喬嬋,陳星,張艷菊,萬(wàn)秀清,黃磊,郭兆奎,李麗杰,顏培強(qiáng)

(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué),哈爾濱 150030;2.牡丹江煙草科學(xué)研究所,黑龍江 牡丹江 157011;3.牡丹江煙葉公司;4.牡丹江鐵路公安處)

煙草角斑病[Pseudomonas syringae pv.tabaci(Wolf et al.)Young et al.]是煙草上常見(jiàn)的細(xì)菌性病害[1],是制約煙葉生長(zhǎng)的障礙因素之一,全國(guó)烤煙病害普查[2]證實(shí),煙草角斑病在我國(guó)各主產(chǎn)煙區(qū)均有發(fā)生。近些年來(lái)各地角斑病漸趨嚴(yán)重[3],給煙葉生產(chǎn)帶來(lái)較大的損失。目前,煙葉生產(chǎn)中煙草角斑病防治仍然以化學(xué)農(nóng)藥為主,由于化學(xué)農(nóng)藥殘留、病原菌小種抗藥性等問(wèn)題的日益突出,人們開(kāi)始重視生防菌的篩選和使用,以此來(lái)防治植物的病害[4-5]。熒光假單胞菌是植物根際促生細(xì)菌(Plant Grow th Promoting Rhizobacteria,PGPR)具有分布廣、數(shù)量多、營(yíng)養(yǎng)需要簡(jiǎn)單、繁殖快、競(jìng)爭(zhēng)定殖力強(qiáng)的特點(diǎn),并能通過(guò)產(chǎn)生多種次生代謝物及有效的根際定殖防治植物病害,成為植物生防控制的重要研究對(duì)象[6-8]。熒光假單胞菌PF7-5(CGMCC No.2069)經(jīng)鑒定對(duì)煙草細(xì)菌病害(野火病)有很好的防治效果[9],本試驗(yàn)通過(guò)PF7-5對(duì)煙草角斑病的室內(nèi)抑菌和田間防效試驗(yàn),證實(shí)該生防菌對(duì)煙草角斑病具有一定的抑制作用和防效,為煙草角斑病的生物防治提供更多的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

煙草品種:K326(感煙草角斑病[10]);煙草角斑病菌:由本所分離、鑒定并保存;常規(guī)化學(xué)試劑等購(gòu)于上海博彩生物科技有限公司;試驗(yàn)于牡丹江煙草科學(xué)研究所及實(shí)驗(yàn)場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 方法

1.2.1 熒光假單胞桿菌PF7-5的篩選和鑒定。熒光假單胞桿菌PF7-5由牡丹江煙草科學(xué)研究所高新技術(shù)室篩選及保存,篩選及鑒定按照文獻(xiàn)[11]的方法,與文獻(xiàn)[11]中的G20-9為同一菌株。

1.2.2 PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草病原細(xì)菌角斑病的抑菌室內(nèi)試驗(yàn)[12-13]。本試驗(yàn)中,熒光假單胞桿菌 PF7-5和角斑病菌的培養(yǎng)使用 LB培養(yǎng)基。首先將熒光假單胞桿菌PF7-5、普通細(xì)菌和角斑病菌分別置于LB液體培養(yǎng)基中25℃震蕩培養(yǎng)3d,然后熒光假單胞桿菌PF7-5發(fā)酵液和普通細(xì)菌在2000r離心后10min獲得代謝產(chǎn)物;最后將熒光假單胞桿菌PF7-5在80℃15min滅活,同時(shí)對(duì)普通細(xì)菌的代謝產(chǎn)物在85℃15min下滅活。抑菌試驗(yàn)進(jìn)行如下處理:

A:PF7-5代謝產(chǎn)物10m L+100μL角斑病(煙草病原細(xì)菌)+40m L液體LB;

B:農(nóng)用鏈霉素+100μL角斑病+50m L液體LB;

C:角斑凈+100μL角斑病+50m L液體LB;

D(CK1):普通細(xì)菌代謝產(chǎn)物10 m L+100μL角斑病+40m L液體LB;

E(CK2):100μL角斑病+50 m L液體LB。

每處理3次重復(fù)。

各處理25℃過(guò)夜振蕩培養(yǎng)1d。次日測(cè)OD600的吸光值(用各處理的備用樣進(jìn)行調(diào)零),計(jì)算抑菌率。

抑菌率=(1-(OD處理/OD對(duì)照)×100。

1.2.3 PF7-5對(duì)煙草病原細(xì)菌角斑病的抑菌田間試驗(yàn)。

試驗(yàn)共設(shè)5個(gè)處理,3次重復(fù),每重復(fù)12株。選擇有病史煙田,進(jìn)行接種,并噴霧保持田間濕度。煙草田間旺長(zhǎng)期接種煙草角斑病菌菌液,接種當(dāng)天進(jìn)行1次藥劑處理。隨后,每隔4天進(jìn)行1次藥劑的噴施,一共3次。田間跟蹤調(diào)查煙草角斑病發(fā)病情況,以葉片為單位進(jìn)行調(diào)查,每處理調(diào)查12株煙,每株留葉16片。分別記載發(fā)病株數(shù)及病級(jí),統(tǒng)計(jì)病情指數(shù),計(jì)算防治效果。并調(diào)查各參試藥劑對(duì)煙草的影響,記載藥害情況。

煙草野火病或角斑病病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)[14](以葉片為單位):

0級(jí):全葉無(wú)病。

1級(jí):病斑面積占葉片面積的1%以下;

3級(jí):病斑面積占葉片面積的2%～5%;

5級(jí):病斑面積占葉片面積的2%～10%;

7級(jí):病斑面積占葉片面積的11%～20%;

9級(jí):病斑面積占葉片面積的21%以上。

病情指數(shù)=[∑(病害等級(jí)×該級(jí)葉數(shù))/(調(diào)查葉數(shù)×最嚴(yán)重等級(jí))]×100

抑菌效果=(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100%

2 結(jié)果與討論

2.1 PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草病原細(xì)菌角斑病的室內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)效果

結(jié)果見(jiàn)表1。試驗(yàn)結(jié)果表明:熒光假單胞桿菌PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草角斑病的抑菌效果達(dá)到64.35%,化學(xué)藥劑角斑凈的防效最好,達(dá)到96.39%,農(nóng)用鏈霉素的防治效果最差,達(dá)到39.73%。說(shuō)明熒光假單胞桿菌PF7-5代謝產(chǎn)物中含有抑制煙草角斑病菌生長(zhǎng)的抑菌物質(zhì),對(duì)煙草角斑病的防治有一定的效果。

表1 熒光假單胞桿菌PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草角斑病的抑菌效果

2.2 PF7-5對(duì)煙草病原細(xì)菌角斑病的田間抑菌實(shí)驗(yàn)效果

結(jié)果見(jiàn)表2。試驗(yàn)結(jié)果表明:PF7-5①防效最高達(dá)87.34%,其次為PF7-5②防效高達(dá)79.13%,然后是氫氧化銅防效也達(dá)到78.31%,防效相比最差的是農(nóng)用鏈霉素,但是4個(gè)處理的防效都極顯著高于對(duì)照CK;4個(gè)處理之間的防效沒(méi)有顯著差異。由此可以得出,生防菌PF7-5對(duì)于煙草角斑病的防治有很好的效果,而且略好于生產(chǎn)上常用的化學(xué)藥劑農(nóng)用鏈霉素和生物藥劑氫氧化銅。

表2 PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草病原細(xì)菌角斑病的田間抑菌實(shí)驗(yàn)效果

3 結(jié)果與討論

從室內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看:熒光假單胞桿菌PF7-5代謝產(chǎn)物對(duì)煙草角斑病具有一定的抑制效果;從田間的試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看:PF7-5對(duì)煙草角斑病的防治有很好的效果,略好于生產(chǎn)上常見(jiàn)的化學(xué)藥劑和生物農(nóng)藥。本試驗(yàn)田間試驗(yàn)過(guò)程中的角斑病病原菌接種量很大,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)實(shí)際生產(chǎn)中田間自然病菌數(shù)量,因此真正田間應(yīng)用時(shí)效果可能更好。通過(guò)試驗(yàn),我們推薦生防菌田間使用時(shí)應(yīng)該在煙草團(tuán)棵和旺長(zhǎng)期噴施3次,而且在發(fā)病前,這樣效果會(huì)更好。該菌株為新型生物農(nóng)藥的開(kāi)發(fā)和創(chuàng)制奠定了基礎(chǔ),為煙草角斑病的防治提供了高效、無(wú)污染、安全的措施,對(duì)發(fā)展煙葉的低殘留和無(wú)公害具有重要的意義。

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