陳燕平　孫利偉　鄧衛(wèi)清

【摘要】 目的 建立反相高效液相色譜法同時測定杜仲葉京尼平苷含量的方法。方法 高效液相色譜法。結果 杜仲葉京尼平苷在0.26~2.60 μg范圍內線形關系良好（r=0.999 9），平均加樣回收率99.94%，RSD=0.6%（n=6）。結論 成分的峰分離效果好，其測定方法操作簡便、準確、重復性良好，可作為杜仲葉中京尼平苷的質量控制方法。

【關鍵詞】 RP-HPLC法；杜仲葉；京尼平苷

The determination of geniposide in folium cortex eucommia by RP-HPLC

CHEN Yan-ping, SUN Li-wei, DENG Wei-qing.Xinxiang Central Hospital,Henan Xinxiang 453000，China

【Abstract】 Objective To establish a new RP-HPLC method for simultaneous determination of geniposide in folium cortex eucommia.Methods HPLC method.Results The standard geniposide(showed a good linear correlation within the concentration of 0.26~2.60 μg，（r=0.999 9），the average recovery of the sample was 99.94%，RSD=0.6%（n=6）.Conclusion The peaks of the components were separated effectly，the method is simple，accurate and reproducible and can be used for the quality control of geniposide in folium cortex eucommia.

【Key words】 RP-HPLC； Eucommia ulmoides oliv.leaf；Geniposide

杜仲（Eucommia uimoides Oliv.）具有消炎抑菌、補腎降壓、增強免疫功能及抗癌、抗疲勞、抗衰老、止痛鎮(zhèn)靜、補肝腎、強筋骨和安胎等作用［1，2］，是我國珍稀瀕危二級保護植物，傳統(tǒng)以皮入藥。杜仲葉因其化學成分、藥效與杜仲皮相似而代皮入藥［3］，2005版中國藥典將綠原酸定為評價杜仲葉質量優(yōu)劣的主要技術指標［4］。有報道京尼平苷(geniposide,GP) 、京尼平苷酸( geniposidic acid,GA) 及綠原酸(chlorogenic acid,CGA) 為杜仲中重要的生物活性成分［5,6］，近幾年，以杜仲葉為主開發(fā)了很多系列保健品、藥品。為了有效地控制杜仲葉的質量，本文采用反相高效液相色譜法測定了杜仲葉中京尼平苷的含量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 LC-10A型高效液相色譜儀（日本島津），SPD-10AVP紫外檢測器（日本島津），浙大智達N2000色譜工作站，METILER TOLEDO AG135十萬分之一電子天平；TP300超聲波清洗機（北京天鵬電子新技術有限責任公司）。

1.2 試藥 甲醇為色譜純（天津四友精細化工試劑廠），水為超純水，其余所用試劑均為分析純；京尼平苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號 110749-200613，供含量測定用）；杜仲葉2008年9月采自河南省靈寶市中國林科院經濟林研究開發(fā)中心杜仲研究基地，經筆者鑒定為杜仲科植物杜仲Eucommia uimoides Oliv.的干燥葉。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Diamonsil-C18色譜柱(5 μm,250 mm×4.6 mm),流動相為甲醇-水-冰醋酸(17:83:1.5),流速1.0 ml/min；檢測波長240 nm；柱溫25℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取京尼平苷（GP）對照品1.3 mg置10 ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得。

2.3 供試品溶液的制備與測定 精密稱取杜仲葉粉末（過三號篩）約0.25 g，定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25 ml，稱定重量，超聲處理60 min 3次，放冷至室溫用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，再經0.45 μm微孔濾膜濾過，備用。

2.4 線性關系的考察 分別精密吸取“2.2”項下的對照品溶液2、4、6、10、15、20 μl進樣。按HPLC條件測定峰面積積分值，以峰面積積分值為縱坐標，以對照品進樣量為橫坐標，進行線性回歸分析,京尼平苷回歸方程Y=2×10 6X+54 355，r=0.999 9，在0.26~2.60 μg有很好的線性。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取杜仲葉供試品溶液，分別于0、2、4、8、12 h進樣20 μl，計算京尼平苷峰面積積分值的RSD=1.50%，樣品在12 h內穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗 對同一杜仲葉供試品溶液連續(xù)進樣5次，每次20 μl，分別計算含量，結果京尼平苷含量的RSD=0.58%（n=5）。

2.7 回收率試驗 取同一批已知含量的杜仲葉粉末6份，分別加入0.13 mg/ml的京尼平苷對照品溶液1 ml、按“2.3”項下的制備與測定項下所述方法制得溶液并測定，計算加樣回收率，結果見表1。

2.8 樣品測定 取同一批樣品6份，按“2.3”項下供試品溶液的制備項下所述方法進行操作，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μl，注入高效液相色譜儀，京尼平苷保留時間45 min，計算得京尼平苷含量0.07%。樣品溶液、對照品溶液的色譜圖見圖1、2。

3 小結

在測定波長的選擇上，取京尼平苷對照品置于190~400 nm波長范圍內進行光譜掃描，選定240 nm為測定波長，分離效果好，無干擾。在提取溶媒選擇上，筆者分別用純水、25%、50%、75%、純甲醇提取，測定結果顯示50%甲醇溶液提取率相對最高。

筆者采用RP-HPLC法測定了杜仲葉中京尼平苷的含量，該方法快速、準確、操作簡便，重現(xiàn)性好，可作為杜仲葉中重要成分質量控制的方法；從而為杜仲葉綜合研究開發(fā)提供依據(jù)一定理論依據(jù)。

參 考 文 獻

［1］ 趙軍太，張誠.杜仲的不同部位的化學成分研究與應用.實用醫(yī)技雜志，2003，10（9）：1025-1026.

［2］ 戚向陽，陳維軍，張聲華.反相高效液相色譜法測定杜仲中京尼平苷、京尼平苷酸及綠原酸的含量.藥物分析雜志，2000，20（1）：22.

［3］ 李家實,閻玉凝.杜仲皮與葉化學成分初步研究.中藥通報,1986,11(8):41.

［4］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.化學工業(yè)出版社,2005:114-115.

［5］ 張康健,張?zhí)?中國神樹-杜仲.經濟管理出版社,1997.

［6］ 肖崇厚.中藥化學.上?？茖W技術出版社,1987：396.