處或大損傷點(diǎn)的分離是唯一能保證所分離出來的細(xì)菌在病程中發(fā)揮作用的前提，細(xì)菌分離培養(yǎng)，最好選擇漿膜表面物質(zhì)或滲出的腦脊髓液及心臟血液，這樣既可以減少雜菌的污染又可以增加分離到致病菌的機(jī)率。

研究結(jié)果表明5%CO2或蠟罐培養(yǎng)并不能提高副豬嗜血桿菌的生長速度，而用脫纖維蛋白鮮血和胰蛋白胨鮮血瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)可以提高生長速度；用牛或羊血和胰酶水解酪蛋白瓊脂為培養(yǎng)基效果不佳。

分離時(shí)將病料，在含有輔酶I的TSA或者TM/SN平板上劃線接種，在厭氧罐37℃培養(yǎng)48 h后挑取單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。將可疑菌的單菌落與金黃色葡萄球菌垂直劃線于無NAD的血平板上，在37℃培養(yǎng)24～48 h，如果看到“衛(wèi)星生長現(xiàn)象”，且無溶血現(xiàn)象，即可做出較為準(zhǔn)確的判斷。

另外，當(dāng)分離到副豬嗜血桿菌樣細(xì)菌時(shí)，必須對(duì)其作細(xì)致的生化鑒定，將之與其它不溶血的NAD依賴細(xì)菌如吲哚放線桿菌、豬放線桿菌和小放線桿菌等區(qū)別開。

2 診斷

2.1 臨床及病理變化

臨床癥狀取決于炎性損傷的部位，在高度健康的豬群，發(fā)病很快，接觸病原后幾天內(nèi)就發(fā)病。臨床癥狀包括發(fā)熱、食欲不振、厭食、反應(yīng)遲鈍、呼吸困難、咳嗽、疼痛(尖叫)、關(guān)節(jié)腫脹、跛行、顫抖、共濟(jì)失調(diào)、可視黏膜發(fā)紺、側(cè)臥、消瘦和被毛凌亂，隨之可能死亡。急性感染后可能留下后遺癥，即母豬流產(chǎn)、公豬慢性跛行。即使應(yīng)用抗生素治療感染母豬，分娩時(shí)也可能引發(fā)嚴(yán)重疾病，哺乳母豬的慢性跛行可能引起母性行為極端弱化。

剖檢肉眼可見的損傷主要是在單個(gè)或多個(gè)漿膜面，可見漿液性和化膿性纖維蛋白滲出物，這些漿膜包括腹膜、心包膜和胸膜，這些損傷也可能波及腦膜和關(guān)節(jié)表面，尤其是腕關(guān)節(jié)和跗關(guān)節(jié)。在顯微鏡下觀察滲出物，可見纖維蛋白、嗜中性粒細(xì)胞和較少量的巨噬細(xì)胞。副豬嗜血桿菌不大可能引起急性敗血癥，在尚未出現(xiàn)典型的漿膜炎時(shí)就呈現(xiàn)發(fā)紺、皮下水腫和肺水腫，甚至死亡。另據(jù)報(bào)道，副豬嗜血桿菌還可能引起筋膜炎和肌炎，以及化膿性鼻炎。

2.2 實(shí)驗(yàn)室診斷

副豬嗜血桿菌的血清學(xué)診斷結(jié)果不一致并且不準(zhǔn)確。補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CF)和間接血凝試驗(yàn)(IHA)，以及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)已用于檢測(cè)副豬嗜血桿菌的抗體，最近出現(xiàn)的PCR診斷方法進(jìn)一步提高了從臨床樣品中檢測(cè)副豬嗜血桿菌的靈敏性。

尹秀鳳等通過反應(yīng)條件的優(yōu)化、特異性和敏感性的測(cè)定,建立了一種快速、簡便、準(zhǔn)確的PCR方法,用于檢測(cè)副豬嗜血桿菌。PCR擴(kuò)增片段大小為822bp,最小檢測(cè)量為1080個(gè)HPs。

林雪玲等從養(yǎng)豬場(chǎng)送檢的豬肺病料中分離到3株疑似副豬嗜血桿菌可疑菌株，在細(xì)菌學(xué)鑒定基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)合成3對(duì)引物,分別以3株分離菌株的DNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,結(jié)果均擴(kuò)增出822 bp、824bp和1.9kb的預(yù)期特異性條帶。設(shè)計(jì)優(yōu)化PCR反應(yīng)程序,建立HPS PCR檢測(cè)方法,并應(yīng)用于臨床病料檢測(cè)。結(jié)果表明，所建立的HPSPCR檢測(cè)方法特異與敏感性高、適用性強(qiáng),可應(yīng)用于HPS感染的診斷和檢測(cè)。

3 疫苗研制

商業(yè)疫苗或自家疫苗的使用可以控制副豬嗜血桿菌感染，但是也有使用滅活菌苗預(yù)防失敗的事例，這可能是由于致病菌株與疫苗菌株血清型不同因而缺乏交叉保護(hù)。雖然交叉保護(hù)是對(duì)商用滅活疫苗的基本要求，但是菌株特異性滅活菌苗可能因?yàn)樨i群中存在不止一種菌株或血清型而缺乏效力，也可能因?yàn)楹髞碡i群中引入了新的菌株而失去效力。由于副豬嗜血桿菌血清型的多樣性以及占很大比例的不能分型菌株，菌株毒力的差異，以及當(dāng)前對(duì)保護(hù)性抗原和毒力因子缺乏深刻的認(rèn)識(shí)，還不可能有一種滅活菌苗同時(shí)對(duì)豬所有的致病株產(chǎn)生交叉保護(hù)力。研制具有交叉保護(hù)的疫苗是預(yù)防和控制副豬嗜血桿菌病的必然要求和大勢(shì)所趨。

蔡旭旺研制出副豬嗜血桿菌病滅活疫苗，接種豬無不良反應(yīng)，不引起食欲減退和明顯的體溫升高，注射部位也無炎癥反應(yīng)；疫苗用于預(yù)防豬的多發(fā)性漿膜炎與關(guān)節(jié)炎具有顯著的效果；仔豬按擬定的免疫程序免疫后產(chǎn)生的抗體水平高，持續(xù)時(shí)間長，免疫期可達(dá)6個(gè)月以上。

王艷研制的副豬嗜血桿菌油乳劑滅活疫苗物理性狀穩(wěn)定，安全性良好，并具有較好的免疫保護(hù)效力。含菌數(shù)為8.76×108CFU/頭副豬嗜血桿菌油乳劑滅活疫苗首次免疫后第7天即可檢測(cè)到ELISA抗體，首免后35天ELISA抗體水平達(dá)高峰，首免后5周可有效保護(hù)免疫豬免受同源副豬嗜血桿菌菌株攻毒發(fā)病。

鄧曉霞等小群試驗(yàn)和較大面積推廣應(yīng)用結(jié)果表明，在規(guī)模化養(yǎng)豬和農(nóng)村養(yǎng)豬戶中，對(duì)懷孕后期母豬產(chǎn)前2～3周肌肉注射副豬嗜血桿菌病滅活疫苗2mL，其產(chǎn)下的仔豬于14～21日齡每頭肌肉注射副豬嗜血桿菌病滅活疫苗1mL，仔豬70日齡時(shí)育成率和增重率明顯提高，說明在本地區(qū)應(yīng)用副豬嗜血桿菌病滅活疫苗預(yù)防副豬嗜血桿菌病效果顯著。

目前，國內(nèi)外廣泛使用的均為滅活疫苗，采用副豬嗜血桿菌多種優(yōu)勢(shì)血清型菌株接種適宜培養(yǎng)基培養(yǎng)，收獲培養(yǎng)菌液，經(jīng)濃縮后加甲醛滅活，與礦物油佐劑混合乳化制成。

4 防治

本病的治療效果不好，在豬場(chǎng)的生產(chǎn)實(shí)踐中，預(yù)防本病暴發(fā)才是上策。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與環(huán)境消毒，減少各種應(yīng)激，在疾病流行期間有條件的豬場(chǎng)仔豬斷奶時(shí)可暫不混群，對(duì)混群的一定要嚴(yán)格把關(guān)，把病豬集中隔離在同一豬舍，對(duì)斷奶后保育豬“分級(jí)飼養(yǎng)”，這樣也可減少PRRS、PCV-2在豬群中的傳播。注意保溫和溫差的變化；在豬群斷奶、轉(zhuǎn)群、混群或運(yùn)輸前后可在飲水中加一些抗應(yīng)激的藥物如維生素C等，同時(shí)在料中添加以上推薦藥物組合可有效防止本病的發(fā)生。如在仔豬斷奶后飼料添加枝原凈質(zhì)量分?jǐn)?shù)100×10-6+金霉素質(zhì)量分?jǐn)?shù)300×10-6+阿莫西林質(zhì)量分?jǐn)?shù)250×10-6或枝原凈質(zhì)量分?jǐn)?shù)100×10-6+氟甲砜霉素質(zhì)量分?jǐn)?shù)100×10-6。

一旦出現(xiàn)嚴(yán)重感染，治愈的可能性很小，藥物治療的意義不大。注射給藥是最好的方式，常采用肌肉注射氨芐青霉素、阿莫西林、慶大霉素等，并配合地塞米松進(jìn)行治療。大多數(shù)HPS也對(duì)氟喹諾酮類，如諾氟沙星、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星等，以及頭孢菌素、四環(huán)素、慶大霉素和增效磺胺類藥物敏感，但對(duì)紅霉素、氨基糖苷類、壯觀霉素和潔霉素有抵抗力。

在豬副嗜血桿菌病嚴(yán)重的豬場(chǎng)必要時(shí)可對(duì)豬群進(jìn)行免疫，由于本病的血清型多，商品苗效果不確定，自家苗有一定預(yù)防效果；沒條件的也可選用豬副嗜血桿菌多價(jià)滅活苗進(jìn)行免疫；使用前使疫苗平衡至室溫并充分搖勻，頸部肌肉注射。不論豬只大小，每次均肌肉注射1頭份，2mL/頭份。推薦免疫程序?yàn)椋悍N公豬每半年接種1次；后備母豬在產(chǎn)前8～9周首免，3周后二免，以后每胎產(chǎn)前4～5周免疫1次；仔豬在2周齡首免，3周后二免。 □

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