姚 靜 范 鋒 周慶新 毛愛民

摘要針對(duì)無錫市惠山區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)豬群發(fā)病的臨床癥狀、發(fā)病情況、病理變化,初步診斷為豬流感,并對(duì)其進(jìn)行了防治。在此基礎(chǔ)上,就其傳播途徑、診斷方法以及防治措施等展開討論。

關(guān)鍵詞豬流感;癥狀;病理變化;診斷;防治

中圖分類號(hào)S851.3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼B文章編號(hào) 1007-5739(2009)09-0256-01

豬流感(swine Influenza,SI)是由豬流感病毒(SIV)引起的一種豬的急性、高度接觸性呼吸道傳染病。SIV引起的臨床癥狀與人流感相似,病豬表現(xiàn)為高熱(40.5～41.7℃)、精神沉郁、食欲不振、呼吸困難、咳嗽等,典型的發(fā)病還可見打噴嚏、流鼻涕等癥狀,并迅速蔓延整個(gè)豬群。單純的豬流感病毒感染表現(xiàn)為發(fā)病率高(100%),死亡率低(約5%),其嚴(yán)重程度與流行毒株、豬只日齡和健康狀況、環(huán)境條件及細(xì)菌性繼發(fā)感染相關(guān)。如不及時(shí)確診、治療,經(jīng)常會(huì)伴有豬副嗜血桿菌、巴氏桿菌等細(xì)菌性繼發(fā)感染,使病情加重。豬流感病毒主要存在于病豬和帶毒豬的呼吸道分泌物中,經(jīng)排出后污染環(huán)境并交叉循環(huán)感染,蒼蠅、老鼠以及唾液、空氣流通等都能造成本病的傳播。本病常發(fā)生于晚秋、早春及寒冷的冬季,但在近年來,由于集約化的豬場(chǎng)增多,在火熱的夏季,氣候驟變、密度過大、通風(fēng)不良、陰雨連天等都會(huì)造成豬流行性感冒的暴發(fā)流行。如不及時(shí)治療,能使病情變復(fù)雜,繼發(fā)巴氏桿菌、嗜血桿菌、肺炎性鏈球菌等,使死亡率增高,如果不及時(shí)控制,由此引發(fā)的經(jīng)濟(jì)損失會(huì)更為慘重。

1發(fā)病情況

無錫市惠山區(qū)某規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng),存欄基礎(chǔ)母豬1 383頭,育肥豬2 447頭,育成豬和哺乳仔豬3 630頭。10月份天氣突變,氣溫驟降,連續(xù)陰雨,晝夜溫差加大。首先是育成豬發(fā)病,主要表現(xiàn)為體溫上升、食欲明顯下降或廢絕,呼吸道感染癥狀明顯,隨后哺乳仔豬、育肥豬相繼發(fā)病,死亡率以哺乳仔豬最高,其次是育成豬,而育肥豬和母豬沒有死亡,僅少數(shù)懷孕母豬發(fā)生流產(chǎn)、早產(chǎn)、弱仔和死胎。

2臨床癥狀

最初發(fā)病的是育肥豬,潛伏期很短,2d內(nèi)集中全群發(fā)病,測(cè)試體溫40.5～41.5℃,個(gè)別豬高達(dá)42℃以上,表現(xiàn)為食欲廢絕,精神萎靡,成群地臥地一角,不愿走動(dòng),流清鼻液或稠鼻液,有時(shí)鼻液帶有血色,眼分泌物增多,眼結(jié)膜潮紅,咳嗽,呼吸加快,個(gè)別病例轉(zhuǎn)為慢性病例,常因持續(xù)咳嗽、消化不良和進(jìn)行性消瘦而死亡。部分妊娠母豬表現(xiàn)為流產(chǎn)、早產(chǎn)、產(chǎn)死胎和產(chǎn)出弱仔數(shù)增多。大部分患病豬只的癥狀4～5d后消失,7～10d內(nèi)自然康復(fù),但哺乳仔豬出現(xiàn)約1%的死亡率。

3剖檢病理變化

未發(fā)病豬未見明顯病理變化,病死豬病理變化為:呼吸道可見鼻、咽、喉、氣管、支氣管黏膜充血、腫脹;表面覆蓋大量黃白色粘稠的液體。肺部心葉、尖葉、隔葉下緣變、變韌,氣腫與塌陷。心內(nèi)外膜出血,且稍有腫大。肝臟腫大,邊緣鈍圓,有充血現(xiàn)象;肝臟表面散狀分布針尖大小的白色結(jié)節(jié)。腎臟輕微腫大,顏色褐黃,質(zhì)地較軟,切面隆起,邊緣外翻;部分病例有點(diǎn)狀出血。脾臟淤血、腫大,局部有梗死灶。大腸有斑塊狀出血。胃大彎處充血嚴(yán)重。淋巴結(jié)腫大。

4診斷

4.1初步診斷

根據(jù)發(fā)病情況、臨床癥狀、病理變化以及天氣驟變時(shí)突然發(fā)病,迅速波及全群;病豬高熱、鼻液增多、咳嗽和呼吸困難等發(fā)病特點(diǎn),初步診斷為豬流感。

4.2RT-PCR診斷

4.2.1樣品采集。病死或撲殺豬,取肺、扁桃體和腦等組織備用;待檢活豬,用注射器取全血5mL,血凝后取血清備用;要求送檢病料新鮮,嚴(yán)禁反復(fù)凍融病料。

4.2.2引物設(shè)計(jì)。鑒別H1和H3亞型的2套引物序列為:HF1:5′-GGGACATGTTACCCAGGAGAT-3′,HR1:5′-G CATTGTATGTCCAAATATCCA-3′,HF3:5′-TATGCCT G GTTTTCGCTCAA-3′,HR3:5′-TTCGGGATTACAGTT T GTTG-3′。第1套引物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為1 006bp,為H1亞型特異性;第2套引物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為663bp,為H3亞型特異性。

4.2.3病毒RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄。0.5g組織病料或100μL血清和1mL Trizol加于1.5mL離心管,輕微振蕩數(shù)次,室溫放置5min;加200μL氯仿,振蕩混勻,4℃下12 000rpm離心10min,取上清加入500μL異丙醇,室溫放置10min后12 000 rpm,離心15min,棄上清,用DEPC水配置的700μL乙醇洗滌沉淀2次,棄去乙醇,沉淀置于37℃溫箱烘干。干燥后加3μL DEPC水。提取的病毒RNA作為RT-PCR模板用于反轉(zhuǎn)錄試驗(yàn)或置-20℃保存?zhèn)溆?。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)按常規(guī)方法進(jìn)行。

4.2.4PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系為25μL,取反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物2μL,分別加10×PCR buffer 2.5μL,稀釋為0.02mmoL/L的上下游引物各1μL、2.5mmoL/L的dNTP 2μL,Taq DNA聚合酶為2.5U,用滅菌超純水補(bǔ)足至25μL,混勻后按以下程序進(jìn)行反應(yīng),95℃預(yù)變性3min,然后94℃變性1min,54℃退火45s,72℃延伸45s,共進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。

4.2.5鑒別診斷。對(duì)豬圓環(huán)病毒2型、豬呼吸與繁殖綜合征(下轉(zhuǎn)第259頁)

(上接第256頁)

病毒、豬瘟純化病毒及空白對(duì)照進(jìn)行同樣步驟的RNA提取和RT-PCR擴(kuò)增,同時(shí)以H1、H3、H5和H9亞型豬流感病毒為陽性對(duì)照。

4.2.6結(jié)果判定。通過RT-PCR方法的擴(kuò)增結(jié)果可見,該病毒為H1亞型流感病毒,利用H3的特異性引物不能擴(kuò)增獲得HA,而通過H1特異的引物進(jìn)行擴(kuò)增,則可見1.7kb的陽性條帶,從而判定該豬場(chǎng)為H3亞型豬流感病毒感染。

5綜合防治

初步診斷為疑似豬流感,馬上封鎖隔離,嚴(yán)禁妊娠舍、保育舍等飼養(yǎng)員串棟,全場(chǎng)用滅毒王每天進(jìn)行1次帶豬消毒。發(fā)病無食欲豬上午用復(fù)方SD甲氧嘧啶(SMM)0.2mL/kg體重加柴胡肌注,下午用病毒靈2支肌注,連用3d,同時(shí)在飲水中添加小蘇打和電解多維質(zhì)至全群豬康復(fù)。大群用特效抗流感藥物飲劑1袋對(duì)水100 kg,供自由飲用,連用5～7d。

6討論

SIV在豬群中傳播主要通過呼吸道途徑。在急性發(fā)病期,病豬鼻腔分泌物含有大量病毒,豬只通過直接或間接接觸而感染傳播,其中人和禽類也能攜帶病毒進(jìn)行傳播。豬流感危害豬體健康,影響了育肥豬的上市時(shí)間,并增加了飼養(yǎng)成本,對(duì)養(yǎng)豬業(yè)造成的損失不容忽視。此外,豬流感病毒也是豬呼吸道疾病復(fù)合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)的一種重要原發(fā)性病原。豬呼吸性疾病復(fù)合征是近年來危害世界(包括我國(guó))豬群的嚴(yán)重疾病,其病原復(fù)雜,呈雙重或多重病原感染,包括病毒性病原(豬流感病毒、PRRSV、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型、偽狂犬病毒和豬呼吸道冠狀病毒),細(xì)菌性病原(巴氏桿菌、豬鏈球菌、豬副嗜血桿菌)和豬衣原體等。一種觀點(diǎn)認(rèn)為豬流感病毒不僅損傷呼吸系統(tǒng),還可能引起機(jī)體免疫抑制,增加了其他病原的感染幾率;反過來,一些細(xì)菌性病原(如葡萄鏈球菌)分泌的蛋白酶能夠促進(jìn)豬流感病毒HA蛋白的裂解,而HA蛋白的裂解對(duì)流感病毒的感染至關(guān)重要。因此,豬流感和其他病原混合感染并相互作用,就會(huì)使病程延長(zhǎng),死亡率增加,對(duì)豬體健康的危害也就更加嚴(yán)重。

SI的診斷可分為臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷。實(shí)驗(yàn)室診斷包括病毒分離、抗原和病毒核酸檢測(cè)、特異性抗體檢測(cè)等。國(guó)外報(bào)道認(rèn)為PCR診斷方法的陽性率與病毒分離的陽性率等同或者稍高。本試驗(yàn)中整個(gè)試驗(yàn)過程所需時(shí)間較短,在6h之內(nèi)即可完成從提取RNA、反轉(zhuǎn)錄、PCR擴(kuò)增到瓊脂糖凝膠電泳等全部試驗(yàn)過程,而傳統(tǒng)的病毒分離所需時(shí)間較長(zhǎng),一般需要4～12d,豬流感RT-PCR診斷方法的建立為快速診斷各亞型豬流感奠定了基礎(chǔ)。

豬流感的防治同樣遵循預(yù)防為主,防重于治的原則。執(zhí)行嚴(yán)格的生物安全措施,避免豬與雞、鴨、火雞混養(yǎng),這就最大限度地限制了禽流感病毒跨物種傳播給豬;做好豬舍的通風(fēng)、干燥、保暖和清潔工作;避免從外面引進(jìn)豬只,若需引進(jìn)要進(jìn)行隔離觀察;避免豬群移動(dòng)和混群;實(shí)行全進(jìn)全出制度,限制流感的傳播;減少豬群的應(yīng)激反應(yīng);對(duì)豬群進(jìn)行疫苗免疫接種;患病豬進(jìn)行抗病毒治療和抗生素治療,以減少或避免繼發(fā)感染。

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