付 宇，高 建，趙 宇，孫艷芳，劉秀梅，丁笑麗

（黑龍江省疾病控制中心，黑龍江 哈爾濱150030）

烏頭堿是一種二萜生物堿。存在于川烏、草烏、附子等植物中的主要有毒成份。民間常用草烏、川烏等植物來(lái)泡制藥酒。烏頭堿為二元酯類化合物，分子式為C34H47NO11，水溶液對(duì)石蕊呈堿性反應(yīng)。溶于無(wú)水乙醇、乙醚和水，微溶于石油醚。易水解失去一分子乙酸，毒性即降低，進(jìn)一步水解除去一分子苯甲酸生成烏頭胺，，臨床上用于緩解癌痛，尤其適用于消化系統(tǒng)癌痛；外用時(shí)能麻痹周圍神經(jīng)末梢，產(chǎn)生局部麻醉和鎮(zhèn)痛作用；有消炎作用，還有發(fā)汗作用。烏頭堿對(duì)各種神經(jīng)痛和痛風(fēng)有鎮(zhèn)痛作用。近些年來(lái)，以烏頭堿為主要功效成分的保健食品日益增多，但是樣品基質(zhì)成分相對(duì)復(fù)雜，本文參考相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道在大量實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)不同種類的保健食品處理方法進(jìn)行摸索，調(diào)節(jié)酸堿度，經(jīng)濃氨試液-甲醇（2∶20）混合溶液處理，以乙醚振搖萃取，干擾少，峰形好，減少了對(duì)色譜柱的污染。適用于各類保健食品的測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器及試劑

高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）；恒溫水浴鍋。

甲醇（色譜純）；石油醚（30～60℃）、氨水、冰乙酸，均為分析純。

烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)品10mg置于10 mL容量瓶中，加入甲醇使其溶解并定容至刻度，混勻，此溶液濃度為1.0mg·mL-1。臨用時(shí)用甲醇稀釋為50μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)使用液。

烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)溶液系列：分別吸取標(biāo)準(zhǔn)使用液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0mL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得濃度為0.0、5.0、10.0、15.0、20.0，25.0、50.0μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)系列。

1.3 儀器條件

色譜柱：DiamonsilTMC18柱，150×4.6mm，5μm；

柱溫：室溫；

流動(dòng)相：甲醇-0.1%三乙胺（70∶30）為流動(dòng)相；

流速：1.2mL·min-1；

進(jìn)樣量：10μL；

檢測(cè)波長(zhǎng)：232nm。

1.4 樣品處理

稱取試樣2g，置于干燥燒杯中，精密加入濃氨試液-甲醇（2∶20）混合溶液50mL，冷浸1h后加熱回流1h，放冷，搖勻，過(guò)濾，將濾液蒸干，加水l0mL使殘?jiān)芙猓糜诜忠郝┒分屑右颐颜駬u萃取3次，乙醚用量依次為10、10、5mL，收集乙醚液，蒸干，殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至5mL容量瓶中，搖勻，定容，用濾膜過(guò)濾備用。

2 結(jié)果與討論

2.1 回歸方程與最低檢出限

用濃度為 0.0、5.0、10.0、15.0、20.0，25.0、50.0μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣分析，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)系列線性回歸方程為y=-12419.30x+8469.37，相關(guān)系數(shù)r=0.9997，烏頭堿在0～50μg·mL-1的線性范圍內(nèi)最低檢出限為0.5μg·mL-1。

2.2 精密度及回收率

對(duì)同一樣品連續(xù)測(cè)定10次，結(jié)果RSD為6.7%。以3種樣品為本底，分別加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，回收率為85.8%～92.7%。見(jiàn)表1。

表1 烏頭堿回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Experimental results of aconitine recovery

從1表中數(shù)據(jù)可知，此方法回收率好，準(zhǔn)確度較高；在實(shí)際工作中具有較高的可行性。

2.3 測(cè)定方法的選擇

烏頭堿常見(jiàn)的測(cè)定方法是化學(xué)法和薄層掃描法[2]等，這些方法操作比較繁瑣，且操作時(shí)間較長(zhǎng)，容易受到干擾。高效液相色譜法分離速度快，檢測(cè)靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，應(yīng)用范圍廣，分離效率高，峰形正常，線性范圍較寬，選擇性好，重現(xiàn)性好，特別適合復(fù)雜樣品的分離測(cè)定，已經(jīng)成為應(yīng)用最為廣泛和有效的分離分析手段。

2.4 樣品提取條件的選擇

樣品用濃氨試液-甲醇混合溶液處理，可有效去除試樣中其他物質(zhì)，減少色譜干擾。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1、2。

圖1 標(biāo)樣譜圖Fig.1 Spectrogram of standard samples

圖2 樣品譜圖Fig.2 Spectrogram of samples

由圖1、2可見(jiàn)，文中所述樣品制備方法可有效的去除保健食品中復(fù)雜基質(zhì)的干擾，純化了樣品溶液，減少了其對(duì)色譜柱及檢測(cè)器的污染。

3 結(jié)論

通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，此方法快速簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確率高，適合保健食品中的烏頭堿的分析測(cè)定。

［1］中華人民共和國(guó)藥典（一部制川烏）［M］.化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［2］王浴銘.活血壯筋丹中烏頭堿含量的雙波長(zhǎng)薄層掃描法測(cè)定［J］.中成藥研究.