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(長春中醫(yī)藥大學 藥學院,吉林 長春 130117)
關(guān)格片是由蒼術(shù)、砂仁、冬蟲夏草、黃連、石韋等9味中藥組成的復(fù)方制劑。具有降濁祛濕,溫補脾腎的功效。用于治療慢性腎功能衰竭,屬于濕濁型者。癥見肢體困重,食少納呆,惡心嘔吐,倦怠無力,腰酸膝軟,脘腹脹滿,口中黏膩,腰部冷痛,大便不實,舌苔厚膩,脈象沉細[1]。本品處方中主藥黃連,其有效成分鹽酸小檗堿含量的高效液相測定方法明確,且選定條件下精密度高、重現(xiàn)性好,所以選擇以黃連中的有效成分鹽酸小檗堿為含量測定指標是合理的。
日本島津-高效液相色譜儀,SPD-10Avp,浙大N 2000色譜數(shù)據(jù)工作站。鹽酸小檗堿化學對照品(由中國藥品生物制品檢定所提供,批號:110805-200306,規(guī)格:供含量測定)。所用試劑均為色譜純和分析純。
2.1 對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿對照品5 mg,置于50 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得。
2.2 供試品溶液的制備[2]取本品10片,除去包衣,研細,取約0.6 g,精密稱定,置125 mL磨口具塞錐形瓶中,精密加入甲醇-鹽酸(100∶1)溶液50 mL,稱定重量,超聲(功率150 W,頻率40 kHz)處理30 min,放冷,再稱定重量,用甲醇-鹽酸(100∶1)溶液補足減失的重量,搖勻,濾過。取續(xù)濾液,用0.45 μm微孔濾膜濾過,即得。
2.3 陰性對照品溶液的制備 取不含黃連的處方,按制備工藝制成缺黃連的陰性對照品,再按供試品溶液的制備方法制成陰性對照品溶液。
2.4 色譜條件[3]色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(150 mm×4.6 mm)的色譜柱;流動相:乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(27:73)為流動相檢測波長:346 nm;流速:0.8 mL/min;柱溫:25℃;理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計算應(yīng)不低于3 000。
2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液2,5,10,15,20 μL,分別注入液相色譜儀,以進樣量(μL)為橫坐標,峰面積積分值為縱坐標,并繪制標準曲線,Y=1 843 459.405 X=45 289.676 2,r=0.999 6,鹽酸小檗堿線性范圍為0.199 8~1.998 mg。
2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液鹽酸小檗堿10 μL,注入液相色譜儀,連續(xù)進樣5次,依法測定,結(jié)果RSD分別為0.70%,表明儀器的精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液,進樣10 μL,分別在0,1,4,8,12 h測定,結(jié)果所得5個數(shù)據(jù)的RSD為2.37%,表明鹽酸小檗堿在供試品溶液中12 h內(nèi)穩(wěn)定。
2.8 重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品共5份,按供試品溶液項下制備,依法獨立測定,結(jié)果RSD分別為1.17%,表明該方法重現(xiàn)性良好。
2.9 回收率試驗 取同一批樣品(鹽酸小檗堿6.664 28 mg/g),共5份,分別精密加入對照品鹽酸小檗堿適量,按供試品溶液的制備方法制成檢測溶液,并依法測定,結(jié)果平均回收率為97.62%,RSD為0.84%,表明方法準確性較好,方法可行。
2.10 樣品測定 取3批樣品,每批2份,測定樣品中鹽酸小檗堿含量,結(jié)果3批樣品中鹽酸小檗堿的含量(mg/g)分別為6.388 9,6.720 2,7.418 75。
根據(jù)鹽酸小檗堿的紫外吸收圖及空白實驗,選擇測定波長為346 nm。含量測定在選擇流動相的過程中,曾選擇乙腈-0.05 mol/mL(磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(30∶70)、乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(28∶72)為流動相,但分離度均不佳;在上述流動相基礎(chǔ)上,以乙腈-0.05 mol/mL磷酸二氫鈉溶液(磷酸試液調(diào)節(jié)pH值至3.0)(27:73)為流動相,結(jié)果供試品分離效果較好,鹽酸小檗堿峰與其它峰達到了良好的分離度(R>1.5)。
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京:化學工業(yè)出版社,2005:213-214.
[2]鄭虎占.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用[M].北京:學苑出版社,2003:3979-4043.
[3]宋立人.現(xiàn)代中藥學大辭典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1715-1723.