樊小波

腫瘤生長是重要的生物學(xué)行為，且與其惡性程度及預(yù)后密切相關(guān)。癌胚抗原相關(guān)細胞黏附分子1（carcino-embryonic antigen related cellular adhesion molecule 1，CEACAM1）是一種細胞表面跨膜糖蛋白，是癌胚抗原家族的一個成員，屬于免疫球蛋白家族黏附分子[1]，近來的研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤血管生成有關(guān)[2]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是公認的最重要的血管生成因子[3]。CD105作為一種新生血管的細胞黏附分子，能調(diào)節(jié)細胞對轉(zhuǎn)化生長因子的反應(yīng)，在增殖的腫瘤血管內(nèi)皮細胞中表達較高，而在正常血管中表達較少。本研究采用免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測乳腺癌及正常乳腺組織中CEACAM1、VEGF及CD105標(biāo)記的血管密度表達情況，探討其關(guān)系，旨在為探討腫瘤的生物學(xué)行為提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集2006年1月至2006年12月在瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院行乳腺癌手術(shù)的患者，共135例，患者均為女性，年齡34～65歲，平均46.3歲。其中浸潤性導(dǎo)管癌118例，浸潤性小葉癌12例，髓樣癌5例。術(shù)前均未進行任何治療。同時選取癌旁正常乳腺組織60例作為對照。

1.2 主要試劑及免疫組織化學(xué)方法

免疫組織化學(xué)采用S-P法。主要步驟：將5μm切片脫蠟水化后，用PBS沖洗3次，用檸檬酸緩沖液高溫高壓抗原修復(fù)及EDTA抗原熱修復(fù)，加1滴過氧化物阻斷溶液（試劑A），室溫下孵育10min。PBS沖洗后加1滴非免疫性動物血清（試劑B），室溫下孵育10min，加1滴第一抗體，4℃過夜，PBS沖洗，加1滴生物素標(biāo)記的第二抗體（試劑C），室溫下孵育10min，PBS沖洗，加1滴鏈霉菌抗生物素-過氧化物酶溶液（試劑D），室溫下孵育10min，PBS沖洗后，每張切片加2滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察，經(jīng)蘇木素復(fù)染、中性樹膠封固。實驗均由同一技術(shù)人員完成，實驗過程中嚴格質(zhì)控。

表1 CEACAM1、VEGF和CD105標(biāo)記的血管密度在乳腺癌及正常乳腺組織中的表達

表2 乳腺癌中CEACAM1、VEGF和血管密度在不同臨床病理特征中的表達

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

CEACAM1陽性染色為棕黃色顆粒樣著色，定位于細胞膜，VEGF陽性染色為棕黃色顆粒樣著色，定位于細胞質(zhì)。隨機選取10個高倍視野（400倍），計算每個視野內(nèi)100個腫瘤細胞中陽性染色的細胞數(shù)，即陽性細胞的百分數(shù)，并取平均值。腫瘤內(nèi)微血管密度計數(shù)：確定棕色染色的內(nèi)皮細胞或細胞叢為一個血管，先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內(nèi)血管密度最高處，也即熱點區(qū)。再在高倍鏡下，以與周圍腫瘤細胞和結(jié)締組織成分明顯區(qū)別的任何一個棕色染色的內(nèi)皮細胞或細胞叢為一個血管，只要結(jié)構(gòu)不相連，其分支結(jié)構(gòu)也作為一個血管計數(shù)。記錄5個視野內(nèi)的微血管數(shù)，取其平均數(shù)作為該患者的血管密度值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SAS 6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，定量資料的實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組間比較采用t檢驗，定性資料比較采用χ2檢驗，相關(guān)分析應(yīng)用線性相關(guān)分析，均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CEACAM1、VEGF和CD105標(biāo)記的血管密度在乳腺癌及正常乳腺組織中的表達

CEACAM1在乳腺癌中表達的陽性率明顯低于正常乳腺組織，VEGF在乳腺癌中表達的陽性率明顯高于正常乳腺組織，CD105標(biāo)記的血管密度在乳腺癌中明顯高于正常乳腺組織（P＜0.05），見表1。

2.2 CEACAM1、VEGF和血管密度在乳腺癌不同臨床病理特征中的表達

乳腺癌中CEACAM1、VEGF表達的陽性率及血管密度在不同腫瘤直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），但與患者的年齡無關(guān)（P＞0.05），見表2。

2.3 CEACAM1、VEGF與CD105在乳腺癌中表達的關(guān)系

乳腺癌中CEACAM1的表達與血管密度呈正相關(guān)（r=0.41，P＜0.05），VEGF的表達與血管密度呈正相關(guān)（r=0.47，P＜0.05），CEACAM1與VEGF表達未見明顯相關(guān)性（P＞0.05）。

3 討 論

惡性腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤內(nèi)新生血管的形成，而VEGF的發(fā)現(xiàn)推動了腫瘤血管生成的研究。在血管生成的研究中，血管新生的標(biāo)志物是研究腫瘤血管生成重要依據(jù)，CD105又名Endoglin，是轉(zhuǎn)化生長因子β受體復(fù)合物成分一，是與增生有關(guān)的內(nèi)皮細胞膜抗原，CD105是現(xiàn)今被人們認為標(biāo)記血管生成的最好標(biāo)志物，在血管新生方面明顯優(yōu)于CD34、Ⅷ因子等血管標(biāo)志物[4]。王升華等[5]認為CEACAM1在結(jié)構(gòu)上同源于癌胚抗原家族成員，有4個Ig樣的細胞外區(qū)域和71個氨基組成的胞漿區(qū)，在腫瘤發(fā)展中具有腫瘤抑制作用。

本研究顯示，乳腺癌中CEACAM1表達的陽性率明顯低于正常乳腺組織，提示CEACAM1在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起抑制作用，而VEGF在乳腺癌中表達的陽性率明顯高于正常乳腺組織，提示VEGF在乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起促進作用，CD105作為特異性的血管標(biāo)志物，其在乳腺癌中的陽性數(shù)量明顯高于正常乳腺組織，提示乳腺癌中新生血管數(shù)量增多，有利于腫瘤的生長。而CEACAM1、VEGF表達的陽性率及血管密度與腫瘤的直徑、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示CEACAM1和VEGF可能參與腫瘤的生長及淋巴道轉(zhuǎn)移。又由于腫瘤的直徑及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)，提示CEACAM1低表達、VEGF和CD105高表達可能提示預(yù)后不良。CEACAM1、VEGF均與CD105標(biāo)記陽性血管密度呈正相關(guān)，提示CEACAM1、VEGF均有促進腫瘤血管生成的作用，本實驗并未發(fā)現(xiàn)CEACAM1和VEGF具有明顯的相關(guān)性，提示兩種蛋白可能不具有明顯的協(xié)同作用，與Oliveira-Ferrer等[6]報道的結(jié)論并不完全一致。腫瘤中CEACAM1的表達可能通過影響細胞支架結(jié)構(gòu)和整合素介導(dǎo)的信號傳遞，參與的血管發(fā)生的激活階段[7]。由本實驗可以得出結(jié)論，CEACAM1可能參與腫瘤生長的抑制作用及血管生成作用，但其并不是通過上調(diào)VEGF實現(xiàn)的，其可能具有特殊的作用通路。

總之，CEACAM1、VEGF在乳腺癌中異常表達，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，并參與腫瘤中血管的新生，聯(lián)合檢測3種蛋白可能對判斷患者的預(yù)后有重要價值。

[1]金呈強,劉仿,王文涓. 癌胚抗原相關(guān)細胞黏附分子1(CEACAM1)的研究進展[J]. 中國癌癥雜志,2008,18(4): 310-314.

[2]呂滿義,紀新強,高占軍.CEACAM1和VEGF在宮頸鱗癌組織中的表達及臨床意義[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床,2008,21(1): 20-22.

[3]卜宏民,王連渠,閆擁軍,等. MMP-2、MMP-9和VEGF在腎癌中的表達與臨床意義[J].中國老年學(xué)雜志,2009,29(13): 1595-1597.

[4]王 ,劉愛東,龐久玲,等. CD105在結(jié)直腸腺癌組織中的表達及意義[J]. 山東醫(yī)藥,2007,47(20): 27.

[5]王升華,紀新強,高占軍. CEACAM1與CD105在子宮內(nèi)膜癌中的表達及意義[J].實用腫瘤學(xué)雜志,2008,22(1): 35-37.

[6]Oliveira-Ferrer L,Tilki D,Ziegeler G,et al. Duar role of carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1 in angiogenesis and invasion of human urinary bladder cancer[J]. Cancer Res,2004,64(24): 8932-8938.

[7]Bamberger AM,Briese J,Gotze J,et al. Stimulation of CEACAM1 expression by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate(TPA) and calcium ionophore A23187 in endometrial carcinoma cells[J].Carcinogenesis,2006,27(3): 483-490.