吳 旭，張雪峰，其其格，常建軍，姜瑞清，郭建敏

（內(nèi)蒙古呼和浩特市盛樂經(jīng)濟(jì)園區(qū)蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）有限公司，內(nèi)蒙古 呼和浩特 011500）

納他霉素（natamycin）又稱游霉素（pimaricin），是多烯大環(huán)內(nèi)酯類抗真菌劑。納他霉素純凈物納他霉素作為天然食品防腐劑，既可以抑制各種霉菌、酵母菌的生長，也可抑制真菌毒素的產(chǎn)生[1-3]。納他霉素對人體無害，很難被人體消化道吸收，而且微生物很難對其產(chǎn)生抗性，同時因為其溶解度很低等特點，通常用于食品的表面防腐[4-7]。納他霉素是目前國際上唯一的抗真菌微生物防腐劑。已被批準(zhǔn)應(yīng)用于食品工業(yè)中。根據(jù)我國《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB2760-2007）規(guī)定，納他霉素在食物中最大殘留量為0.3g/kg。目前該產(chǎn)品已經(jīng)在50多個國家得到廣泛使用。主要應(yīng)用于乳制品、肉制品、發(fā)酵酒、飲料等食品的生產(chǎn)和保藏[8]。

目前納他霉素的分析方法主要有高效液相色譜法，且該方法已經(jīng)列入國標(biāo)方法，此方法消除樣品基質(zhì)干擾峰的干擾，并且實現(xiàn)較為準(zhǔn)確的測定。 本文建立了一種新型快速檢測奶酪和酸奶中納他霉素殘留的方法，本方法穩(wěn)定性好、回收率高，適用于監(jiān)控奶酪和酸奶中納他霉素殘留，更適合于大批量檢測。

1 材料與方法

1.1 材料 甲醇（HPLC級）、冰乙酸

（優(yōu)級純）、乙酸水提取液（冰醋酸:水5:40）、乙酸銨（優(yōu)級純）均購自天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心；那他霉素（純度＞95%，sigma公司）；乙睛（色譜純，迪馬公司）；水（超純）。

1.2 儀器

Waters 1525液相色譜（配有二極管陣列測器）；Agela C18色譜柱（5μm，4.6×250mm）；漩渦混合儀；超聲波機(jī)；高速離心機(jī)（不低于8000 r/min）。

1.3 儀器方法

流動相:甲醇:水:乙酸＝60:40:5（體積比），檢測波長302nm，流速1mL/min，柱溫 30 ℃，進(jìn)樣量 20μL。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

精確稱取納他霉素標(biāo)準(zhǔn)品0.0100g，用冰醋酸:水（5:40為體積比）溶解，定容到100mL。濃度為100ug/mL，避光4℃保存。

1.5 試樣制備

1.5.1 酸奶樣品

準(zhǔn)確稱取10g試樣（精確到0.01 g），加入乙酸水溶液25mL，劇烈振搖2min，10000 r/min離心，上清液用0.45μ水系微孔濾膜過濾后待用。

1.5.2 奶酪樣品

稱取樣品2.5 g試樣于研缽中，加入適量海砂（試樣質(zhì)量的4～6倍）研磨成干粉狀，加入乙酸水溶液25mL，劇烈振搖2min，充分混勻后超聲20min。10000 r/min離心，上清液用0.45μm水系微孔濾膜過濾后待用。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測波長確定

將納他霉素的標(biāo)準(zhǔn)品溶解于冰醋酸:水（5:40為體積比）中，制備成濃度4 mg／L的溶液，在200～400nm的波長范圍進(jìn)行紫外光全波長掃描（圖1），從光譜圖中看出，納他霉素的最大吸收波長為302nm，故選擇302nm作為檢測波長。

2.2 流動相和流速的選擇

本文通過選擇3種流動相進(jìn)行實驗比較:A.甲醇:水:乙酸＝60:40:5（體積比）；B.甲醇:水:磷酸 =70:30:0.5（體積比）；C.0.053moL/L乙酸銨:乙睛=80:20（體積比）。通過大量實驗篩選得出，此三種方法都能將酸奶和奶酪當(dāng)中的納他霉素分開，但B方法納他霉素保留較弱，且在進(jìn)樣后基線波動較大，考慮到乙睛價格較高，在A和C方法中選擇A方法。

流速的選擇:對不同流速（0.80、1.0、1.2mL/min）條件下的分離情況進(jìn)行研究。與1.00mL/min相比較，流速為0.80mL/min時保留時間增加；流速為1.20mL/min時保留時間縮短，但不明顯，且分離效果與1.00mL/min相差不大?？紤]到柱壓的因素，因此最終選用流速為1.00mL/min。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

用納他霉素對照儲備液分別稀釋為 0.10、0.50、1.00、2.00、20.00mg／L，在上述優(yōu)化的色譜條件下進(jìn)樣，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見圖2。線型方程為:y＝4.68×105-1.33×104相關(guān)系數(shù) r2＝0.9999。

2.4 精密度

對同一個3 mg/kg酸奶加標(biāo)樣品進(jìn)行了7次測定，并計算標(biāo)準(zhǔn)偏差及CV%值，結(jié)果見表1。

2.5 回收率實驗

選用3種不同濃度分別進(jìn)行了納他霉素的加標(biāo)回收率測定（見表2）。

通過測試酸奶中納他霉素檢測的回收率在90～110%之間，完全能滿足檢測的需要。

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3 結(jié)論

選用甲醇:水:冰乙酸（體積比60:40:5）作為方法的流動相，不僅能將納他霉素分開，且方法用水:冰乙酸（體積比40:5）作為樣品的提取溶液，與流動相匹配性好，回收率好，提取較完全。酸奶和奶酪中納他霉素含量范圍在0.5～20mg/kg時與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r2＝0.9999）?；厥章试?0.3～95.6%（n=7）之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）1.01%，結(jié)果表明該方法有準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好的特點，特別是操作簡便、快捷，可以作為企業(yè)生產(chǎn)監(jiān)控的有效方法。

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