王丹慧，張鳳梅，李 梅，劉衛(wèi)星

(1.內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)有限公司， 內(nèi)蒙古 呼和浩特 011500；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

鐵鹽法定量檢測原料乳中硫氰酸鹽

王丹慧1，張鳳梅2，李 梅1，劉衛(wèi)星1

(1.內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團)有限公司， 內(nèi)蒙古 呼和浩特 011500；2.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010018)

研究原料乳中硫氰酸鈉定量檢測方法，原料乳樣品經(jīng)過蛋白沉淀后，向濾液中加入鐵鹽溶液，樣液的顏色變化與硫氰酸鹽摻入量有關(guān)，通過樣液的吸光度計算出硫氰酸鹽含量。通過對標準溶液線性關(guān)系、檢出限、回收率、重復(fù)性的驗證，以及與離子法的對比實驗，結(jié)果表明，該方法用于檢測原料乳中硫氰酸根質(zhì)量濃度在30mg/L以下具有良好的線性、回收率、重現(xiàn)性，方法操作簡單、結(jié)果準確，適用于乳品企業(yè)進行原料乳質(zhì)量檢驗。

原料乳；硫氰酸鹽；鐵鹽法檢測

常見硫氰酸鹽有硫氰酸鈉和硫氰酸鉀，以硫氰酸鈉最為普遍，硫氰酸鈉，別名硫氰化鈉，分子式NaSCN或NaCNS，是白色斜方晶系結(jié)晶或粉末，毒害品，有潮解性，熔點為287℃，相對密度1.735，易溶于水、乙醇和丙酮，是一種用途廣泛的化工原料[1]。硫氰酸鹽的毒性主要由其在體內(nèi)釋放的氰根離子而引起。氰根離子在體內(nèi)能很快與細胞色素氧化酶中的三價鐵離子結(jié)合，抑制該酶活性，使組織不能利用氧。

原料乳或奶粉中摻入硫氰酸鈉后可有效的抑菌、保鮮，但硫氰酸鈉是毒害品，少量的食入就會對人體造成極大傷害。12月12日衛(wèi)生部發(fā)布的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)和易濫用的食品添加劑品種名單(第一批)》中明確規(guī)定乳及乳制品中硫氰酸鈉屬于違法添加物質(zhì)。

針對硫氰酸鹽的測定，目前還沒有現(xiàn)行的國家標準，《關(guān)于印發(fā)全國打擊違法添加非食用物質(zhì)和濫用食品添加劑專項整治抽檢工作指導(dǎo)原則和方案的通知(食品整治辦[2009]29號)》中的離子色譜法(IC)的檢測限為2.0mg/kg。該方法雖然定量準確，但卻依賴于大型精密儀器，不適用于大量樣品的快速檢測。目前硫氰酸根的檢測方法中基于顯色原理的方法有兩類：一類是吡啶-巴比妥酸法[2]，另一類是鐵鹽法，鐵鹽法操作簡便更具有操作性，根據(jù)硫氰酸根與鐵鹽的典型顯色反應(yīng)的原理，其檢測方法分為定性顯色法、分光光度法[2-6]。定性顯色法雖然檢測簡便，但檢出限較高難以滿足檢測需求；分光光度法是具有快速方便、不需要昂貴儀器設(shè)備等優(yōu)點，特別適合于硫氰酸鹽污染監(jiān)控工作中大量樣本的篩查，可以大大節(jié)省檢測時間和檢測成本，尤其適用于基層實驗室或乳品企業(yè)原料乳的在線檢測。本實驗擬采用鐵鹽法定量檢測原料乳中硫氰酸鹽的含量，以期為乳品檢測提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

原料乳均為隨機抽取的牧場奶罐乳樣。實驗所用試劑如無特殊均為分析純。實驗用水由Millipore Elix 100制得的純凈水。

XS204分析天平(感量0.0001g) 梅特勒-托利多公司；U-1900分光光度計 Hitachi公司。

1.2 檢測原理[2]

樣品經(jīng)過沉淀過濾，除去蛋白等干擾物質(zhì)，濾液中的硫氰酸根遇鐵鹽反應(yīng)生成血紅色的硫氰酸鐵，通過分光光度計在450nm波長處測其吸光度，硫氰酸鐵質(zhì)量濃度與吸光度呈線性關(guān)系，外標法可測定樣品中含有硫氰酸鹽(以硫氰酸根含量計)的含量。

1.3 方法

1.3.1 溶液的配制

三氯乙酸溶液(200g/L)：稱取20.00g三氯乙酸，以純凈水溶解定容至100mL。

硫氰酸根標準溶液(1000mg/L)：精確稱取1.418g 硫氰酸鈉(純度≥98.5%)，以純凈水溶解至1L(冷藏保存)。

本文通過留一交叉驗證法(leave-one-out cross validation,LOOCV)和k折交叉驗證分別評估ASD識別準確率。該方法將原始樣本分成不相交的k組，隨機選擇1組作為深度學(xué)習(xí)網(wǎng)絡(luò)的測試集，剩余的k-1組作為訓(xùn)練集；然后重復(fù)驗證k次，使得每組均僅作為一次測試集；最后對得到的k個結(jié)果進行平均得出準確率數(shù)據(jù)。所得的結(jié)果中LOOCV比較可靠，減小了隨機因素帶來的偶然誤差，整個過程是可重復(fù)的。分類器的性能指標包括真陽性(TP)，假陰性(FN)，真陰性(TN)和假陽性(FP)，并據(jù)此計算出靈敏度、特異性、準確度、陽性預(yù)測值(PPV)和陰性預(yù)測值(NPV)：

硝酸鐵溶液(16g/L)：稱取硝酸鐵1.600g，以純凈水溶解定容至100mL。

1.3.2 樣品處理

取20mL原料乳樣品置于三角瓶中，加5mL三氯乙酸溶液，邊加邊攪拌，混合均勻后靜置20min，用定量濾紙過濾于干凈干燥的三角瓶中，得乳清液待用。

1.3.3 比色

取過濾后的乳清液4mL于干凈干燥的試管中，加入2mL硝酸鐵溶液，混勻。以純凈水4mL代替乳清液做空白。用1cm比色杯，在450nm波長處測吸光度，以空白調(diào)零進行比色。

1.3.4 繪制標準曲線

使用乳清液加顯色劑的吸光度與水加顯色劑的吸光度接近(不超過±0.005)的原料乳作為本底，制得含有硫氰酸根質(zhì)量濃度分別為0、2、5、10、15、20、30mg/L的梯度樣液。按照1.3.2和1.3.3節(jié)步驟操作。以梯度樣液中硫氰酸根的濃度為橫坐標、以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

2 結(jié)果與分析

表1 標準溶液線性關(guān)系Table 1 Setting up of thiocyanate standard curve and its correlation coefficient

由表1可見，在0～30.0mg/L范圍之內(nèi)，硫氰酸根質(zhì)量濃度與吸光度之間存在著良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9993。

標準曲線法測定結(jié)果：樣品含量為1.36mg/L，方法檢出限為2.0mg/L。

2.2 回收率驗證[7]

選擇原料乳代表性樣品，分別添加不同量的硫氰酸鹽標準物質(zhì)，按已確定的方法測定添加回收量(扣除樣品本底值)。

表2 原料乳中添加硫氰酸鹽回收率實驗結(jié)果Table 2 Recovery rates of thiocyanate in spiked raw milk

由表2可見，當(dāng)原料乳中添加硫氰酸鹽在1.0～10.0mg/L水平時，本方法回收率為85%～110%，其RSD在允許范圍以內(nèi)，說明該法對硫氰酸鹽不同含量的原料乳均有較好的回收效果。

2.3 重現(xiàn)性驗證[7]

以重復(fù)測定某一濃度樣品的檢測結(jié)果以RSD為精密度評價指標，評價方法的重現(xiàn)性。

表3 分光光度法重現(xiàn)性實驗結(jié)果Table 3 Repeatability evaluation of this method

選取加標乳樣按照確定的條件進行重現(xiàn)性實驗，由表3可見，從重現(xiàn)性實驗相對標準偏差≤12%，說明用本法測定原料乳中的硫氰酸鹽有較好的精密度、重現(xiàn)性。

2.4 與離子色譜法比較

為評價分光光度法的準確性，取12份驗證樣品(原料乳中無規(guī)律添加不同量的硫氰酸鹽)與離子色譜法進行

比對驗證，由表4可見，本方法與離子色譜法的實驗結(jié)果基本一致。

表4 分光光度法與離子色譜法比較情況Table 4 Comparison between this method and ion chromatography

3 結(jié) 論

本方法是一種常規(guī)定量檢測方法，通過對方法檢出限、回收率、重現(xiàn)性、方法間對比的驗證，該方法具有較好的準確性、重現(xiàn)性。

該原料乳中硫氰酸鈉定量檢測方法，其顯色現(xiàn)象明顯、檢測靈敏度高、成本低廉、檢測方便快捷，可以在乳品企業(yè)中廣泛應(yīng)用于原料乳質(zhì)量驗收中，以控制食品安全。

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典: 一部[M]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社, 2005: 111.

[2]WS/T 39—1996 尿中硫氰酸鹽的吡啶-巴比妥酸風(fēng)光光度測定方法[S]. 北京: 中國標準出版社.

[3]丁偉. 牛乳摻假快速檢驗[M]. 太原: 山西科學(xué)技術(shù)出版社, 1993: 135-149.

[4]董文賓. 鮮奶摻假及其快速檢測方法研究[C]. 北京: 首屆中國奶業(yè)科技發(fā)展論壇, 2005: 399-411.

[5]黃玉賢. 乳中硫氰酸鹽測定方法的研究報告[J]. 黑龍江: 黑龍江畜牧科技, 1998(3): 8-9.

[6]王丹慧. 原料乳中硫氰酸鈉摻假定性檢測方法[J]. 中國乳品工業(yè), 2008(7): 57-58.

[7]GB/T 20001.4—2001 標準編寫規(guī)則 第4部分: 化學(xué)分析方法[S].

Quantification of Sodium Sulfocyanate in Raw Milk by Ferric Salt Method

WANG Dan-hui1，ZHANG Feng-mei2，LI Mei1，LIU Wei-xing1
(1. Inner Mongolia Mengniu Dairy Industry (Group) Co. Ltd., Hohhot 011500, China；2. Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China)

For the examination of thiocyanate adulteration, raw milk samples were subjected to protein precipitation and filtration and the filtrate was then added with ferric salt solution and the calculation of thiocyanate content based on absorbance determination due to color change caused by the reaction between thiocyanate and ferric salt was performed. This method was successfully used to thiocyanate determination in raw milk with excellent linearity, high recovery rate and good repeatability at sulfocyanate concentrations of less than 30 mg/L. In general, this method is suitable for the quality test of diary products due to its simple operation and accurate results.

raw milk；sodium sulfocyanate；detection；ferric salt method

TS252.7

A

1002-6630(2010)18-0298-03

2009-09-08

王丹慧(1979—)，女，工程師，本科，主要從事食品工程和檢驗研究。E-mail：wangdanhui2006@126.com