李洪玉　戴詩文　壽　旦　章建民　俞忠明

提要：目的：測定葛粉中葛根素的含量。方法：用HPLC法測定，以MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，250nm為檢測波長。結(jié)果：葛根素呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.6%, RSD為1.76%。結(jié)論：該法簡單、快速、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：葛粉;葛根素;HPLC

Study 0fPueraria in Pueraria Powder by Reversed-phase High Performance Liquid Chromatography

LI Hong-yu,DAI Shi-wen, SHOU Dian ,ZHANG Jian-min,YU Zhong-ming

(Zhejiang Academy of Traditional Chinese Medicine, Hangzhou 310017,China)

Abstract:Object:Determination of Pueraria in Pueraria Powder Methods: Puerariawere determined by HPLC.The mobile phase was MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）.Detection wavelength was at 250nm.Results: Pueraria showed a good linear relationship.The average recovery was 98.6% and RSD was 1.76%.Conclusion:This method was simple,quick and accurate.

Key words: Pueraria Powder ; Pueraria ;HPLC

葛根為豆科植物野葛 Pueraria lobata (Willd.) Ohwi的干燥根,是常用中藥材,具有解肌退熱，生津，透疹，升陽止瀉功效，用于外感發(fā)熱頭痛、項背強痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，高血壓頸項強痛等[1]?，F(xiàn)代研究證實，葛根中的主要有效成分為葛根素等異黃酮類化合物，具有抗炎解熱、擴張冠狀動脈血管、增加冠狀動脈血流量的作用，同時也有降低血壓的作用。有關(guān)葛根中葛根素等異黃酮的含量測定研究已有不少報道[2-5]，但對葛粉中葛根素含量測定報道不多。本文對葛粉中葛根素的提取條件和測試條件等進行比較研究,并采用高效液相色譜法對葛粉樣品進行了定量分析, 結(jié)果令人滿意。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

島津LC－10Atvp高效液相色譜儀；SPD－10 Avp紫外檢測器；島津UV－265紫外分光光度儀，多功能榨汁機/攪拌機SG300－I（上?？乞E電器有限公司）。甲醇（色譜純），水（二次蒸餾），其余均為分析純。葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所）；鮮葛（浙江省永嘉縣潘坑鄉(xiāng)）。

1.2 色譜條件

用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；色譜柱C18 diamonsil5ul(150×4.6mm I.D)，MeOH－H2O－HAc（30：70：0.5）為流動相，紫外檢測波長250nm。

2 結(jié)果與討論

2.1 提取溶劑濃度的選擇

精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇、50%乙醇和80%乙醇10ml，超聲提取60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結(jié)果表明30%乙醇提取最好。

2.2 超聲提取時間的選擇

精密稱取同一樣品約0.1g,分別加30%乙醇10ml，超聲提取30分鐘、45分鐘、60分鐘，進樣5ul,比較峰面積，實驗結(jié)果表明超聲60分鐘為最佳提取條件。

2.3 流動相及流速的選擇

試驗時曾采用下述流動相進行測定：甲醇－水（25：75）、甲醇－水－醋酸（30：70：0.5）、甲醇－水（30：70）為流動相，結(jié)果采用甲醇－水－冰醋酸（30：70：0.5）為流動相，樣品分離好。而流速也以1.0ml/min為合適。

2.4 標(biāo)樣溶液的制備

稱取一定量葛根素對照品,用30%乙醇溶解配制成濃度為13ug/ml的葛根素標(biāo)準(zhǔn)液。

2.5 葛粉制備

取鮮葛用水洗凈切片,稱取20g放入攪拌機內(nèi)，攪拌三次，每次1分鐘，每次加水200ml， 150ml，100ml，合并漿汁放置二天，去掉上面的水，下面的粉漿用定量濾紙過濾，低溫干燥，放入干燥器中備用。

2.6 供試品溶液制備

精確稱取一定量葛粉于10mL容量瓶中,加30%乙醇10ml,超聲提取1h,濾紙過濾,濾液過0.45um濾膜作為供試品溶液。

2.7 線性關(guān)系考察

在上述色譜條件下，分別進標(biāo)樣溶液0.5、3、5、7、10μl，測得各峰面積。以葛根素為橫座標(biāo)（A），以峰面積（Y）為縱座標(biāo)，計算得回歸方程：Y=3.90×106x+728.14,相關(guān)系數(shù)r＝0.9999；結(jié)果紫外檢測葛根素在0.0065-0.13μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.8 精密度試驗

取上述標(biāo)樣溶液，連續(xù)進樣5次，測定，RSD為1.11%。

2.9 重復(fù)性試驗

取同一樣品重復(fù)測定5次，RSD為1.61%。

2.10 穩(wěn)定性試驗

取上述供試品溶液，0、2、5、7、10h進樣，RSD為2.1%，10小時內(nèi)進樣穩(wěn)定。

2.11 回收率試驗

取已知含量的樣品，分別加入葛根素標(biāo)樣，按上述方法測定5次，平均回收率為98.6%, RSD為1.76%。見表1。

2.12 樣品分析

精密吸取標(biāo)樣溶液5μl與供試品溶液5μl，注入液相色譜儀，測定，結(jié)果:葛粉中葛根素的含量為0.06%（n=3），見下圖。

3 討論

本文采用高效液相色譜法測定葛粉中葛根素的含量,方法簡單、快速、準(zhǔn)確，結(jié)果滿意，可用于葛粉中葛根素的含量測定。

[參考文獻]

[1] 中國藥典2005版一部.2005: 233-234.

[2]章育中，楊凡。高效液相色譜法測定葛根及其片劑中異黃酮的含量.藥物分析雜志，1984,4(2):67.

[3]張蕾, 潘揚，朱蓉貞，等。不同品種及產(chǎn)地的葛根中葛根素含量的比較。中國中藥雜志，1995,20(7):399.

[4]肖學(xué)鳳, 高嵐。HPLC 法測定不同產(chǎn)地葛根中葛根素的含量。中草藥，2001,32(3):220.

[5]遲霽菲,張國剛.高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地葛根中葛根素的含量.中南藥學(xué)2006,l14(14):307-308