張 宏，盧婷利，趙 雯，陳 濤，2

(1.西北工業(yè)大學(xué)生命學(xué)院 空間生物實(shí)驗(yàn)?zāi)M技術(shù)國(guó)防重點(diǎn)學(xué)科實(shí)驗(yàn)室，陜西 西安 710072； 2.陜西脂質(zhì)體工程技術(shù)研究中心，陜西 西安 710075)

磁性脂質(zhì)體(Magnetic liposome)是磁導(dǎo)向藥物遞送系統(tǒng)中的一種新型藥物導(dǎo)向載體，是將磁性粒子結(jié)合在載藥脂質(zhì)體中，當(dāng)其進(jìn)入體內(nèi)后，利用體外磁場(chǎng)的作用引導(dǎo)其在體內(nèi)定向移動(dòng)，集中到靶部位后釋放藥物，從而避免藥物對(duì)正常組織的傷害，使其靶向性和專(zhuān)一性更強(qiáng)，達(dá)到快速、高效、低毒的效果[1，2]。目前磁性脂質(zhì)體多用于腫瘤治療，除可以實(shí)現(xiàn)低毒、靶向、緩釋外，在外加交變磁場(chǎng)的作用下，利用磁性粒子發(fā)熱進(jìn)行熱療，使腫瘤組織細(xì)胞升溫至42～47℃，進(jìn)一步消滅腫瘤細(xì)胞[3～5]。

乙醇和氯仿是制備磁性脂質(zhì)體中溶解脂質(zhì)膜材經(jīng)常使用的有機(jī)溶劑，若不除去會(huì)嚴(yán)重影響磁性脂質(zhì)體的使用安全性，因此應(yīng)保證乙醇和氯仿在磁性脂質(zhì)體中的殘留量低于規(guī)定的0.5%和0.006%[6]。磁性脂質(zhì)體制備過(guò)程中一般采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、真空干燥、抽真空等方法來(lái)除去有機(jī)溶劑[2，7，8]。脂質(zhì)體中乙醇和氯仿殘留量的氣相色譜檢測(cè)法已有報(bào)道[9，10]，均采用外標(biāo)法，雖然操作簡(jiǎn)單、方便，但是受儀器和操作的影響誤差較大，且不能同時(shí)檢測(cè)兩種殘留物。

作者在此采用內(nèi)標(biāo)法同時(shí)、定量測(cè)定磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿殘留量，結(jié)果令人滿(mǎn)意。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑與儀器

磁性脂質(zhì)體，自制；無(wú)水乙醇、二甲基甲酰胺(DMF)、三氯甲烷，色譜純；二氯甲烷，分析純。

Agilent 6890型氣相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)，高純氫氣(99.99%)，高純氮?dú)?99.99%)，鋼瓶空氣；磁分離架，吉林藍(lán)罡生物科技有限公司。

1.2 溶液的配制

(1)內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液的配制

精密稱(chēng)取二氯甲烷0.1271 g，置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，即為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液。

(2)對(duì)照品溶液的配制

精密稱(chēng)取乙醇3.7371 g、氯仿0.2952 g，分別置于500 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL和內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液1 mL，置于10 mL容量瓶中，加DMF定容至刻度，搖勻，即為對(duì)照品溶液。

(3)樣品溶液的制備

量取磁性脂質(zhì)體1 mL，加入2 mLDMF破乳，用磁分離架將磁性粒子分離，量取1 mL澄清液于10 mL容量瓶中，加入1 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，加DMF定容至刻度，搖勻，即得磁性脂質(zhì)體樣品溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：Agilent HP-5型毛細(xì)管柱(30 m×0.32 mm，0.5 μm)；檢測(cè)器為FID；載氣為氮?dú)?；分流比?0∶1；柱流量為15 cm·s-1，恒流；進(jìn)樣量為1.0 μL；進(jìn)樣口溫度為170℃；檢測(cè)器溫度為250℃。色譜柱程序升溫方法為：35℃保持2 min；25℃· min-1升溫到90℃，保持5 min；60℃· min-1升溫到200℃，保持5 min。

2 結(jié)果與討論

2.1 保留時(shí)間和檢測(cè)限的確定

量取對(duì)照品溶液1 mL，按色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，色譜圖如圖1所示。

1.乙醇 2. 二氯甲烷 3.氯仿 4.DMF

由圖1可以看出，乙醇、二氯甲烷、氯仿和DMF的分離度良好，保留時(shí)間分別為2.688 min、3.060 min、3.456 min和4.876 min。

通過(guò)逐級(jí)降低濃度，進(jìn)樣測(cè)定，確定檢測(cè)限，信噪比為3∶1。結(jié)果表明，乙醇、二氯甲烷和氯仿的最低檢測(cè)濃度分別為0.10 μg·mL-1、0.07 μg·mL-1和0.05 μg·mL-1。

2.2 線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液100 μL、200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1000 μL、1500 μL，置于10 mL容量瓶中，每個(gè)容量瓶中分別加入1 mL內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，用DMF定容至刻度，分別進(jìn)樣1.0 μL，記錄色譜圖，并測(cè)定峰面積。結(jié)果表明，在所測(cè)濃度范圍內(nèi)，乙醇(7.47～112.11 μg·mL-1)和氯仿(0.59～8.85 μg·mL-1)的濃度與峰面積/內(nèi)標(biāo)峰面積具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，回歸方程如下：

乙醇：y=1.2162c-0.10513R=0.9996(n=7)

氯仿：y=0.6739c-0.1003R=0.9997(n=7)

2.3 精密度實(shí)驗(yàn)

取對(duì)照品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)樣量為1.0 μL，測(cè)得乙醇與氯仿和二氯甲烷的峰面積比的RSD分別為0.96%、1.33%，表明方法精密度良好。

2.4 回收率實(shí)驗(yàn)

采用加樣回收率測(cè)定方法，按高、中、低濃度分別精密量取一定量的對(duì)照品儲(chǔ)備液加入到已知氯仿殘留量的1 mL磁性脂質(zhì)體中，按“樣品溶液的制備”方法處理，分別進(jìn)樣3次，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)

由表1可知，乙醇和氯仿的平均回收率分別為98.2%和97.3%，RSD≤3.0%(n=9)，表明方法準(zhǔn)確可靠。

2.5 樣品測(cè)定

精密吸取3個(gè)不同批次(100515，100521，100601)的磁性脂質(zhì)體樣品，得到3個(gè)脂質(zhì)體樣品溶液，每個(gè)樣品測(cè)3次，進(jìn)樣量1.0 μL，測(cè)定峰面積，根據(jù)回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果/%

由表2可知，該方法可以準(zhǔn)確測(cè)定磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿的殘留量，并且所測(cè)樣品的殘留量符合相關(guān)規(guī)定要求。

2.6 討論

2.6.1 溶劑選擇

由于進(jìn)樣前需要將阿霉素磁性脂質(zhì)體中的磁性粒子分離，所以選擇有機(jī)試劑作為溶劑將脂質(zhì)體破乳。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，乙醚、甲苯等低沸點(diǎn)溶劑均不能很好地將樣品破乳，而二甲基甲酰胺沸點(diǎn)較高，采用頂空進(jìn)樣法操作不便。因此，本實(shí)驗(yàn)采用直接進(jìn)樣法同時(shí)檢測(cè)乙醇和氯仿的殘留量。

2.6.2 色譜柱的選擇

比較了乙醇、氯仿和二甲基甲酰胺在不同色譜柱(HP-5、HP-INNOWAX和DB-1701)下的分離度。結(jié)果表明，采用HP-5的分離度最高。

2.6.3 內(nèi)標(biāo)物的選擇

由于磁性脂質(zhì)體在制備過(guò)程中經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)和抽真空，乙醇和氯仿的殘留量都較少，因此本實(shí)驗(yàn)采用內(nèi)標(biāo)法定量以減少儀器和操作帶來(lái)的誤差。經(jīng)過(guò)對(duì)多種有機(jī)試劑進(jìn)行篩選，其中二氯甲烷、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺的分離度均良好，最終選擇二氯甲烷作為內(nèi)標(biāo)物。

3 結(jié)論

建立了氣相色譜法(內(nèi)標(biāo)法)檢測(cè)磁性脂質(zhì)體中有機(jī)溶劑殘留量的方法，乙醇和氯仿在所測(cè)范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好(R>0.9995，n=7)，回收率高，重復(fù)性好。該法簡(jiǎn)單、快捷、精密可靠，適于磁性脂質(zhì)體中乙醇和氯仿有機(jī)溶劑殘留量的定量檢測(cè)。

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