趙斌(南京醫(yī)科大學附屬南京市婦幼保健院藥劑科,江蘇南京210004)
HPLC法測定夜寧糖漿中大黃素的含量
趙斌
(南京醫(yī)科大學附屬南京市婦幼保健院藥劑科,江蘇南京210004)
目的建立夜寧糖漿中大黃素的含量測定方法。方法HPLC法,色譜柱C18,流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液85∶15(V/V),流速:1.0mL/min,檢測波長:254 nm。結(jié)果大黃素在0.010 12~0.121 44μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 5),平均回收率為97.05%,RSD為1.98%(n=3)。結(jié)論本方法簡便、準確、專屬性好,能有效控制夜寧糖漿的質(zhì)量。
夜寧糖漿;大黃素;高效液相色譜法
夜寧糖漿[1]是由合歡皮、靈芝、首烏藤、大棗、女貞子、甘草、浮小麥等藥組成,具有安神養(yǎng)心的功效。臨床上用于神經(jīng)衰弱、頭昏失眠、血虛多夢,該方現(xiàn)已收載于2005版《中國藥典》一部[1]。其質(zhì)量控制方法簡單,只有檢查項目,沒有含量測定。為了更方便有效地控制該制劑的質(zhì)量,確保療效,本文對首烏藤中主要成分大黃素的含量采用HPLC法[2]進行測定,實驗結(jié)果令人滿意。
Agilent1100高效液相色譜儀(四元泵、脫氣機、紫外檢測器),HypersilODS柱(5μm,250×4.6mm)(均為Agilent公司),N2000色譜工作站(浙江大學智能信息研究所),F(xiàn)A1004電子分析天平(上海第二天平儀器廠),PHS-3C精密酸度計(上海雷磁儀器廠),KQ-50B型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)等。甲醇為色譜純,磷酸、乙醚等為分析純,注射用水(自制)。樣品和陰性對照液均由制藥廠提供,大黃素對照品(含量測定用)、大黃酸對照品(含量測定用)、大黃酚對照品(含量測定用)、大黃素甲醚對照品(供鑒別用)均由中國藥品生物制品檢定所提供。
2.1 色譜條件色譜柱:Hypersil ODS柱(5μm,250× 4.6mm);流動相:甲醇-0.1%磷酸溶液(85∶15)(在使用前均經(jīng)孔徑為0.45μm的微孔濾膜過濾,超聲處理);流速:1.0 mL/min;檢測波長為254 nm;柱溫:室溫;進樣量為10μL,在上述色譜條件下大黃素峰與其它峰分離良好,陰性無干擾,其保留時間為8.2 min,理論塔板數(shù)按大黃素計算為10 000,色譜圖見圖1~3。
圖1 空白樣品HPLC色譜圖
圖2 對照品HPLC色譜圖
2.2 溶液的制備
2.2.1 對照品溶液精密稱取大黃素對照品25.3mg~250mL于容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再精密量取2~50 mL于容量瓶中,用流動相稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.2.2 供試品溶液精密量取夜寧糖漿25mL,加水50mL,搖勻,加乙醚振搖提取4次(40,30,30,20mL),分取乙醚液,揮干,殘渣加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,即得。
2.2.3 空白樣品溶液取缺首烏藤的1/10處方量的藥材,按夜寧糖漿生產(chǎn)工藝制備空白陰性樣品,然后精密量取此液25 mL按供試品溶液的的制備方法制備不含首烏藤的的空白陰性樣品溶液。
2.3 線性關(guān)系的考察精密稱取大黃素對照品25.3mg~250mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,再分別精密量取此液1,2,4,8,12 mL至100mL容量瓶中,搖勻,分別量取10μL注入液相色譜儀,以峰面積積分值為縱坐標,以進樣量(μg)為橫坐標,繪制標準曲線,結(jié)果表明大黃素在0.010 12~0.121 44μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,線性方程為:Y=21.997 736+6 334 493.527X,r=0.999 5。
2.4 精密度試驗精密量取對照品溶液,連續(xù)進樣6次,測定峰面積積分值,結(jié)果RSD為1.92%。
2.5 穩(wěn)定性試驗精密供試品溶液10μL,分別在0,2,4,6,8 h進樣1次,測峰面積積分值,結(jié)果RSD為1.95%,表明供試品溶液中大黃素在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.6 重復(fù)性試驗取樣品5份,按3.2項下方法制備供試品溶液,測定大黃素的含量,結(jié)果平均含量為2.4μg/mL;RSD為1.68%,結(jié)果表明重復(fù)性良好。
2.7 加樣回收率試驗精密量取樣品25mL,共4份,其中1份為原樣,另3份分別加入1.012μg/mL的大黃素對照品溶液10,20,50mL,混勻,按3.2項下方法制備所需溶液后,測定大黃素的含量,計算加樣回收率。結(jié)果平均回收率為97.05%,RSD為1.98%,n=3。
2.8 樣品測定按上述色譜條件的3批樣品進行含量測定,結(jié)果每毫升含首烏藤以大黃素計算分別為0.0028,0.0032,0.0035mg,均符合成品質(zhì)量標準。
3.1 色譜條件的確定夜寧糖漿中化學成分復(fù)雜,檢測時易受干擾,本法以大黃素為測定指標,選用甲醇-0.1%磷酸溶液85∶15(V/V)作為流動相有較好的分離度,能使樣品中所含成分得到較好地分離,不干擾大黃素測定。
3.2 樣品的處理選擇樣品處理方法時,參考文獻資料[2-4],比較了幾種處理方法,實驗證明,本文采用的樣品處理方法,其分離度較好,峰信號較強。
3.3 色譜圖中峰位的確認筆者曾用大黃酚、大黃素甲醚對照品制成對照溶液,在同一色譜條件下,注入液相色譜儀,發(fā)現(xiàn)大黃酚、大黃素甲醚對照液中大黃酚、大黃素甲醚峰的保留時間分別與夜寧糖漿供試品溶液中10.0,14.6 min峰的保留時間一致,并且同時也采用此兩種標準液直接加入至供試品溶液中,在同一色譜條件下,注入液相色譜儀,發(fā)現(xiàn)10.0,14.6min兩峰的峰面積明顯增加,因此,筆者認為夜寧糖漿供試品溶液中10.0,14.6min出現(xiàn)的兩峰為大黃酚、大黃素甲醚峰,可進一步對此兩峰進行鑒別與含量測定。
[1]國家藥典委員會編.中國藥典[M].一部.北京:化學工業(yè)出版社,2005,附錄33-35.
[2]何建華,沈宇清,韋昌桂,等.高效液相色譜法測定通解口服液中大黃素的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志,2006,26(12):1483-1485.
[3]雷光,王登旭.HPLC法測定健腦寧合劑中大黃素的含量[J].齊魯藥事,2006,25(3):152-153.
[4]曾衛(wèi)陽,侯小明,段早紅.高效液相色譜法測定復(fù)方兒茶酊中大黃素的含量[J].醫(yī)藥論壇雜志,2006,27(20):67-68.
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