■ 王 玲 李宏勝 王正兵 嚴作庭 苗小樓 陳炅然 祁光紅 肖俊武 張繼良中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所新獸藥工程重點開放實驗室甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 甘肅荷斯坦奶牛繁育中心 甘肅省白銀市白銀區(qū)獸醫(yī)局 天水市秦城區(qū)動物檢疫站

奶牛乳房炎是由物理、化學(xué)或微生物等因素刺激奶牛乳腺所引發(fā)的一種炎癥反應(yīng)，其中多種病原微生物的感染是引起奶牛乳房炎的主要病因，是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴重的一種疾病，特別是隱性乳房炎，除導(dǎo)致奶牛產(chǎn)奶量和牛奶質(zhì)量下降，醫(yī)療費用增加外，還可能傳染給其它奶牛，甚至導(dǎo)致慢性感染奶牛的淘汰和死亡[1～3]。由于奶牛隱性乳房炎的病因復(fù)雜，隱蔽性強，因此對隱性乳房炎進行監(jiān)測是奶牛場最重要的工作之一。

我國對不同地區(qū)奶牛場的患牛奶樣進行細菌分離與藥敏試驗，對奶牛乳房炎的防治起到了積極作用，但由于病原菌與環(huán)境和牛場管理密切相關(guān)，因此各地區(qū)、不同時間及不同奶牛群的感染情況各不相同，分離菌的種類往往呈現(xiàn)地區(qū)差異[4～8]。本研究對部分省市成年泌乳牛進行乳房炎病因及發(fā)病情況進行了調(diào)查，并采集臨床患病奶牛的乳樣進行細菌學(xué)檢查，旨在為奶牛乳房炎的防治提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查時間及地點

2009年7 月～2010年7月，對甘肅、寧夏、武漢各地的奶?？萍紙@區(qū)、養(yǎng)殖小區(qū)、繁殖示范園區(qū)、奶產(chǎn)業(yè)核心區(qū)及部分農(nóng)戶的近3000頭奶牛進行奶牛乳房炎發(fā)病情況調(diào)查，采集患牛奶樣，并查閱病牛記錄，統(tǒng)計發(fā)病情況，觀察飼養(yǎng)管理、擠奶衛(wèi)生、養(yǎng)殖環(huán)境狀況，了解飼養(yǎng)管理水平，詢問疾病防治措施及治療手段。

1.2 試驗對象

采集臨床患病奶牛及部分泌乳期隱性乳房炎的奶樣，樣品采集參照本實驗室制定的方法及步驟。臨床型乳房炎病牛選擇出現(xiàn)乳房發(fā)紅、發(fā)熱、腫脹、有痛感癥狀，且乳汁性狀發(fā)生改變、部分奶樣帶血的奶牛；隱性乳房炎病牛選擇LMT（蘭州乳房炎診斷試驗）診斷液檢測陽性的奶牛。采樣前病牛均未進行過抗菌素藥物治療。

1.3 采樣方法

用溫水及消毒液（0.2%新潔爾滅等）洗凈乳房和乳頭，酒精棉球擦拭乳頭及手，棄去頭3把奶，以排除一些污染的雜菌。采集奶樣至無菌血瓊脂斜面采樣管中，每頭奶牛從同一個發(fā)病乳區(qū)取樣。標明牛號、日期、牛場，樣品至冰盒中儲存，盡快送檢。

1.4 細菌分離、培養(yǎng)

挑取少許奶樣接種營養(yǎng)肉湯，進行增菌培養(yǎng)，置37℃培養(yǎng)24h。生長良好者再涂劃綿羊血瓊脂平板，置37℃培養(yǎng)24h，記錄細菌菌落形態(tài)及溶血情況。挑取單個菌落，接種營養(yǎng)肉湯做純培養(yǎng)，置37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h。一般細菌經(jīng)過24h培養(yǎng)后，均可生長良好，但諾卡氏菌、棒狀桿菌等，需要培養(yǎng)36h以上。當乳腺出現(xiàn)明顯變化，乳汁異常，按此常規(guī)培養(yǎng)，始終不見長菌，又沒有抗菌藥治療等干擾細菌因素存在時，則應(yīng)考慮在CO2厭氧條件下培養(yǎng)，或用其它培養(yǎng)基進行支原體、真菌的檢驗。

將純培養(yǎng)得到的不同形態(tài)及生長特性的細菌菌液，涂片、革蘭氏染色、鏡檢，涂片純凈無雜菌者，血斜面保存。

1.5 生化特性鑒定[9～10]

1.5.1 葡萄球菌

將在肉湯中生長渾濁一致、鏡檢結(jié)果為葡萄球菌屬的菌株，參考《奶牛乳房炎防治技術(shù)指南（試行）》規(guī)定中的4項生化培養(yǎng)鑒定指標：有氧甘露醇，無氧甘露醇，過氧化氫酶及兔血漿凝固酶試驗做進一步鑒定，判定結(jié)果。

1.5.2 鏈球菌

菌株接觸酶結(jié)果陰性，在血瓊脂平板中菌落較小、溶血，且鏡檢成不同程度鏈狀，擬定為鏈球菌屬。根據(jù)《常見細菌系統(tǒng)鑒定手冊》，選擇如下生化試驗：七葉苷，馬尿酸鹽，0.1%牛乳美蘭，甘露醇，山梨醇，水楊苷，甘油，血清菊糖，6.5%高鹽肉湯，pH值為9.6的肉湯，膽汁，CAMP試驗，區(qū)分無乳鏈球菌、停乳鏈球菌和乳房鏈球菌。

1.5.3 G—桿菌

肉湯渾濁，菌落和菌體形態(tài)、顏色基本符合各屬細菌特征，且涂片純凈、不見雜菌時，按G—菌的各項特征進行生化鑒定。

2 結(jié)果與分析

絕大部分樣本都只分離到一種優(yōu)勢細菌，但少數(shù)乳房炎樣本能分離到2種細菌，為混合感染；無乳鏈球菌、金黃色葡萄球菌、停乳鏈球菌、大腸桿菌和乳房鏈球菌的檢出率較高，其中以鏈球菌和金黃色葡萄球菌居多，約占病原菌總數(shù)的90%以上。其次是表皮葡萄球菌、化膿鏈球菌、乳鏈球菌等環(huán)境性病原菌，它們的檢出率也比較高，個別地區(qū)出現(xiàn)差異可能與奶牛場的衛(wèi)生條件和季節(jié)、氣候因素有關(guān)。

本次流行病學(xué)調(diào)查地區(qū)包括甘肅蘭州、白銀、臨澤及甘州區(qū)、天水，湖北武漢黃陂區(qū)，寧夏吳忠、中衛(wèi)、中寧、銀川等地奶牛養(yǎng)殖示范區(qū)。試驗結(jié)果表明，鏈球菌、葡萄球菌和大腸桿菌仍是奶牛乳房炎的主要病原菌，該結(jié)果與Radostitsn OM[11～12]等描述的奶牛乳房炎主要病原菌一致，表明引起奶牛乳房炎的主要病原菌，其種類變化不明顯。但是在總體不變的情況下，不同地區(qū)及奶牛群還存在很大的地域差異性，如蘭州地區(qū)的3個奶牛場，其中2個奶牛場以無乳鏈球菌感染為主，另1個以金黃色葡萄球菌和停乳桿菌為主，且細菌混合感染有上升趨勢。近幾年，該地區(qū)表皮鏈球菌、大腸桿菌、乳房鏈球菌的檢出率較以往有所增加，無乳鏈球菌較以往有所下降。這說明奶牛飼養(yǎng)的環(huán)境條件較差，使乳中細菌數(shù)量上升，影響牛奶的品質(zhì)，對奶牛乳房炎的發(fā)生都會帶來直接或間接的影響。因此，乳房炎患牛乳樣中分離菌的種類分布呈現(xiàn)地方差異，很可能與各奶牛場優(yōu)勢菌群的流行病學(xué)差異性有關(guān)，當然與各奶牛場的衛(wèi)生管理及治療措施存在差異也有關(guān)。

3 發(fā)病率及其影響因素

3.1 病原菌感染分析

隨著乳房炎綜合防治及各種治療藥物的廣泛使用，乳房炎主要病原菌區(qū)系分布也在不斷變化。據(jù)以往報道[13～17]，我國新疆、上海、南寧、安徽、成都、石家莊等地區(qū)主要以金黃色葡萄球菌為主，無乳鏈球菌和大腸桿菌次之；甘肅、內(nèi)蒙古、天津等地以無乳鏈球菌、大腸桿菌和金黃色葡萄球菌為主；湖北武漢東西湖地區(qū)以停乳鏈球菌的分離率最高，而湖北宜昌夷陵地區(qū)則以金黃色葡萄球菌和無乳鏈球菌為主；上海十一牧場報道了肺炎克雷伯氏菌引起的急性乳房炎，在短期內(nèi)蔓延至全牛群；大腸桿菌性乳房炎多見于高產(chǎn)奶牛及產(chǎn)后泌乳高峰期，臨床癥狀明顯。

3.2 年齡和胎次

隨著年齡和胎次的增加，奶牛乳房炎的發(fā)病率呈上升趨勢，7～8歲時發(fā)病率達到高峰， 隨后呈下降趨勢，以第三季度與第三四胎發(fā)病率最高。一般來說[18]，乳房炎致病菌特別是無乳鏈球菌會隨著奶牛年齡的增加而增加，因此，7歲齡奶牛幾乎都有一個以上乳區(qū)患乳房炎。由于隨著奶牛年齡的增加，擠奶次數(shù)多、時間長，乳頭括約肌松弛，閉合不嚴，病原微生物容易侵入，此時為產(chǎn)奶高峰，乳房負擔重，導(dǎo)致發(fā)病率增高。而7～8歲后隨著產(chǎn)奶量的逐漸降低，乳房負擔隨之減輕，因此發(fā)病率有下降趨勢。

3.3 產(chǎn)奶量和泌乳時間

奶牛乳房炎的發(fā)病率隨產(chǎn)奶量的增加、泌乳時間的延長而增高，并且乳房下垂者多發(fā)。第三、四泌乳月與第九泌乳月的奶牛易感性較強。泌乳時間長會導(dǎo)致奶牛的免疫力下降，乳房受損機會增加，同時易感染病原菌，因此使發(fā)病率升高。

3.4 季節(jié)和環(huán)境因素

奶牛乳房炎的發(fā)病率存在著季節(jié)性差異，不同季節(jié)和月份奶牛隱性乳房炎的發(fā)病差異極顯著。夏季氣溫高，濕度大，天氣悶熱，奶牛體質(zhì)下降，加之牛舍環(huán)境衛(wèi)生、通風差，牛床潮濕，飼養(yǎng)密度高、運動場所小，病原菌極易大量繁殖并傳播，故乳房炎發(fā)生率明顯高于其它季節(jié)；而冬季氣候寒冷，細菌不易繁殖，乳房炎發(fā)病率相對較低。同一季節(jié)，華中地區(qū)較西北地區(qū)乳房炎的發(fā)病率高。因此，保持牛舍內(nèi)外清潔、牛體的衛(wèi)生，避免擠奶過程中的交叉感染，是預(yù)防乳房炎的重要措施。

3.5 擠奶技術(shù)

擠奶技術(shù)不當會使乳頭粘膜及上皮受到損傷，機器擠奶時間過長，負壓過高或抽動過速，也能損傷乳頭皮膚和粘膜。擠奶前未洗凈手，乳房內(nèi)蓄積未擠凈乳汁等都能給細菌侵入乳房創(chuàng)造條件。調(diào)查表明，機器擠奶的發(fā)病率較手工擠奶發(fā)病率高，這是因為機器的清洗消毒不徹底或機器性能不穩(wěn)定引起，如頻率或壓力忽高忽低，更容易損傷乳房。因此機器擠奶前應(yīng)嚴格做好擠奶機的管道、乳杯及其內(nèi)鞘的清洗消毒，先擠健康奶牛，后擠患病牛；手工擠奶應(yīng)盡量縮短擠奶時間。掌握擠奶技術(shù)、熟練擠奶和按規(guī)范程序操作十分重要。

3.6 其它

奶牛乳房炎發(fā)病率與乳區(qū)、飼養(yǎng)管理方式、遺傳因素等也有相關(guān)性；其它包括乳頭及乳房外傷，臨床型乳房炎未能采取有效的藥物治療，未能及時淘汰久治不愈的慢性臨床型乳房炎奶牛。因此，及早發(fā)現(xiàn)并治療奶牛乳房炎，減少傳染源，定期進行隱性乳房炎監(jiān)測也是很重要的。

4 預(yù)防和治療建議

奶牛乳房炎的防治是一個系統(tǒng)工程，在采取科學(xué)治療的同時，必須堅持積極的綜合性防治措施。

4.1 加強飼養(yǎng)管理，搞好環(huán)境衛(wèi)生

環(huán)境的清潔是預(yù)防乳房炎的關(guān)鍵。保持牛舍清潔干燥，做到定期清掃和消毒，牛床墊草定期更換、消毒，保持干燥，運動場保持平整、干燥、排水通暢[19]。夏季、多雨季節(jié)要及時消除積水，增加消毒次數(shù)，消滅蚊蠅；高溫季節(jié)要注意防暑降溫，保證牛舍通風。要保持牛體清潔，特別注意保持后肢、尾部和乳房的衛(wèi)生。根據(jù)奶牛的營養(yǎng)需要，注意規(guī)范化飼養(yǎng)，以奶定料，維持機體最佳生理功能，保持內(nèi)外環(huán)境穩(wěn)定，南方地區(qū)應(yīng)控制泌乳期奶牛青飼料和多汁飼料的飼喂量。

4.2 注意擠奶衛(wèi)生，規(guī)范擠奶操作

定期消毒和維修擠奶設(shè)備，減少各種外傷因素和應(yīng)激反應(yīng)。遵守擠奶衛(wèi)生程序，擠奶前認真按摩乳房，擦洗乳房用的溫水要勤換，保持清潔；擠奶后用毛巾擦干，消毒乳頭，每次都要把奶擠凈，以減少乳房負擔。每次擠奶前后進行藥浴，藥浴乳頭是控制乳房炎較有效的措施，在環(huán)境衛(wèi)生較差的牛場實行這一程序更為必要。常用藥物有洗必泰、新潔爾滅等，以0.3%～0.5%的洗必泰效果最佳。北方地區(qū)冬季擠奶后，可用乳頭用消毒油膏（如當歸護乳膏）涂擦乳頭，不僅能消毒，還可防止乳頭凍傷。

4.3 監(jiān)測泌乳期牛群，加強科學(xué)飼養(yǎng)，減少應(yīng)激

應(yīng)用乳房炎快速診斷液（LMT）定期檢測泌乳牛群，對患隱性乳房炎的強陽性乳區(qū)及時給予治療，避免繼發(fā)臨床型乳房炎；不定期地采集乳房炎病乳進行細菌學(xué)檢查、鑒定，并依據(jù)主要致病菌的藥物敏感結(jié)果，選擇敏感的藥物和消毒劑對癥治療，可顯著提高乳房炎防治效果；及時淘汰久治不愈的臨床性乳房炎病牛，以減少傳播途徑。在飼養(yǎng)過程中要注意微量元素和維生素的添加，如每天每頭奶牛日糧中補硒2mg或維生素E 0.74mg，以提高奶牛的抗病能力和生產(chǎn)能力，有效控制和降低乳房炎的發(fā)生。

4.4 接種疫苗，注意干奶期乳房炎的防治

接種奶牛乳房炎多聯(lián)苗能有效預(yù)防乳房炎，并且無藥物殘留。疫苗免疫對預(yù)防乳房炎有一定的作用，但由于現(xiàn)階段研發(fā)的疫苗多為單苗，對多種病原菌引起的乳房炎的免疫效果不理想，因此，應(yīng)加強高效、多價乳房炎疫苗的研究。干奶牛治療是目前乳房炎控制方案中消除感染最有效的方式，干奶期是治療乳房炎的最佳時期，此時奶牛無泌乳負擔，可以往乳房內(nèi)注射各種藥物，且不受注射抗生素限制。停奶時在乳室中注入廣譜抗菌藥物，能有效預(yù)防干奶期乳房炎和產(chǎn)后乳房炎的發(fā)生，消除炎癥隱患，避免泌乳期復(fù)發(fā)乳房炎。對患臨床型乳房炎的奶牛應(yīng)先治愈后再停奶。

4.5 中西結(jié)合，靈活用藥

導(dǎo)致奶牛乳房炎的病原菌種類較為復(fù)雜，一類為環(huán)境致病菌，另一類為傳染性病原菌。從本次調(diào)查及其它單位的研究報告來看，我國大型奶牛場主要病原菌主要以傳染性鏈球菌（乳房鏈球菌除外）和葡萄球菌感染為主，其傳播主要通過擠奶過程，如經(jīng)擦洗乳房用的毛巾、水、擠奶員的手及機器擠奶杯等接觸傳播。目前，市場上治療乳房炎的藥物復(fù)雜多樣，抗生素依然是奶牛場治療乳房炎的首選藥物。應(yīng)制定科學(xué)合理的用藥方案，挑選具有抗菌譜廣，抗菌活性強，體內(nèi)分布廣泛，副作用小，與其它抗菌藥無交叉耐藥性等特點的藥物，并應(yīng)注意交換和更替藥物的使用，同時可用中藥配合治療，治療時需靈活掌握。患牛一般經(jīng)兩三次治療，抗生素殘留時間可達6～7天，因此，用同一種抗生素時，連續(xù)用藥不要超過7天，防止產(chǎn)生耐藥性。同時，還應(yīng)積極研發(fā)藥源廣泛，抗菌作用強，毒副作用小的創(chuàng)新抗菌藥物，以開辟新的治療途徑，從而有效控制并防止細菌耐藥性的產(chǎn)生和蔓延。

本次調(diào)查僅對奶牛乳房炎主要致病菌做了探討，由于乳房炎常見病原區(qū)系分布是一個動態(tài)變化的過程，因此，奶牛乳房炎細菌學(xué)檢查將是一個長期的工作。為了全面掌握我國不同地區(qū)奶牛乳房炎的發(fā)病規(guī)律及病原特點，需進一步對細菌血清型、耐藥性、致病性及免疫原性作深入研究，以便為指導(dǎo)臨床合理用藥，研制奶牛乳房炎多聯(lián)苗等生物制劑奠定基礎(chǔ)。總之，奶牛乳房炎病因復(fù)雜，臨床變化多樣，臨床治療藥品繁多，在實際生產(chǎn)中應(yīng)當貫徹“預(yù)防為主，防重于治，防治結(jié)合”的方針，最大限度地減少乳房炎對奶牛養(yǎng)殖業(yè)造成的損失。同時，在奶牛乳房炎研究上要樹立復(fù)雜多變的觀念，注重獸醫(yī)臨床研究與實踐，這將是今后提高奶牛乳房炎防治效果的可行之路。在今后的工作中，對乳房炎的誘因和發(fā)病機制還需要進行更深入的研究，操作簡便、快捷、準確的檢測方法與療效顯著、特異性強、無藥物殘留的基因工程藥物是控制乳房炎的發(fā)展方向。■

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