任學(xué)群,李宜雄

(1.河南大學(xué)淮河醫(yī)院普通外科,河南 開(kāi)封 475000;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院普通外科,湖南 長(zhǎng)沙 410008)

Ezrin在胰腺癌組織中的表達(dá)及意義

任學(xué)群1,李宜雄2*

(1.河南大學(xué)淮河醫(yī)院普通外科,河南 開(kāi)封 475000;2.中南大學(xué)湘雅醫(yī)院普通外科,湖南 長(zhǎng)沙 410008)

目的:探討Ezrin在胰腺癌組織中的表達(dá)及其與胰腺癌生物學(xué)行為的關(guān)系。方法:采用免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)46例胰腺癌組織及13例正常胰腺組織中Ezrin的表達(dá)情況,并分析其表達(dá)與胰腺癌臨床病理因素和預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果:胰腺癌組織中Ezrin陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織(89.1%vs 53.8%,P＜0.01)。胰腺癌組織中Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為45.7%(21/46),強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤分化程度的降低而增高(P＜0.05);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P＜0.05)。Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組術(shù)后生存時(shí)間為9～36 mon,中位生存時(shí)間為16 mon;Ezrin呈弱陽(yáng)性及陰性表達(dá)組術(shù)后生存時(shí)間為8～50 mon,中位生存時(shí)間為24 mon;2組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論:Ezrin在胰腺癌組織中存在過(guò)表達(dá),且其表達(dá)與胰腺癌不良生物學(xué)行為密切相關(guān),可作為判別胰腺癌預(yù)后的一種有價(jià)值的分子標(biāo)志物。

Ezrin;胰腺癌;免疫組織化學(xué)

腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)侵襲能力增強(qiáng)是腫瘤轉(zhuǎn)移的前 提[1-4]。研究表明,細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)和遷移能力與細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)循環(huán)密切相關(guān),而由肌動(dòng)蛋白絲組成的微絲骨架是細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的基礎(chǔ)。Ezrin是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成員之一,是細(xì)胞骨架(主要為微絲骨架)與細(xì)胞膜之間的連接蛋白。通過(guò)參與細(xì)胞生長(zhǎng)和信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中膜與細(xì)胞骨架的重要聯(lián)系和調(diào)節(jié),在細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、遷移、有絲分裂等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。近年來(lái),越來(lái)越多的研究[3-10]表明,Ezrin過(guò)表達(dá)或亞細(xì)胞定位改變與腫瘤的惡性進(jìn)展和預(yù)后密切相關(guān)。作者采用免疫組織化學(xué)SABC法對(duì)胰腺癌組織中Ezrin蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測(cè),以探討其在胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用及其對(duì)胰腺癌預(yù)后的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

取1997年2月至2005年9月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院和河南大學(xué)淮河醫(yī)院手術(shù)切除且隨訪資料完整的46例胰腺癌石蠟包埋組織標(biāo)本,所有標(biāo)本均由兩位病理專家按照WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行組織病理學(xué)診斷和分級(jí)。組織學(xué)類型均為胰腺導(dǎo)管腺癌,其中高分化腺癌10例,中分化腺癌 25例,低分化(或未分化)腺癌11例?；颊咝g(shù)前均未接受任何化療、放療和免疫治療,其中男 32例,女 14例,年齡35～80(65±9)歲,同時(shí)取同期其他手術(shù)切除的13例正常胰腺石蠟包埋組織標(biāo)本作為對(duì)照。主要試劑:鼠抗人Ezrin單克隆抗體(工作濃度1∶50)及SABC免疫組織化學(xué)試劑盒,購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 方法

采用SABC免疫組織化學(xué)法,染色步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。染色前用微波抗原修復(fù)10min,用PBS代替一抗作空白對(duì)照、正常羊血清代替一抗作陰性對(duì)照、已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果判定:Ezrin陽(yáng)性顯色呈棕黃色顆粒,以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)明確的棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。每例的評(píng)判均為高倍(×400)鏡下觀察10個(gè)視野所得的結(jié)果。由2位病理科醫(yī)生進(jìn)行雙盲讀片,參考Mathew等[11]報(bào)道的方法,綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比進(jìn)行分析:陰性(-)為無(wú)表達(dá);弱陽(yáng)性(+)為＜50%細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)或淺染;強(qiáng)陽(yáng)性(++)為≥50%細(xì)胞陽(yáng)性表達(dá)且深染。

1.3 隨訪

自手術(shù)當(dāng)天起開(kāi)始計(jì)算生存時(shí)間,通過(guò)門(mén)診、信訪、電話等方式對(duì)患者進(jìn)行隨訪,患者死亡或失訪定為隨訪結(jié)束點(diǎn)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。兩樣本率的比較采用4格表資料的 χ2檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn);多樣本率的比較采用行×列表資料的χ2檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis H)。生存分析采用Kaplan-Meier法和log-rank檢驗(yàn)。顯著性水準(zhǔn)α取為0.05。

2 結(jié)果

2.1 Ezrin在正常胰腺組織和胰腺癌組織中的表達(dá)情況

在13例正常胰腺組織中,7例(53.8%)呈現(xiàn)Ezrin弱陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性顆粒彌漫性分布于細(xì)胞漿中。而在胰腺癌組織中,不同標(biāo)本之間、同一標(biāo)本的不同癌巢之間,Ezrin表達(dá)存在明顯的異質(zhì)性,從只有少量癌細(xì)胞陽(yáng)性著色到全部癌細(xì)胞均呈陽(yáng)性染色,染色強(qiáng)度亦強(qiáng)弱不等。Ezrin陽(yáng)性染色多數(shù)分布于細(xì)胞膜和細(xì)胞漿,部分呈細(xì)胞膜陽(yáng)性或細(xì)胞漿陽(yáng)性,見(jiàn)圖1。Ezrin在胰腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為89.1%(41/46),其中強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率為45.7%(21/46)。癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織(P=0.009,Fisher精確檢驗(yàn))。

圖1 Ezrin蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)(×400)

2.2 胰腺癌組織Ezrin表達(dá)與臨床病理因素之間的關(guān)系

Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率隨腫瘤分化程度的降低呈遞增趨勢(shì),3組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=7.725,P=0.021);有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=3.989,P=0.046)。Ezrin表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期無(wú)關(guān),見(jiàn)表1。

表1 Ezrin表達(dá)與胰腺癌臨床病理因素之間的關(guān)系

在6例組織切片(中分化腺癌2例,低分化腺癌4例)中,可見(jiàn)腫瘤浸潤(rùn)淋巴管或血管,Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),見(jiàn)圖2。

圖2 Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)(×400)

2.3 Ezrin表達(dá)與胰腺癌術(shù)后生存期之間的關(guān)系

全部患者術(shù)后均獲隨訪(100%),隨訪時(shí)間6～54 mon。Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組術(shù)后生存時(shí)間為9～36 mon,中位生存時(shí)間為16 mon,其中1、3 a生存率分別為66.7%(14/21)和4.8%(1/21);Ezrin弱陽(yáng)性及陰性表達(dá)組術(shù)后生存時(shí)間為8～50 mon,中位生存時(shí)間為24 mon,其中1、3 a生存率分別為 80.0%(20/25)和20.0%(5/25)。經(jīng)log-rank檢驗(yàn),2組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.860,P=0.0276),見(jiàn)圖3。

圖3 Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組與弱陽(yáng)性及陰性表達(dá)組患者生存曲線

3 討論

胰腺癌發(fā)展迅速,臨床經(jīng)過(guò)兇險(xiǎn),預(yù)后極差。雖然在過(guò)去的幾十年里,胰腺癌的基礎(chǔ)和臨床研究取得了極大進(jìn)展,但胰腺癌的綜合治療效果和5 a生存期并未得到根本上的改善[1-2]。大量研究表明,胰腺癌的不良臨床經(jīng)過(guò)除與其特殊解剖學(xué)位置及缺乏早期診斷標(biāo)記物外,還與胰腺癌具有高頻率侵襲轉(zhuǎn)移的獨(dú)特生物學(xué)行為密切相關(guān)。這必然有其一定的分子基礎(chǔ),但確切機(jī)制尚不完全清楚[1-2]。近年來(lái)的研究[3-10]發(fā)現(xiàn),腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力與細(xì)胞骨架的動(dòng)態(tài)循環(huán)密切相關(guān)。癌細(xì)胞侵襲進(jìn)入周?chē)M織是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵,這個(gè)過(guò)程需要癌細(xì)胞的趨化性移行,這不僅要克服上皮細(xì)胞間的致密連接、基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的限制,而且還要推開(kāi)或避開(kāi)遷移過(guò)程中其他細(xì)胞的阻擋。細(xì)胞間粘附性降低以及癌細(xì)胞變形穿過(guò)基底膜、降解細(xì)胞外基質(zhì)的能力的獲得均與癌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白微絲骨架的聚合、解聚及重排失控有關(guān)。因此,細(xì)胞骨架可能是腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)基因和分子促腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的最終靶點(diǎn)和效應(yīng)子,成為研究侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制的熱點(diǎn)之一。其中Ezrin由于介導(dǎo)肌動(dòng)蛋白微絲與細(xì)胞膜的連接而尤為引人注目。

Ezrin是Ezrin亞家族的原型,主要存在于上皮細(xì)胞的刷狀緣和胎盤(pán)的微絨毛中。20多年前,Bretscher[5]首先在雞小腸上皮細(xì)胞刷狀緣中發(fā)現(xiàn)存在著大量的這種成分。隨后,陸續(xù)在脊椎動(dòng)物發(fā)現(xiàn)該家族有4個(gè)成員,分別是Ezrin、根蛋白(radixin)、膜突蛋白(moesin)及merlin(也稱schwannomin),前三者在結(jié)構(gòu)和功能上非常相似,故合稱為 ERM家族。生理狀態(tài)下,Ezrin參與細(xì)胞絨毛、偽足、粘附位點(diǎn)和分裂期收縮環(huán)的形成。研究證實(shí),作為細(xì)胞骨架動(dòng)態(tài)循環(huán)的組織者,Ezrin通過(guò)參與許多腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)分子如生長(zhǎng)因子(如 c-Met等)、粘附分子(如CD44、CD43,ICAM-1 、ICAM-2 、ICAM-3)等介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo),和這些分子一起共同組成了腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò),其中Ezrin可能起著重要的樞紐作用。大量研究[5-10]顯示,在多種腫瘤組織中,Ezrin過(guò)表達(dá)或亞細(xì)胞定位改變與腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)。Bruce等[6]用組織芯片技術(shù)對(duì)包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、結(jié)腸癌及多種肉瘤等十多種腫瘤組織和近20種正常組織在內(nèi)的近5000例標(biāo)本中Ezrin的表達(dá)進(jìn)行了檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)Ezrin在腫瘤組織中均呈現(xiàn)高表達(dá),其中Ezrin表達(dá)與乳腺癌、各種肉瘤的組織學(xué)分級(jí)或預(yù)后密切相關(guān)。Kobel等[7]用免疫組織化學(xué)的方法研究164例FIGO分期I期的子宮內(nèi)膜癌患者。結(jié)果顯示,Ezrin陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)93%,多數(shù)呈胞漿表達(dá),且Ezrin陽(yáng)性表達(dá)的腫瘤細(xì)胞之間連接較為松散。多因素分析顯示,Ezrin過(guò)表達(dá)是FIGO分期I期子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。Weng等[8]進(jìn)一步評(píng)估了Ezrin在AJL軟組織肉瘤中的預(yù)后價(jià)值,發(fā)現(xiàn)Ezrin表達(dá)與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移顯著相關(guān),多因素分析表明Ezrin表達(dá)可以作為軟組織肉瘤患者低生存率的獨(dú)立預(yù)后標(biāo)志。Yeh等[9]研究發(fā)現(xiàn),在胰腺實(shí)性假乳頭狀瘤、黏液囊腺瘤和導(dǎo)管內(nèi)乳頭狀黏液瘤中,良性腫瘤Ezrin陽(yáng)性表達(dá)主要在細(xì)胞漿,而惡性腫瘤主要在細(xì)胞膜,提示Ezrin可能在上述腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化中起重要作用;在胰腺導(dǎo)管癌組織中,Ezrin陽(yáng)性表達(dá)主要位于細(xì)胞膜,Ezrin膜表達(dá)陽(yáng)性是患者獨(dú)立的預(yù)后因素。但Torer等[10]研究顯示,胰腺癌組織中,Ezrin表達(dá)與腫瘤大小及能否切除密切相關(guān),而與預(yù)后無(wú)關(guān),認(rèn)為Ezrin主要在胰腺癌的局部侵襲中起重要作用。但在卵巢癌中,Ezrin低表達(dá)或表達(dá)丟失則提示腫瘤預(yù)后不良[11-12]。提示Ezrin在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用更具復(fù)雜性和組織特異性,其作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。

本研究結(jié)果顯示,Ezrin在胰腺癌組織中存在過(guò)表達(dá),且其過(guò)表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),而與年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期等因素?zé)o關(guān)。尤其值得注意的是,在淋巴管或血管癌栓組織中,Ezrin均呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),提示Ezrin可能在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要作用。Ezrin過(guò)表達(dá)的癌組織可能具有更強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力。本研究結(jié)果還顯示,Ezrin強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)組胰腺癌術(shù)后生存時(shí)間顯著縮短,提示Ezrin還可作為判斷胰腺癌術(shù)后預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。

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[責(zé)任編輯 姬 荷]

Significance of Ezrin expression in pancreatic adenocarcinoma tissues

REN Xue-qun1,LI Yi-xiong2*(1.Department ofGeneral Surgery,Huaihe Af filiated Hospital ofHenan University,K aifeng,Henan 475000,China;2.Department of General Surgery,Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410008,China)

Objective:To explore the significance of Ezrin expression in pancreatic adenocarcinoma tissues.Methods:Expression of Ezrin in 46 pancreatic adenocarcinoma tissues and 13 normal tissues of pancreas was examined by immunohistochemical staining.The relationship of Ezrin expression to clinicopathological characteristics and prognosis of patients after operation were analyzed.Results:The positive rate of Ezrin immunostaining in pancreatic adenocarcinoma tissues(89.1%)was significantly higher than in normal tissues of pancreas(53.8%)(P＜0.01).In pancreatic adenocarcinomas,the strong positive rate of Ezrin immunostaining was 45.7%(21/46).The strong positive rate of Ezrin immunostaining increased significantly with the worsening of histological grade(P＜0.05).The strong positive rate of Ezrin expression in lymph-node metastatic group(63.2%)was significantly higher than in without(33.3%)(P＜0.05).The median post-operative survival time was 16 months(range from 9 to 36 months)in the group with strong positive Ezrin expression,and 24 months(range from 8 to 50 months)in the group with weak positive and negative Ezrin expression(P＜0.05).Conclusion:Ezrin protein is overexpressed in pancreatic adenocarcinoma tissues,and their overexpression is significantly associated with the poor biological behavior of pancreatic adenocarcinoma,which indicates that Ezrin may be a valuablemolecular marker for predicting the prognosis of pancreatic adenocarcinoma.

Ezrin;Pancreatic Adenocarcinoma;Immunohistochemistry

R735.9

A

1672-7606(2010)02-0094-04

2010-03-10

任學(xué)群(1964-),男,河南正陽(yáng)人,博士,教授,主任醫(yī)師,從事肝膽胰外科的教學(xué)及研究工作。

*通訊作者:李宜雄(1959-),男,湖南嘉禾人,教授、主任醫(yī)師,博士生導(dǎo)師,從事胰腺、膽道外科的臨床工作及相關(guān)基礎(chǔ)研究。