呂進(jìn)泉　張曉鳴　呂劍平　忻　悅　唐　燕

[摘要] 目的探討銀杏內(nèi)酯B協(xié)同地塞米松對(duì)支氣管哮喘氣道變應(yīng)性炎癥及輔助T細(xì)胞亞群的作用。方法40只BALB/c小鼠隨機(jī)分成正常對(duì)照組、哮喘對(duì)照組、地塞米松組、銀杏內(nèi)酯B組和聯(lián)合干預(yù)組,每組8只。收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),行白細(xì)胞(WBC)及嗜酸性粒細(xì)胞( EOS)計(jì)數(shù);應(yīng)用ELISA法測(cè)定BALF中IFN-γ和IL-4水平。結(jié)果BALF中WBC及EOS計(jì)數(shù):3個(gè)用藥組較哮喘對(duì)照組明顯減少(P<0.01),聯(lián)合干預(yù)組減少的程度大于地塞米松組(P<0.05)、銀杏內(nèi)酯B組(P<0.01)。3個(gè)用藥組小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平 與哮喘對(duì)照組比較,銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分別增高和降低(P<0.05或P<0.01),而聯(lián)合干預(yù)組增高和降低的程度大于地塞米松組(P<0.01)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.05)。結(jié)論銀杏內(nèi)酯B能減輕小鼠哮喘模型BALF中炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并減少IL-4的水平;銀杏內(nèi)酯B與激素具有協(xié)同抗炎作用;同時(shí)具有更好的調(diào)節(jié)Th亞群失衡的作用。

[關(guān)鍵詞] 支氣管哮喘; 銀杏內(nèi)酯B; 氣道炎癥; T輔助細(xì)胞亞群

[中圖分類號(hào)] R969 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701(2009)23-25-02

Effects of Ginkgolide B Coordinated with Dexamethasone on Allergic Airway Inflammation and T Helper Cell Subsets in Asthmatic Rats

LV Jinquan ZHANG Xiaoming LV Jianping XIN Yue TANG Yan

Pediatrics Department,the Affiliated Hospital of Jiangsu University,Zhenjiang 212001,China

[Abstract]ObjectiveTo investigate the effects of Ginkgolide B(GB)coordinatedwith Dexamethasone(DXM)on allergic airway inflammation and T helper cell subsets in asthmatic rats. Methods Forty BALB/c rats were randomly divided into 5 groups equally:the normal group,the asthma model group,the DXM group,the GB group and the DXM+GB group. The WBC count and eosinophil(EOS)count in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) were estimated and ELISA was used to determine the concentrations of IFN-γ and IL-4 in BALF. ResultsCompared with the asthma model group,EOS and WBC count and IL-4 level in BALF were significantly lower in the three treated groups(P<0.01),particularly in the DXM+GB group,showing a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01),whereas IFN-γ level was increased. And in the DXM+GB group,they showed a significant difference as compared with the other two groups(P<0.05 or P<0.01). ConclusionGingkgolide B has an inhibitory effect synergistic with Dexamethasone in airway inflammation,and might partly reverse T helper cell subsets in rats with asthma.

[Key Words]Asthma; Gingkgolide B; Inflammation; T-lymphocyte cell subsets

目前,PAF拮抗劑成為哮喘治療的研究方向之一,本文探討天然PAF拮抗劑——銀杏內(nèi)酯B對(duì)哮喘小鼠氣道炎癥和T輔助細(xì)胞(Th)亞群平衡的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

鼠齡6周的雄性SALB/c純系小鼠40只,體重20～25g,由江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。隨機(jī)分為正常對(duì)照組、哮喘對(duì)照組、地塞米松組、銀杏內(nèi)酯組和聯(lián)合干預(yù)組,每組8 只。

1.2 模型建立和給藥方法

除正常對(duì)照組,其余各組均按文獻(xiàn)[1]的方法建立哮喘模型。給藥方法:地塞米松組和銀杏內(nèi)酯組小鼠每次霧化前30min分別予以腹腔注射地塞米松注射液(1mg/kg)、銀杏內(nèi)酯B 2mg/kg,聯(lián)合干預(yù)組則同時(shí)給予銀杏內(nèi)酯B 2mg/kg和地塞米松注射液(1mg/ kg),哮喘對(duì)照組腹腔內(nèi)注入生理鹽水,正常對(duì)照組則以注射生理鹽水代替OVA致敏和激發(fā)。

1.3 支氣管肺泡灌洗液細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類

最后一次霧化24h后行氣管插管,用生理鹽水0.6mL灌洗支氣管肺泡,反復(fù)沖洗3次,收集支氣管肺泡灌洗液(BALF),取0.1mL BALF與白細(xì)胞稀釋液1︰1 稀釋,用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)炎癥細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性細(xì)胞數(shù)量;另外BALF以1200×g離心10min,收集上清液計(jì)量體積后置于EP管中,-20℃保存,用于IFN-γ和IL-4測(cè)定。

1.4 IFN-γ和IL-4水平測(cè)定

用小鼠IFN-γ和IL-4 ELISA試劑盒(購(gòu)自武漢晶美生物工程有限公司)檢測(cè)BALF上清中IFN-γ和IL-4水平,根據(jù)吸光度(A)值計(jì)算出標(biāo)本中IFN-γ和IL-4的水平。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

用SAS6.12進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,白細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果呈非正態(tài)分布,用范圍和中位數(shù)表示,多組間比較用非參數(shù)Kruskal-Wallis檢驗(yàn),兩組間比較用Wilcoxon秩和檢驗(yàn); IFN-γ和IL-4以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(χ±s)表示,用多組間比較及兩兩比較均用方差分析(F檢驗(yàn))。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠BALF中白細(xì)胞總數(shù)(WBC)及嗜酸性粒細(xì)胞(EOS)計(jì)數(shù)結(jié)果

與哮喘對(duì)照組比較,銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF中WBC 及EOS計(jì)數(shù)顯著減少(P<0.01),而聯(lián)合干預(yù)組BALF中WBC及EOS計(jì)數(shù)減少的程度大于地塞米松組(P<0.05)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.01)。見表1。

2.2 各組小鼠BALF上清中IFN-γ和IL-4水平

與哮喘對(duì)照組比較,銀杏內(nèi)酯組、地塞米松組和聯(lián)合干預(yù)組BALF上清中IFN-γ和IL-4水平分別增高和降低(P<0.01),而聯(lián)合干預(yù)組增高和降低的程度大于地塞米松組(P<0.01)、銀杏內(nèi)酯組(P<0.05)。見表2。

3 討論

支氣管哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞分泌的多種炎性介質(zhì)參與的氣道慢性炎癥,且Th失衡在哮喘發(fā)病中起重要作用。Th分為Th1和Th2兩種類型,Th1分泌IFN-γ,Th2分泌IL-4和IL-5,因此檢測(cè)IFN-γ和IL-4水平可間接反映Th1類細(xì)胞和Th2類細(xì)胞間的平衡。本組資料表明哮喘對(duì)照組小鼠BALF中嗜酸性細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增高,提示哮喘患者發(fā)生了以嗜酸性細(xì)胞浸潤(rùn)為主的氣道炎癥;同時(shí)IL-4高于正常,而IFN-γ低于正常對(duì)照組,表明哮喘患者Th1功能低下,而Th2功能相對(duì)亢進(jìn)。Th2分泌的IL-4是促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞聚集、增生的主要細(xì)胞因子,嗜酸性粒細(xì)胞聚集于氣道可釋放多種炎癥介質(zhì),兩者共同作用,促使哮喘患者產(chǎn)生以嗜酸粒細(xì)胞浸潤(rùn)為主的氣道變應(yīng)性炎癥,IFN-γ可拮抗IL-4的作用。

激素作為非特異性炎性介質(zhì)拮抗劑是目前治療哮喘的基本藥物,本研究表明,地塞米松組BALF嗜酸性粒細(xì)胞和IL-4均明顯下降,IFN-γ有所增高,表明激素可有效減輕氣道炎癥,并可糾正Th亞群失衡。近年來隨著人們對(duì)于多種炎性介質(zhì)及其拮抗劑研究的不斷深入,特異性炎性介質(zhì)拮抗劑已成為哮喘治療的發(fā)展方向。目前,白三烯受體拮抗劑已用于哮喘的臨床治療,而在眾多炎性介質(zhì)中,PAF是已知的最強(qiáng)的支氣管致痙劑,其致痙作用比白三烯和組織胺強(qiáng),且比乙酰膽堿所致的支氣管痙攣?zhàn)饔脧?qiáng)1000倍[3]。PAF可通過趨化作用和與血小板的相互作用使嗜酸性粒細(xì)胞等聚集于氣道并釋放多種炎癥介質(zhì)導(dǎo)致哮喘,并能增加氣道反應(yīng)性。有研究證實(shí),哮喘患者BALF中PAF明顯增高,動(dòng)物氣霧吸入PAF后可出現(xiàn)哮喘,我們亦有研究證實(shí)哮喘患者發(fā)作期血漿PAF水平明顯增高[3],表明PAF是一種重要的致喘介質(zhì)參與了哮喘的發(fā)病機(jī)制。因而探求PAF拮抗劑有望成為預(yù)防和治療哮喘的一類新型藥物。銀杏內(nèi)酯B是由銀杏葉的提取物精制而成,具有很強(qiáng)的拮抗PAF的作用,有研究表明銀杏內(nèi)酯B可顯著抑制由塵螨和花粉刺激誘發(fā)的支氣管收縮;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)它亦可以明顯減弱PAF所致的豚鼠肺條收縮作用,并降低BALF中IL-5的水平[4]。在應(yīng)用銀杏葉片治療哮喘病人臨床療效觀察中證實(shí),銀杏葉片能抑制哮喘患者的嗜酸性粒細(xì)胞對(duì)氣道的浸潤(rùn),并改善哮喘患者肺功能、提高臨床癥狀控制率[5,6]。本研究表明,銀杏內(nèi)酯B能減輕小鼠哮喘模型BALF中炎性細(xì)胞浸潤(rùn),并減少IL-4的水平;與地塞米松聯(lián)合應(yīng)用,氣道內(nèi)嗜酸性粒細(xì)胞和IL-4水平下降更為明顯,提示銀杏內(nèi)酯B與激素具有協(xié)同抗炎作用;同時(shí)具有更好的調(diào)節(jié)Th亞群失衡的作用。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Salmon M,Walsh DA,Koto H,et al. Repeated allerge exposure of sensitized Brown-Norway rats induces airway cell DNA synthesis and remodeling[J]. Eur Respir J,1999,14(3):633-641.

[3] 呂進(jìn)泉,周弘,呂劍平,等. 哮喘患兒血漿血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α和血小板活化因子水平變化及意義[J]. 實(shí)用兒科臨床雜志,2003, 18(6):445-446.

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(收稿日期:2009-06-03)