朱美紅,陳 霞,倪巧云

酮康唑 (Ketoconazole,KCZ)對(duì)多種不同類型的念珠菌、皮膚真菌、酵母菌和其他致病真菌有較強(qiáng)的抑制作用。但由于其不溶于水且結(jié)構(gòu)中有酰胺基和醚基,化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,易氧化變色。β-環(huán)糊精包合物可用于改善難溶性藥物的溶解度和溶出度,掩蓋藥物不良臭味和降低刺激性,提高藥物的穩(wěn)定性等[1]。故采用包合技術(shù),將酮康唑制成β-環(huán)糊精包合物,從而改善其物理特性,增加其穩(wěn)定性。

1 材料

TU-1901雙光束紫外可見分光光度計(jì) (北京普析通用化器有限責(zé)任公司);KQ-250D E型數(shù)控超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);真空泵(天津奧特賽恩斯儀器有限公司);AX205電子精密天平 (上海梅特勒-托利多儀器有限公司)。酮康唑 (南京白敬宇制藥有限責(zé)任公司,批號(hào): 060406,含量:100%);β-環(huán)糊精 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號(hào):F20080418),其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1.1 β-CD包合物制備工藝 精密稱取一定量β-CD,加入純化水,超聲使成飽和溶液。另精密稱取一定量酮康唑,用甲醇溶解,超聲下將其緩緩滴入β-CD飽和溶液中,超聲處理一定時(shí)間,放冷至室溫,然后放入冰箱中冷藏 24h,抽濾,固體物先用甲醇洗滌,再用純化水洗滌,抽干,干燥得酮康唑-β-CD包合物,稱重。

2.1.2 因素及水平 選擇β-CD與酮康唑的比例(A)、包合溫度(B)、包合時(shí)間 (C)為考察因素,每個(gè)因素設(shè)置 3個(gè)水平,見表 1,按 L9(34)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)。

表1 因素水平表

2.1.3 包合率測(cè)定與計(jì)算 以酮康唑的包合率為考察指標(biāo)篩選最佳工藝條件。以下式計(jì)算包合物包合率:藥物包合率 =(包合物中含酮康唑量/酮康唑投入量)×100%。

2.2 包合物中酮康唑的含量測(cè)定

2.2.1 貯備液制備 精密稱取酮康唑 54.5 mg置100 mL量瓶中,用無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻。

2.2.2 吸收波長(zhǎng)選擇 分別將酮康唑、β-環(huán)糊精及酮康唑β-環(huán)糊精包合物的乙醇溶液在 190～420 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描,酮康唑溶液在245 nm波長(zhǎng)處有最大吸收峰,酮康唑β-環(huán)糊精包合物與酮康唑的最大吸收波長(zhǎng)一致,而β-環(huán)糊精在此無(wú)吸收,故選擇 245 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 精密吸取酮康唑貯備液 0.5、 1.0、1.5、2.0、2.5 mL至 50 mL量瓶中,加乙醇定容,使每 1 mL含 5.45、10.90、16.35、21.80、27.25 μg酮康唑,以乙醇為空白,在 245 nm處測(cè)定吸光度值,以濃度 C對(duì)吸光度 A回歸得酮康唑溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 A=0.031 1C+0.025 6(r= 0.999 1,n=5)。

2.2.4 回收率試驗(yàn) 配制一定濃度的酮康唑乙醇溶液,加入適量的β-CD,按“2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定吸收度,求回收率。平均回收率為 96.63%, RSD為 0.08%(n=5)。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 按線性范圍分別配制高、中、低 3種濃度的酮康唑乙醇溶液,按“2.2.3”項(xiàng)下方法測(cè)定。日內(nèi)精密度 RSD分別為 0.06%、0.05%、0.03%(n=5)。

2.2.6 樣品測(cè)定 精密稱取包合物樣品約 5 mg,用無(wú)水乙醇定容至 25 mL,超聲使之溶解,在245 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,利用回歸方程計(jì)算樣品溶液的濃度,求出包合物中的酮康唑含量。

2.2.7 正交試驗(yàn)結(jié)果 酮康唑β-CD包合工藝條件篩選的正交試驗(yàn)結(jié)果見表 2,對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析,結(jié)果見表 3。

2.2.8 直觀分析 極差 R確定主次因素順序: B>A>C,因此,B為主要因素,對(duì)結(jié)果有較大的影響;A為次要因素;C因素的影響最小。因此,可以確定A3B3C2為較優(yōu)處方工藝條件。即處方為主客分子比為 1∶5,用甲醇做溶媒,50℃下超聲40 min為宜。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)及包合物的鑒定 依照 A3B3C2處方重復(fù) 5次,以進(jìn)一步驗(yàn)證處方工藝的合理性,結(jié)果制得樣品的包合率均值為 60.37%。均高于試驗(yàn)設(shè)計(jì)中 9種處方工藝。包合物的鑒定:用紫外分光光度法。將酮康唑及酮康唑β-環(huán)糊精包合物乙醇溶液在 190～420 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行紫外掃描,比較二者的紫外掃描圖譜。結(jié)果可見,酮康唑和酮康唑β-環(huán)糊精包合物的吸收?qǐng)D譜完全一致,說明主藥未發(fā)生化學(xué)變化,而是通過物理包合作用形成了包合物。紫外掃描圖譜見圖 1。

圖1 酮康唑、β-環(huán)糊精、酮康唑β-環(huán)糊精的包含物的紫外掃描圖譜

電鏡觀察:分別對(duì)酮康唑、β-環(huán)糊精及酮康唑β-環(huán)糊精包合物進(jìn)行電鏡觀察,并對(duì)觀察結(jié)果進(jìn)行比較。酮康唑β-環(huán)糊精包合物與酮康唑和β-環(huán)糊精的晶形均不相同,說明有新的包合物生成。

3 討論

制備時(shí)采用甲醇作為酮康唑的溶解劑,而未采用毒性相對(duì)小的乙醇,是由于酮康唑在甲醇中溶解[2],而在乙醇中微溶,處方量酮康唑無(wú)法在乙醇中完全溶解。因此,在制備包合物時(shí),先用甲醇將酮康唑溶解,在包合物制備完成后,可用甲醇洗去未被包合的酮康唑,然后用水洗去包合物表面的甲醇。本實(shí)驗(yàn)采用了超聲波技術(shù),是因?yàn)椴捎贸暡夹g(shù)有利于包合物的形成[3]。本實(shí)驗(yàn)所用超聲波的功率為 250 W,為該 KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器的最大功率。在相同條件下,使用該功率所得包合率略高于其他功率。

制備的酮康唑β-環(huán)糊精包合物為白色無(wú)味的粉末,性質(zhì)穩(wěn)定,不易氧化,形成包合物后,水中溶解度比原料增加約 30倍。超聲法制備酮康唑β-環(huán)糊精包合物具有時(shí)間短、設(shè)備少、工藝簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。該包合工藝方法簡(jiǎn)便,宜于醫(yī)院開展。

[1] 陸彬.藥物新制劑與新技術(shù)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社, 2000:34-36.

[2] 中國(guó)藥典.二部[S].2005:801-802.

[3] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局執(zhí)業(yè)藥師資格認(rèn)證中心.藥學(xué)專業(yè)知識(shí)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2008:208.