李 霞，李 繼，張秉華，劉海靜

（陜西省食品藥品檢驗(yàn)所，陜西 西安 710061）

2005年版《中國藥典（二部）》采用紫外分光光度（UV）法測定酮康唑乳膏含量[1]802，樣品處理采用0.1 mol/L的鹽酸水浴加熱提取后用氯仿反復(fù)萃取的方法。也有人采用加內(nèi)標(biāo)高效液相色譜（HPLC）法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[2-3]。按照國家藥典委員會2010年版藥典標(biāo)準(zhǔn)提高工作要求，我所共收集了11個(gè)不同生產(chǎn)廠家的樣品，根據(jù)廠家反映，2005年版《中國藥典（二部）》的含量測定方法操作較復(fù)雜、費(fèi)時(shí)，且損失較大。筆者在試驗(yàn)過程中也發(fā)現(xiàn)，由于各個(gè)廠家生產(chǎn)工藝存在較大差異，有些廠家的樣品在用0.1 mol/L的鹽酸水浴加熱提取后非常難以過濾，且樣品損失較大，方法重現(xiàn)性較差。因此，筆者采用HPLC法對該品種進(jìn)行了含量測定，并簡化了樣品前處理方法，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，方法操作簡單、重現(xiàn)性好、專屬性強(qiáng)。

1 儀器與試藥

Waters Alliance HT液相色譜儀，包括Waters 2487型檢測器；Mettler AE 240型電子天平。乙酸銨、二異丙胺為分析純；甲醇為色譜純；水為超純水；酮康唑?qū)φ掌罚ㄖ袊幤飞镏破窓z定所，批號為0294-9801）；酮康唑乳膏樣品11批，由11個(gè)生產(chǎn)廠家提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Capcell PAK C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：0.5%醋酸銨溶液-0.2%二異丙銨的甲醇溶液（23∶77）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：240 nm；進(jìn)樣量：10μL。在此條件下，色譜圖見圖1，酮康唑峰的保留時(shí)間為5.3 min，理論塔板數(shù)為4082，拖尾因子為1.1。

2.2 溶液制備

取酮康唑?qū)φ掌?.5011 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液，備用。取樣品2.5 g，精密稱定，置燒杯中，加甲醇-氯仿（1∶1）20 mL，置80℃水浴中振搖使溶解，加甲醇-氯仿（1∶1）適量，移至50 mL量瓶中，放冷至室溫，用甲醇-氯仿（1∶1）定容至刻度，搖勻，冰浴中冷卻1 h待基質(zhì)析出后放至室溫，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

耐用性試驗(yàn)：選用了3種品牌的色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，分別為Capcell PAK C18柱 （150 mm ×4.6 mm，5μm），Diamonsil（鉆石）C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）和 Agela Technologies C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）。結(jié)果酮康唑的峰形均良好，理論塔板數(shù)均在2000以上，說明該系統(tǒng)的耐用性較好。

專屬性試驗(yàn)：取空白試劑溶液及陰性對照品溶液，照2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測定。結(jié)果處方中所用輔料及配制樣品所用溶劑對測定結(jié)果均無干擾，說明該方法的專屬性較好（見圖1）。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密吸取2.2項(xiàng)下對照品貯備液，用溶劑逐級稀釋，即得系列質(zhì)量濃度的對照品溶液，依法各進(jìn)樣2次，以峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸?；貧w方程為Y=2 ×107X+143661（r=0.9999），線性范圍為 0.1 ～2.0 mg/mL。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取樣品（廈門金日制藥有限公司，批號為060501）1.25 g，分別精密加入對照品貯備液（10.022 mg/mL）1.5，2.5，3.5 mL，照供試品溶液配制方法制備，每種濃度各配制3份，依法測定。結(jié)果見表1。

表1 酮康唑加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=3）

精密度試驗(yàn)：取對照品溶液（質(zhì)量濃度為1 mg/mL），依法測定酮康唑的峰面積。結(jié)果的 RSD為0.3%（n=6），表明方法的精密度良好。

最小檢測限確定：取一定質(zhì)量濃度的對照品溶液逐級稀釋、進(jìn)樣。結(jié)果按3倍信噪比計(jì)算，酮康唑的最小檢測限為0.2μg/mL。

最小定量限測定：取一定質(zhì)量濃度的對照品溶液逐級稀釋、進(jìn)樣。結(jié)果按10倍信噪比計(jì)算，酮康唑的最小定量限為1.0μg/mL。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批號（廈門金日制藥有限公司，批號為060501）樣品6份，依法測定。結(jié)果酮康唑平均含量為101.1%，RSD 為 1.6%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：同一供試品溶液，分別于24 h內(nèi)每隔2 h進(jìn)樣測定。結(jié)果酮康唑含量的 RSD為0.4%（n=13），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4 樣品含量測定

取11個(gè)廠家各1批樣品，依法測定含量，同時(shí)將新起草的標(biāo)準(zhǔn)和原標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了比較，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（%，n=3）

3 討論

樣品前處理：文獻(xiàn)[2]采用四氫呋喃作為溶劑將乳膏分散后用甲醇稀釋樣品。筆者在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)部分廠家的樣品加四氫呋喃后乳膏無法分散或溶解。根據(jù)文獻(xiàn)[1]，酮康唑原料在氯仿中易溶、在甲醇中溶解，結(jié)合多次試驗(yàn)，最終選擇氯仿-甲醇（1∶1）為提取溶劑，采用80℃水浴溶解并定容后，冰浴1 h后過濾，能有效提取酮康唑和去除基質(zhì)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用新方法所測酮康唑含量比原方法有所提高，且方法操作簡單，回收率、精密度等都較好。

色譜條件確定：曾參考文獻(xiàn)[1]436，采用甲醇-水為流動相進(jìn)行含量測定，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)只有使用Capcell PAK C18柱（150 mm×4.6 mm，5μm）時(shí)，酮康唑的峰形較好，理論塔板數(shù)超過2000，而采用Diamonsil（鉆石）C18柱和Agela Technologies C18柱時(shí)酮康唑的峰形都較差，理論塔板數(shù)根本達(dá)不到2000，說明該流動相的系統(tǒng)耐用性較差，不適合該樣品的含量測定；參照文獻(xiàn)[4-5]，采用0.5%的醋酸銨溶液-甲醇（23∶77）為流動相，發(fā)現(xiàn)酮康唑峰形有拖尾現(xiàn)象，而在甲醇中加入一定量的二異丙胺后，拖尾現(xiàn)象明顯減輕。最終選擇0.5%的醋酸銨溶液-0.2%的二異丙胺的甲醇溶液（23∶77）為流動相，以上述3種型號的柱子為固定相，峰形均較好，理論塔板數(shù)均超過2000；且適當(dāng)改變流動相比例、柱溫及流速，除酮康唑的保留時(shí)間有少許變動外，峰形均較好。最終確定了上述色譜條件。

檢測波長選擇：參照文獻(xiàn)[4-5]酮康唑片劑和洗劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，選擇240 nm為檢測波長，此時(shí)溶劑及輔料均無干擾。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

[2]楊 欣，屈平定，繩金房.HPLC法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中國抗生素雜志，2004，29（7）：401-402.

[3]李文東，龐青云，余 立，等.HPLC法測定酮康唑乳膏中酮康唑含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2007，8（1）：36-38.

[4]WS1-（X-422）-2003Z，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)[S].

[5]WS1-（X-515）-2003Z，國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)[S].