徐國(guó)莉，徐峰，張春芳

(1.黑龍江省哈爾濱市阿城區(qū)中醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150300;2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150040;3.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040)

中藥血清藥理學(xué)是指在動(dòng)物經(jīng)口給藥后一定時(shí)間采血，分離血清，用此含藥物成分的血清進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)［1］。它客觀地模擬了藥物與機(jī)體相互作用過程，其血清所含的藥物成分也是經(jīng)過體內(nèi)一系列生物轉(zhuǎn)化后真正發(fā)揮作用的有效成分及藥物作用下機(jī)體所產(chǎn)生的內(nèi)生性有效成分，并且，血清的理化性質(zhì)與細(xì)胞所處的內(nèi)環(huán)境相似。因此，在某種程度上可排除中藥制劑直接離體實(shí)驗(yàn)所具有的難確定因素的干擾，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度大大提高［2］。中藥含藥血清已應(yīng)用到許多研究領(lǐng)域［3］:包括對(duì)單核細(xì)胞產(chǎn)生致熱源影響的研究;抗真菌、抗病毒的研究;對(duì)心血管系統(tǒng)影響的研究;抗肝纖維化相關(guān)研究;對(duì)慢性腎功能衰竭大鼠系膜細(xì)胞影響的研究;抗自由基細(xì)胞的研究及對(duì)中藥免疫藥理的研究等等。近年來，中藥血清藥理學(xué)的研究在治療胃潰瘍方面取得了一定成績(jī)，從細(xì)胞和分子學(xué)角度闡述中藥復(fù)方治療脾虛型胃潰瘍作用機(jī)制，從而更好指導(dǎo)臨床治療?，F(xiàn)綜述如下。

1 中藥含藥血清治療脾虛型胃潰瘍作用機(jī)制

胃潰瘍是一種慢性復(fù)發(fā)性病變?，F(xiàn)代研究認(rèn)為［4］，其發(fā)生的機(jī)制系由攻擊因子和防御因子失衡所致。脾虛證患者常見胃腸運(yùn)動(dòng)和消化功能異常，神經(jīng)體液調(diào)節(jié)紊亂以及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝障礙等。胃酸作為一種重要的消化液直接參與機(jī)體的消化功能，脾虛時(shí)胃酸分泌的異常變化與機(jī)體消化功能紊亂密切相關(guān)。近年來，分子生物學(xué)和超微結(jié)構(gòu)的研究證明，胃壁細(xì)胞作為胃內(nèi)泌酸的關(guān)鍵細(xì)胞，與胃內(nèi)酸堿度的維持、離子通道及神經(jīng)體液的相互調(diào)節(jié)都密切相關(guān)。在泌酸過程中，壁細(xì)胞通過其表面的各類受體及胞內(nèi)一系列形態(tài)學(xué)改變來完成［5］。脾虛時(shí)壁細(xì)胞的形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)會(huì)發(fā)生相應(yīng)的改變，這種改變必然會(huì)影響到壁細(xì)胞的泌酸功能，導(dǎo)致潰瘍病發(fā)生［6］。

中藥血清藥理學(xué)作為研究中藥藥理作用的一種實(shí)驗(yàn)方法，比較真實(shí)地反映治療脾虛型胃潰瘍有效中藥復(fù)方的藥效及其作用環(huán)境，從改善壁細(xì)胞的泌酸功能，調(diào)節(jié)受體結(jié)合及其離子通道等方面闡述中藥復(fù)方治療脾虛型胃潰瘍作用機(jī)理，并有助于中藥復(fù)方化學(xué)成分研究及中藥藥動(dòng)學(xué)的深入研究。

1.1 中藥含藥血清對(duì)胃酸分泌功能的影響

壁細(xì)胞分泌的胃酸在病理情況下可作為攻擊因子與潰瘍病產(chǎn)生關(guān)系密切。有研究表明，胃酸分泌過多或過少都會(huì)影響機(jī)體的正常生理功能，產(chǎn)生酸分泌相關(guān)性疾病。脾虛患者胃泌酸功能降低，益氣健脾藥物對(duì)胃酸分泌功能具有調(diào)節(jié)作用。經(jīng)益氣健脾藥物治療后，脾虛癥狀逐漸恢復(fù)至正常狀態(tài)，胃酸分泌功能也逐漸恢復(fù)正常。趙氏等［7］采用弱堿吖啶橙作為探針，雙波長(zhǎng)熒光分光光度計(jì)檢測(cè)壁細(xì)胞的泌酸功能，用補(bǔ)中益氣湯含藥血清作用大鼠離體胃壁細(xì)胞。得出結(jié)論:大黃脾虛模型大鼠離體壁細(xì)胞基礎(chǔ)狀態(tài)下胃酸分泌功能低下，但是對(duì)磷酸組胺的刺激作用較正常大鼠敏感。補(bǔ)中益氣湯離體含藥血清刺激，對(duì)于脾虛大鼠離體壁細(xì)胞的胃酸分泌功能有比較明顯的調(diào)節(jié)作用。

1.2 中藥含藥血清對(duì)胃泌素受體結(jié)合作用的影響

胃泌素是與胃酸分泌功能密切相關(guān)的激素，由胃竇G細(xì)胞所分泌，作用于壁細(xì)胞膜上的胃泌素受體(壁細(xì)胞是胃泌素的主要靶細(xì)胞)，而促使胃壁細(xì)胞的泌酸作用。胃泌素可直接作用于細(xì)胞而促進(jìn)胃腸道粘膜的生長(zhǎng)作用(特別是胃泌酸區(qū)粘膜)和刺激胃腸胰蛋白質(zhì)、RNA、DNA合成增加，維持胃黏膜的完整性，是胃粘膜的主要保護(hù)因子之一［8］。另一方面又能作為胃酸分泌的主要刺激因子而刺激胃酸分泌。胃泌素與其受體的正常結(jié)合和受體的良好介導(dǎo)是壁細(xì)胞泌酸功能得以正常發(fā)揮的前提和保證［9，10］。

胃壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合位點(diǎn)數(shù)降低提示該受體介導(dǎo)的胃泌素的生理功能會(huì)弱化，使得胃黏膜的保護(hù)作用下降，易引發(fā)胃潰瘍疾病。大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，脾虛大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)低于正常大鼠，但是其親和力高于正常大鼠。經(jīng)益氣健脾藥物治療后能調(diào)節(jié)受體的變化，使得受體的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)升高及親和力下降，兩者接近恢復(fù)正常。隋氏等［11］采用放射配基結(jié)合法觀察了補(bǔ)中益氣湯、黨參、白術(shù)等補(bǔ)脾方藥血清對(duì)離體脾虛大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體結(jié)合作用的影響，結(jié)果表明，脾虛大鼠胃泌素受體結(jié)合容量減少(P<0.01)，補(bǔ)脾方藥血清作用后結(jié)合位點(diǎn)數(shù)上升，因此推測(cè)，補(bǔ)脾方藥血清對(duì)脾虛大鼠的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)下降具有上調(diào)作用;補(bǔ)脾方藥血清可從受體水平恢復(fù)脾虛大鼠的病理狀態(tài)，其機(jī)制可能與其同胃泌素受體的競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合相關(guān)。許氏等［12］采用放射配基受體結(jié)合法，觀察到補(bǔ)中益氣湯含藥血清、參麥注射液、黃芪多糖能抑制大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體與125I－胃泌素的特異性結(jié)合。因此推測(cè)補(bǔ)中益氣湯含藥血清等對(duì)大鼠胃壁細(xì)胞胃泌素受體的結(jié)合作用有一定影響，補(bǔ)中益氣湯調(diào)節(jié)胃泌素受體復(fù)健脾虛證的機(jī)理可能在于與胃泌素受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。

1.3 中藥含藥血清對(duì)胃壁細(xì)胞胞內(nèi)［Ca2+］i的影響

Ca2+是胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)樞紐，廣泛參與體內(nèi)多種生理效應(yīng)的調(diào)節(jié)，與IP3和DG一起并稱為第二信使聯(lián)合體。由胞內(nèi)第二信使激活的蛋白激酶系統(tǒng)有APK系統(tǒng)(cAMP－PK)，GPK系統(tǒng)(eGMP－PK)，PKC系統(tǒng)(磷脂/Ca2+－PK 及 Ca2+/CaM－PK 等)［11］。有研究表明［13］:鈣離子作為受體后胞內(nèi)信使轉(zhuǎn)導(dǎo)樞紐與壁細(xì)胞的主要生理功能－泌酸關(guān)系密切。組胺、乙酰膽堿、胃泌素等酸分泌刺激因子作為第一信使作用于壁細(xì)胞上的相應(yīng)的受體，皆可引起胞內(nèi)鈣離子水平的明顯升高，在其下游信使的傳導(dǎo)下，激活一系列生化反應(yīng)，最后H+－K+－ATPase活化泌H+［14］。補(bǔ)脾方藥可不同程度逆轉(zhuǎn)和恢復(fù)脾虛證在Ca2+這一環(huán)節(jié)的異常變化，在減輕脾虛癥狀的同時(shí)，從分子水平不同程度恢復(fù)和改變?cè)摬±頎顟B(tài)。

隋氏等［11］采用血清藥理學(xué)方法對(duì)分離后的大鼠壁細(xì)胞在體外給藥，得出靜息狀態(tài)下脾虛模型組大鼠壁細(xì)胞胞內(nèi)［Ca2+］i明顯低于正常組，胃泌素負(fù)荷后胞內(nèi)［Ca2+］i的增高幅度模型組明顯大于正常組;脾虛大鼠經(jīng)補(bǔ)脾方藥血清作用后各組的［Ca2+］i均介于正常組與模型組之間，其中黨參處理組的增高幅度與模型組相比差異顯著，提示補(bǔ)脾方藥血清可不同程度恢復(fù)和逆轉(zhuǎn)脾虛大鼠在Ca2+這一環(huán)節(jié)的異常變化;脾虛大鼠壁細(xì)胞胞內(nèi)CaM及PKII的活性均明顯高于正常大鼠，補(bǔ)脾方藥血清作用后活性有所降低，推測(cè)脾虛大鼠可能在這一環(huán)節(jié)出現(xiàn)了代償，補(bǔ)脾方藥血清在減輕脾虛癥狀的同時(shí)，可從分子水平不同程度恢復(fù)和改變?cè)摬±頎顟B(tài)。

2 討論與展望

中藥血清藥理學(xué)是日本學(xué)者在1984年提出的，并由田代真一命名［15］。血清藥理學(xué)方法已被廣泛用于中醫(yī)藥作用機(jī)制的研究，研究層面已涉及到細(xì)胞增殖、分化、凋亡與細(xì)胞周期的調(diào)節(jié)以及基因表達(dá)和端粒酶活性調(diào)控等方面［16］。胃壁細(xì)胞作為酸分泌細(xì)胞，對(duì)胃內(nèi)酸堿平衡的維持和調(diào)節(jié)起著至關(guān)重要作用。脾虛時(shí)壁細(xì)胞的形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)和泌酸功能發(fā)生相應(yīng)的改變，從分子水平探討了中藥復(fù)方治療胃潰瘍的作用機(jī)制，為我們更深入全面地了解和研究中藥治療胃潰瘍的全過程，找到治療的新靶點(diǎn)提供了新思路和新方法。

中藥血清藥理學(xué)作為一種新興的研究方法也存在許多不足之處，實(shí)驗(yàn)技術(shù)和具體操作有待規(guī)范，實(shí)驗(yàn)的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括動(dòng)物選擇、給藥方案、采血時(shí)間和方法以及血清預(yù)處理等，還需要不斷摸索［17］。同時(shí)，血清藥理學(xué)方法應(yīng)用于壁細(xì)胞還應(yīng)注意［18］:在細(xì)胞的制備階段應(yīng)在提高純度的基礎(chǔ)上盡量保持細(xì)胞的活性，因此分離細(xì)胞時(shí)采用消化－攪拌－再消化、即消化與攪拌交替的方法;另外，藥物與細(xì)胞作用期間溫度應(yīng)盡量保持與生理?xiàng)l件下相一致以使細(xì)胞對(duì)藥物的反應(yīng)更接近于機(jī)體狀態(tài)。中藥血清藥理學(xué)因其方法學(xué)上的特點(diǎn)，為中醫(yī)學(xué)的研究提供了新思路。從方法學(xué)上解決了中藥復(fù)方直接應(yīng)用于離體實(shí)驗(yàn)的難點(diǎn)［19］，使對(duì)胃潰瘍的研究能在離體實(shí)驗(yàn)中直接與分子生物學(xué)技術(shù)相結(jié)合，進(jìn)一步探討中藥治療胃潰瘍的作用機(jī)制。今后，隨著研究技術(shù)的不斷完善，中藥血清藥理學(xué)在研究胃潰瘍領(lǐng)域?qū)?huì)發(fā)揮越來越重要的作用。

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