沈華為，易躍能，楊 華

（1.湖南省株洲市人民醫(yī)院，湖南 株洲 412000； 2.湖南漢森醫(yī)藥研究有限公司，湖南 長沙 410008）

鹽酸克林霉素棕櫚酸酯是克林霉素的衍生物，體外無抗菌活性，體內(nèi)經(jīng)酯酶水解形成克林霉素而發(fā)揮抗菌活性，臨床常用于治療呼吸道感染、泌尿道感染、軟組織感染[1-2]，并廣泛用于厭氧菌引起的潰瘍，對各種類型的骨髓炎有明顯效果。為控制本品質(zhì)量，筆者參考相關(guān)文獻[3-4]建立了鹽酸克林霉素棕櫚酸酯膠囊的含量測定方法，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型高效液相色譜儀（安捷倫公司）；Mettler Toledo AL104電子分析天平（瑞士梅特勒公司）。鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對照品（上海紫爵貿(mào)易有限公司，批號為20070405）；鹽酸克林霉素棕櫚酸酯膠囊（湖南漢森醫(yī)藥研究有限公司，批號分別為20080616，20080617，20080618，20080619，20080620，20080621）；甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamond C18柱（150 mm ×4.6 mm，5μm）；流動相：氣溶膠（OT型）-冰醋酸 -醋酸銨 -水 -甲醇（1∶0.77∶1∶20∶480）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：280 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20μL。

2.2 溶液制備

稱取60℃下減壓干燥16 h的對照品適量，精密稱定，置10 mL量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為15 g/L的對照品溶液。取批號為20080616的本品20粒內(nèi)容物，研細，精密稱取適量（約相當(dāng)于克林霉素225 mg），置25 mL量瓶中，加流動相適量，超聲處理20 min，加流動相至刻度，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。取處方比例的輔料（約相當(dāng)于主藥225 mg），置25 mL量瓶中，用流動相稀釋至刻度，過濾，取續(xù)濾液作為陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液各20μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖（圖1）。可見供試品溶液色譜中，鹽酸克林霉素棕櫚酸酯的分離度較好，理論板數(shù)大于4000，且陰性對照無干擾。

專屬性試驗：稱取約相當(dāng)于鹽酸克林霉素棕櫚酸酯150 mg的樣品內(nèi)容物細粉，共4份，分別進行熱破壞（加熱灼燒至褐色）、強酸破壞（加0.1 mol/L鹽酸溶液10 mL，加熱回流20 min，冷卻，過濾，取續(xù)濾液1 mL，用氮氣在40℃下吹干）、強堿破壞（加0.1 mol/L的NaOH 10 mL，加熱回流10 min，冷卻，過濾，取續(xù)濾液1 mL，用氮氣在40℃下吹干）、氧化破壞（加1%雙氧水10 mL，加熱回流10 min，冷卻，過濾，取續(xù)濾液1 mL，用氮氣在40℃下吹干），然后分別取10 mL流動相，將殘渣超聲溶解后過濾，取續(xù)濾液進樣20#L。結(jié)果表明，在各破壞試驗條件下，相鄰雜質(zhì)峰與主峰間分離度均大于1.5，符合規(guī)定。

線性關(guān)系考察：取減壓干燥16 h的對照品適量，用流動相配成 0.75，1.50，3.75，7.50，15.00，30.00 g/L的溶液，精密吸取20#L注入液相色譜儀，記錄色譜圖的主峰面積，以主峰面積為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=204950 X-15086，r=1.0000（n=6）。結(jié)果表明，鹽酸克林霉素棕櫚酸酯質(zhì)量濃度在0.75～30.00 g/L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取2.2項下對照品溶液，注入液相色譜儀中，連續(xù)進樣6次。結(jié)果峰面積的 RSD為0.08%（n=6）。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，在配制 0，2，4，8，10，12 h 時分別進樣。結(jié)果峰面積的 RSD為0.12%（n=6），表明供試品溶液在室溫下12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：取批號為20080616的樣品內(nèi)容物，依法制備供試品溶液并測定含量。結(jié)果平均含量為99.95%，RSD=0.88%（n=6）。

回收率試驗：稱取9份處方量的空白輔料，每份約255 mg，置10 mL量瓶中，分別加入鹽酸克林霉素棕櫚酸酯對照品120，150，180 mg各3份，按供試品溶液制備方法制備溶液并測定含量，計算回收率。結(jié)果見表1。

圖1 高效液相色譜圖

表1 回收率試驗結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取6批樣品，依法制備供試品溶液，測定峰面積，以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果批號為 20080616，20080617，20080618，20080619，20080620，20080621的6批樣品中，克林霉素棕櫚酸酯含量分別為標(biāo)示量的99.38%，99.64%，102.51%，98.48%，98.98%，99.77%。

3 討論

方法學(xué)考察及實際樣品的測定結(jié)果顯示，所用方法操作簡便、專屬性強，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，提高了工作效率，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。6批樣品的含量均在98% ～103%范圍內(nèi)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，考慮到大生產(chǎn)的情況，將本品的含量限度定為90.0%～110.0%。

[1]葉世濤.克林霉素磷酸酯在下呼吸道厭氧菌感染治療中的應(yīng)用[J].白求恩軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，5（3）：160-161.

[2]袁納新，魏 瑩.克林霉素磷酸酯治療下呼吸道感染的臨床療效[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，11（15）：1446.

[3]鄭曦孜，亓連軍.反相高效液相色譜法測定鹽酸克林霉素棕櫚酸酯顆粒的含量[J]. 兒科藥學(xué)雜志，2007，13（6）：38-39.

[4]WS-490（X-421）-95，鹽酸克林霉素棕櫚酸酯標(biāo)準(zhǔn)[S].