王崇丹 扈清云 姜云生 興桂華 王曉帆

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤，近年來發(fā)病有逐漸增加趨勢(shì)，但其發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前認(rèn)為腫瘤的發(fā)生可能是染色體的特定區(qū)域缺失、癌基因的激活和抑癌基因的失活，以及細(xì)胞增殖與凋亡的平衡失調(diào)所致。p15基因是已被公認(rèn)的腫瘤抑制基因[1]，nm23基因是近年來發(fā)現(xiàn)的重要轉(zhuǎn)移抑制基因[2]，有關(guān)兩者與子宮內(nèi)膜癌關(guān)系的研究較少。本研究旨在探討p15基因和nm23基因在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展過程中的作用及其相互關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 收集齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院病理科2005年10月—2008年10月存檔石蠟包埋子宮內(nèi)膜癌組織標(biāo)本60例 ?；颊吣挲g38～72歲，平均（52.03±5.41）歲。子宮內(nèi)膜癌采用1988年FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)：I期40例，II期10例，III期7例，IV期3例；腫瘤浸潤(rùn)肌層深度<1/2者35例，≥1/2者25例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移7例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例；組織學(xué)分級(jí)高分化36例，中分化18例，低分化6例；組織類型腺癌53例，腺鱗癌5例，透明細(xì)胞癌1例，漿液性乳頭狀腺癌1例。另選正常增生期子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本10例作為對(duì)照組，患者年齡40～52歲，平均（49.70±3.02）歲。2組年齡差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1．326，P＝0．189）。

1.2 染色方法 主要試劑有p15鼠抗人單克隆抗體、nm23兔抗人多克隆抗體和即用型免疫組織化學(xué)超敏SP試劑盒（廣譜），均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。所有標(biāo)本均經(jīng)10%福爾馬林溶液固定、石蠟包埋。使用HE染色初步觀察正常子宮內(nèi)膜組織和子宮內(nèi)膜癌組織的病變特點(diǎn)，確定組織類型和病理分級(jí)，篩選入組。SP免疫組織化學(xué)染色按照試劑盒說明書操作，用已知陽(yáng)性切片做陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照，均用微波抗原修復(fù)。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或細(xì)胞核出現(xiàn)清晰的黃色或棕褐色顆粒判定為陽(yáng)性。每例先在100倍鏡下選取陽(yáng)性細(xì)胞多且分布均勻的區(qū)域，然后隨機(jī)計(jì)數(shù)10個(gè)不重復(fù)、不重疊的400倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞中的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，取平均值作為結(jié)果。根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行評(píng)分，0分為陽(yáng)性細(xì)胞<5%;1分為陽(yáng)性細(xì)胞5%～50%;2分為陽(yáng)性細(xì)胞>50%，將≥1分判定為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，組間比較應(yīng)用t或χ2檢驗(yàn)，影響因素分析用Logistic回歸分析，相關(guān)性分析用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p15 表達(dá)情況p15表達(dá)定位于細(xì)胞核和細(xì)胞漿，細(xì)胞核著色深，見圖1。p15在正常子宮內(nèi)膜組織中均陽(yáng)性表達(dá)，1分2例、2分8例；在子宮內(nèi)膜癌組織中40例（66.7%）陽(yáng)性表達(dá)，1分為18例，2分22例，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=9.618，P<0.01）。不同組織學(xué)分級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中p15的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余分組間p15的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。組織學(xué)分級(jí)是p15表達(dá)的影響因素，見表2。

2.2 nm23表達(dá)情況nm23表達(dá)主要彌漫性分布在細(xì)胞漿內(nèi)，見圖2。nm23在正常子宮內(nèi)膜組織中有7例（70%）陽(yáng)性表達(dá)，1分和2分分別為3例和4例，在子宮內(nèi)膜癌組織中36例（60．0%）陽(yáng)性表達(dá)，1分和2分分別為29例和7例，2組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.246，P=0.120）。不同臨床分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌組織中nm23的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余分組間nm23的陽(yáng)性表達(dá)率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表1。Logistic回歸分析未見影響nm23表達(dá)的因素入選，見表3。

表1 p15和nm23表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)的關(guān)系 例（%）

表2 p15表達(dá)影響因素Logistic回歸分析結(jié)果

表3 nm23表達(dá)影響因素logistic回歸分析結(jié)果

2.3 p15與nm23表達(dá)的相關(guān)性p15和nm23在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)（rs＝0．754，P＜0．01），見表4。

表4 p15與nm23在子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

p15是迄今發(fā)現(xiàn)的最直接抑制細(xì)胞周期的多腫瘤抑癌基因之一，其通過作用于細(xì)胞周期蛋白依賴激酶（CDK）與細(xì)胞周期蛋白D（cyclinD）復(fù)合物，特異性抑制CDK4、CDK6激酶活性，阻止Rb蛋白磷酸化，限制細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期，從而抑制細(xì)胞增殖[3]。本研究結(jié)果顯示p15在正常子宮內(nèi)膜組織中陽(yáng)性表達(dá)率高于在子宮內(nèi)膜癌中的陽(yáng)性表達(dá)率，而且內(nèi)膜癌分化程度越低，p15陽(yáng)性表達(dá)率越低，提示低組織學(xué)分級(jí)是p15表達(dá)的影響因素,與夏瑾瑜等[4]研究結(jié)果相似，與張麗志等[3]研究結(jié)果不一致，考慮可能與判定方法不同有關(guān)，推斷p15低表達(dá)可能不僅參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，而且可能導(dǎo)致細(xì)胞無限制由G1期進(jìn)入S期，并可以在細(xì)胞未成熟時(shí)即開始分裂，惡性度增高，并使惡性細(xì)胞不斷增殖，最終導(dǎo)致細(xì)胞永生化。因此，p15的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中發(fā)揮著重要作用。

nm23基因?yàn)橐恢匾霓D(zhuǎn)移抑制基因，位于人17號(hào)染色體的著絲點(diǎn)附近，其蛋白產(chǎn)物為二磷酸核苷激酶(NDPK)，此酶通過調(diào)節(jié)G蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞信號(hào)傳遞反應(yīng)，影響微絲、微管細(xì)胞骨架蛋白的生物活性，改變細(xì)胞的黏著力和遷移力，抑制腫瘤轉(zhuǎn)移[2]。nm23等位基因的突變、缺失、低表達(dá)與多種惡性腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移的潛能密切相關(guān)[5]。本研究中nm23的陽(yáng)性表達(dá)率隨內(nèi)膜癌臨床分期增高及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移而降低，提示nm23低表達(dá)可能會(huì)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的進(jìn)程。但臨床分期較高的患者可能就是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，兩者之間可能有相互影響，故多因素分析結(jié)果顯示未見影響nm23的表達(dá)因素入選，提示腫瘤的發(fā)展可能還有本研究未列入的其他影響因素作用的結(jié)果。另外，本研究Ⅲ～Ⅳ期患者、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者、低分化患者和其他組織類型患者蠟塊較少，也可能影響研究結(jié)論，有待增加樣本量以進(jìn)一步研究。

本研究還表明p15與nm23在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，推測(cè)可能是由于子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞中p15表達(dá)缺失使其抑制細(xì)胞增殖的作用減弱，導(dǎo)致細(xì)胞增殖異常活躍，分化程度減低，繼而nm23表達(dá)亦減低，導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移抑制功能缺失，從而加速了腫瘤轉(zhuǎn)移。p15和nm23在子宮內(nèi)膜癌中的協(xié)同作用有待雙染等方法進(jìn)一步證實(shí)。

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