胡靖鋒 吳麗艷 林良斌 李衛(wèi)芬 李石開 鐘 利 和江明*

（1云南農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，云南 昆明 650201；2云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所，云南 昆明 650205）

十字花科作物根腫病是由專性寄生菌蕓薹根腫菌（Plasmodiophora brassicae）侵染引起的一種世界性病害（宋元林 等，1995）。1852年在美國(guó)首次報(bào)道，19世紀(jì)在蘇聯(lián)北部及中部地區(qū)大面積流行，并造成毀滅性災(zāi)害（Jeung-Haing et al.，1997）。近年來(lái)此病的危害日趨嚴(yán)重，尤其在歐洲、北美、日本等地區(qū)，根腫病已成為一種主要病害，給十字花科作物的生產(chǎn)造成嚴(yán)重威脅。我國(guó)的浙江、廣東、廣西、湖南、福建、江西、安徽、四川、云南、新疆、西藏、遼寧、山東、上海、北京及重慶等?。ㄊ小^(qū)）均有發(fā)生，并且發(fā)病的面積和為害的種類急劇增加（司軍 等，2002）。篩選抗性種質(zhì)資源，開展抗病育種，是從根本上解決根腫病危害的有效途徑。

本試驗(yàn)通過(guò)采用菌土法對(duì)云南省幾種主要十字花科作物進(jìn)行抗病性篩選，通過(guò)對(duì)其病情指數(shù)的比較分析，最終篩選出在昆明地區(qū)具有明顯抗性的種質(zhì)資源，為十字花科作物抗病育種奠定基礎(chǔ)，從而有效推進(jìn)云南省十字花科作物產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 材料

從云南省各個(gè)地區(qū)收集到的110份材料，其中大白菜50份、甘藍(lán)5份、花椰菜8份、青花菜1份、甘藍(lán)型油菜10份、芥菜20份、蕪菁16份（表1）。

表1 110份供試材料類型及來(lái)源

1.2 方法

菌土法：從昆明附近的雙龍、阿子營(yíng)、大板橋、小板橋等根腫病重災(zāi)區(qū)采集菌土和病根。將各點(diǎn)采集的菌土充分混合；將各點(diǎn)采集的菌根充分混合，用DG180型中藥材粉碎機(jī)打成粉末，置于冰柜待用。播種前在菌土中加入由菌根粉末加蒸餾水配成的孢子懸浮液，并充分混合。該懸浮液經(jīng)3000r·min-1離心10min，3次重復(fù)，按楊佩文等（2002）的方法分離并檢測(cè)孢子懸浮液及菌土中的孢子濃度，最終使菌土中孢子含量達(dá)到1×108個(gè)·g-1以上，再按沈夏淦（2006）的方法將菌土pH值調(diào)節(jié)至6.0。將材料播于裝有菌土的育苗盤中，每份材料播3盤，每盤播50粒；保持菌土濕度75 %左右，白天溫度20～26 ℃，夜間16～23 ℃。出苗后45 d（大約8片真葉）進(jìn)行病害調(diào)查與統(tǒng)計(jì)。

統(tǒng)計(jì)方法：參照司軍等（2003，2009）的方法將病情等級(jí)分為5級(jí)：0級(jí)，不發(fā)??；1級(jí)，側(cè)根有腫塊，主根無(wú)腫塊；2級(jí)，主根有腫塊，側(cè)根無(wú)腫塊；3級(jí)，主、側(cè)根均有腫塊；4級(jí)，主、側(cè)根有大量嚴(yán)重腫塊。計(jì)算病情指數(shù)。品種抗病性評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)：高抗，0＜病情指數(shù)＜10；抗病，10≤病情指數(shù)＜20；耐病，20≤病情指數(shù)＜30；感病，30≤病情指數(shù)≤100。

2 結(jié)果與分析

由表2和表3可以看出，不同材料病情指數(shù)經(jīng)方差分析F=6.64＞F10,20,0.01=3.368，說(shuō)明不同材料之間對(duì)根腫病的抗性存在極顯著差異。TS04的病情指數(shù)為 1.46，為高抗材料；H166、牛心蓮花白、圓稈大青菜、建水青花、TS09病情指數(shù)在14.44～19.57之間，為抗病材料；尖葉花菜、春不老、東川黑二茵、TS11病情指數(shù)在20.79～23.51之間，為耐病材料；其余100份材料均為感病材料。

表2 不同材料抗病性方差分析結(jié)果

3 討論

從110份十字花科作物對(duì)根腫病的抗性篩選結(jié)果來(lái)看，蕪菁類材料對(duì)根腫病的抗性要高于其他種類材料，甘藍(lán)類材料和甘藍(lán)型油菜材料間抗性無(wú)差異，花椰菜及青花菜材料對(duì)根腫病的抗性最弱。

目前，日本和韓國(guó)使用的抗源基因均來(lái)自歐洲飼用蕪菁（吉川宏昭，1983），周永紅等（2007）在接種濃度試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)紅蕪菁對(duì)根腫病表現(xiàn)出極強(qiáng)的抗性，本試驗(yàn)篩選到的TS04也是來(lái)自蕪菁，在一定程度上驗(yàn)證了蕪菁中具有較豐富根腫病抗性基因。歐洲飼用蕪菁和來(lái)自云南迪慶的蕪菁材料 TS04存在地理上的遠(yuǎn)緣關(guān)系，是否具有同一抗性基因有待于進(jìn)一步研究。

表3 病情指數(shù)低于30的10份材料菌土法接種結(jié)果

根腫病菌在人工培養(yǎng)基上難以培養(yǎng)成功，常規(guī)的人工穿刺等接種方法不適宜于該菌的接種，目前多依賴于菌土、菌根等含有大量孢子的物質(zhì)作為種源。接種方法有菌土法、浸蘸法、插入法等，Williams（1981）認(rèn)為浸蘸法最好，郭向華等（2001）認(rèn)為菌土法的效果較好，吉川宏昭（1983）認(rèn)為插入法較好。本試驗(yàn)選用菌土接種法對(duì)材料進(jìn)行抗病性鑒定，理應(yīng)先進(jìn)行生理小種的鑒定，但由于目前國(guó)內(nèi)有根腫病菌生理小種歐洲鑒別寄主系統(tǒng)（ECD）的單位并不多，受試驗(yàn)條件的限制，這一工作尚無(wú)法進(jìn)行。由于本試驗(yàn)所采用的菌源是昆明地區(qū)根腫病發(fā)病較為嚴(yán)重的地方，對(duì)根腫病的抗性鑒定只限于昆明地區(qū)，有望在今后的試驗(yàn)中擴(kuò)大菌源范圍和開展對(duì)根腫菌生理小種的鑒定工作。

郭向華，肖崇剛，曾艷.2001.甘藍(lán)根腫病菌的生物學(xué)特性.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，23（1）：7-9.

吉川宏昭.1983.王素譯.日本十字花科作物的抗根腫病育種.中國(guó)蔬菜，（3）：55-56.

宋元林，孫慶才，徐明濤，陳順才.1995.新編蔬菜病蟲害防治技術(shù).北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社：60-62.

司軍，李成瓊，任雪松，肖崇剛.2002.十字花科植物根腫病及抗根腫病育種研究進(jìn)展.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，15（2）：69-72.

司軍，李成瓊，肖崇剛，任雪松，王小佳.2003.甘藍(lán)根腫病接種方法的研究.西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，25（3）：216-219.

司軍，李成瓊，宋洪遠(yuǎn)，任雪松，宋明，王小佳.2009.結(jié)球甘藍(lán)對(duì)根腫病的抗性鑒定與評(píng)價(jià).西南大學(xué)學(xué)報(bào)，13（6）：26-30.

沈夏淦.2006.土壤pH值及其調(diào)節(jié).花卉，（4）：11.

楊佩文，李家瑞，楊勤忠，王群.2002.十字花科蔬菜根腫病菌休眠孢子的分離與檢測(cè).云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，17（3）：301-303.

周永紅，孫保亞，沈向群.2007.大白菜根腫病抗病接種濃度的研究.遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué)，（3）：34-35.

Jeung-Haing Oh，Jang-Hwan Cho，Bong-Gu Kim.1997.Environmental factors favoring the disease development and chemical control of clubroot（Plasmodiophora brassicae）in Chinese cabbage.Korean Plant Pathol，13（4）：244-247.

Willams P H.1981.Screening crucifers for multiple disease resistance.Madison：Department of Plant Pathology，University of Wisconsin-Madison：168.