楊 波,房新志

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院,烏魯木齊 830011)

研究表明,p73為 p53基因家族成員,可能屬于候選抑癌基因；BRCA1屬于抑癌基因,對腫瘤的生長起負性調(diào)節(jié)作用[1]。2007年 1月 ～2008年 12月,我們采用免疫組化法檢測了非小細胞肺癌(NSCLC)組織中的 p73、BRCA1蛋白,探討二者在NSCLC發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 115例 NSCLC患者中,男 89例、女26例 ,年齡 33～86歲；鱗癌 60例 ,腺癌 41例 ,其他類型 14例；組織分化為高分化 13例,中分化 58例,低分化 30例,未分化 14例；TNM分期Ⅰ期 41例,Ⅱ期 31例,Ⅲ ～Ⅳ期 43例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 46例,無轉(zhuǎn)移 69例；術(shù)前均未行放化療,術(shù)中取其瘤組織及 65例癌旁正常肺組織。

1.2 p73、BRCA1蛋白檢測方法 采用免疫組化 SP法。標(biāo)本均用 10%甲醛固定,石蠟包埋,切片,HE染色。選取具有代表性的蠟塊 4μm厚連續(xù)切片,按試劑盒說明書操作,用已知陽性切片作為陽性對照,以 PBS代替一抗作陰性對照。p73、BRCA1蛋白陽性細胞為細胞核呈黃褐色。著色程度計分:無色為 0分,淺黃色為 1分,棕黃色為 2分,深棕色為 3分。陽性細胞百分比計分:無陽性細胞著為 0分,≤10%為 1分,～50%為 2分,～75%為 3分,＞75%為 4分。兩項得分相乘 ＞3者判為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用 SPSS13.0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)比較采用 χ2檢驗和 Pearson相關(guān)性分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p73、BRCA1蛋白的表達 NSCLC組織中p73、BRCA1蛋白陽性率分別為 66.96%(77/115)、60.87%(70/115),癌旁組織中分別為 23.07%(15/65)、15.38%(10/65)。兩者相比,P均 ＜0.05。

2.2 p73、BRCA1蛋白表達與 NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系 見表1。由表可見,p73、BRCA1蛋白表達與 NSCLC的性別、年齡、組織類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān)(P均 ＞0.05)。

表1 p73、BRCA 1蛋白表達與 NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.3 NSCLC組織中 p73、BRCA1蛋白表達的關(guān)系

NSCLC組織中,p73、BRCA1蛋白均陽性 52例,均陰性 20例。相關(guān)分析顯示,p73、BRCA1蛋白表達呈正相關(guān)(r=0.194,P＜0.05)。

3 討論

p73基因定位于人染色體 1p36.2～1p36.3,由13個外顯子和 12個內(nèi)含子組成。其所編碼的蛋白質(zhì)在 DNA結(jié)合、轉(zhuǎn)錄、活化以及寡聚物聚合部位與p53具有顯著的序列相似性,故被認為是一種抑癌基因。p73能激活部分 p53調(diào)節(jié)基因如 Bax、p21wafl/cip1,像 p53一樣通過誘導(dǎo)程序性細胞死亡或細胞周期停滯在 G1期而抑制細胞增殖[2]。研究表明,p73蛋白在胸腺癌、惡性黑色素瘤、消化道腫瘤、膀胱癌中過表達。本研究結(jié)果顯示,NSCLC組織中 p73陽性率顯著高于癌旁肺組織,提示 p73參與了 NSCLC的發(fā)生發(fā)展；p73蛋白表達與NSCLC性別、年齡、組織類型、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無關(guān),表明 p73基因表達在不同病理類型和不同分化程度肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能具有普遍意義。因此,我們認為 p73基因是一種腫瘤防御或應(yīng)激基因,一旦正常組織發(fā)生癌變即可觸發(fā) p73基因應(yīng)激性表達增強,執(zhí)行其防御功能[3]。p53基因突變或缺失可能導(dǎo)致肺癌發(fā)生,而 p73在人類腫瘤中很少發(fā)生突變[4],p73基因高表達是肺癌發(fā)生后出現(xiàn)的現(xiàn)象。另外,p73還可能選擇性誘導(dǎo)一些不受 p53調(diào)控基因的表達[5]。因此,我們認為 p73基因功能并非是p53基因功能的簡單重復(fù),可能是對 p53功能的積極補充。近來研究發(fā)現(xiàn),p73基因能不依賴 p53基因獨立增強腫瘤的化療敏感性[6],其在腫瘤免疫機制中也發(fā)揮重要作用[7,8]。

BRCA1是 Miki等用定位克隆技術(shù)成功克隆出第一個與家族性乳腺癌和卵巢癌相關(guān)的基因,定位于人類 17q21。作為抑癌基因,BRCA1不僅與 DNA修復(fù)機制有關(guān),還與 DNA損傷導(dǎo)致的細胞周期檢查點的調(diào)控有關(guān)。在 G1/S期,BRCA1作為蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)相互作用的主要作用域,抑制細胞進入增殖周期,阻止細胞分裂,誘發(fā)細胞凋亡；BRCA1蛋白還可通過 p21使細胞周期停滯于 S期,修復(fù)損傷的DNA。BRCA1具有轉(zhuǎn)錄活化和轉(zhuǎn)錄抑制雙重作用,一方面,BRCA1可與 p53蛋白直接結(jié)合,并通過 p53激活 p21的轉(zhuǎn)錄,使細胞周期停滯于 G1期；另一方面,BRCA1能抑制與細胞增殖相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄,如C-myc的轉(zhuǎn)錄。本研究結(jié)果顯示,NSCLC組織中BRCA1陽性率顯著高于癌旁肺組織,且與患者的臨床病理參數(shù)均無關(guān)。這表明 NSCLC組織存在基因損傷,使 DNA修復(fù)基因的表達增加,與癌變模型假設(shè)理論相符[9]。

癌癥的發(fā)生需要多種癌基因的協(xié)同作用。本研究結(jié)果顯示,NSCLC組織中 BRCA1、p73蛋白的表達顯著高于癌旁組織,且二者的表達呈正相關(guān),提示p73與 BRCA1在 NSCLC發(fā)生發(fā)展中可能具有協(xié)同作用。p73過表達時能對 DNA損傷產(chǎn)生反應(yīng),即p73通過N末端的磷酸化和 C末端的磷酸化對其翻譯后水平修飾,加強轉(zhuǎn)錄并穩(wěn)定蛋白水平表達[10,11],使細胞周期停滯在 G1期而抑制細胞增殖,參與 DNA修復(fù)；BRCA1同樣是在磷酸化狀態(tài)下,在G1/S期抑制細胞進入增殖周期,促進細胞凋亡,修復(fù)損傷的 DNA。由此可以設(shè)計針對 BRCA1和 p73的靶向制劑,同時發(fā)揮二者對細胞周期中G1期的調(diào)控作用,抑制細胞由 G1期進入 S期,從而抑制腫瘤細胞的惡性增殖。

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