李　杰　李登欣　馬起龍

【摘要】 目的 探討PCNA和Caspase-3在胃癌及癌前病變中的表達及其與Hp感染的關(guān)系。方法 應用快速尿素酶試驗與吉姆斯染色法將各種病變分為Hp感染陽性組和陰性組，應用免疫組化法對各種病變胃組織PCNA和Caspase-3的表達進行檢測。 結(jié)果 ①胃癌及癌前病變組PCNA表達及Hp感染率明顯高于慢性淺表性胃炎組( P<0．05)，而Caspase-3的表達顯著低于慢性淺表性胃炎組(P<0．05) ；②Hp感染陽性組PCNA及Caspase-3表達明顯高于Hp感染陰性組(P<0．05)。結(jié)論 Hp感染可能通過促進PCNA及Caspase-3基因蛋白的過度表達,從而使胃黏膜細胞增生與凋亡平衡失調(diào)誘發(fā)癌變。

【關(guān)鍵詞】胃癌；癌前病變；幽門螺桿菌(Hp)

胃癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多步驟的過程，涉及到細胞增值和凋亡平衡異常等多方面機制。進年研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌（Hpylori） 感染與胃癌的關(guān)系密切。本研究應用免疫組化方法檢測增殖相關(guān)基因蛋白PCNA及凋亡蛋白酶系統(tǒng)中關(guān)鍵酶Caspase-3在胃癌發(fā)生過程中的表達變化，探討其在胃黏膜癌變過程中所起的作用及Hp感染致癌的可能機制。

1 資料和方法

1．1 一般資料 選擇2008年6-10月來本院就診的患者110例，包括慢性淺表性胃炎組40例，癌前病變組（萎縮性胃炎、腸上皮化生及不典型增生病變）40例及胃癌組30例，其中Hp陽性者63例,Hp陰性者47例,所有患者均經(jīng)胃鏡檢查診斷并經(jīng)病理組織學檢查證實并未服用非幽體消炎藥、抗生素及抑酸藥。

1．2 方法

1．2．1 Hp感染檢測 采用快速尿素酶試驗及吉姆斯染色法,二者均陽性為Hp陽性，均陰性為Hp陰性，單一陰性退出試驗。

1．2．2 免疫組織化學 兔抗人PCNA及Caspase-3多克隆抗體、SP染色試劑盒、DAB顯色試劑盒等均購自北京中杉生物技術(shù)公司。試驗嚴格按照SP染色試劑盒操作步驟說明進行，以PBS代替一抗為陰性對照,以已知陽性切片為陽性對照。

1．3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 12．0軟件進行統(tǒng)計分析，相關(guān)因素的差異性比較采用χ²檢驗及確切概率法。

2 結(jié)果

2．1 PCNA檢測結(jié)果以細胞核內(nèi)出現(xiàn)明顯的棕褐色顆粒者為陽性標記，Caspase-3蛋白陽性表達定位于胃黏膜上皮及胃癌細胞質(zhì),胞核或胞質(zhì)顯示為淡黃至黃棕色者為陽性標志，在組織切片中不顯色為陰性。PCNA在淺表性胃炎-癌前病變-胃癌的病變過程中陽性率分別為45%、75%、83．3%，表達逐漸增加,在胃癌組表達最高（P<0．05）；Caspase-3在胃黏膜癌變過程中表達依次降低（P<0．05），胃癌組表達率為23．3%。

2．2 Hp在淺表性胃炎-癌前病變-胃癌組的感染率分別為30%、70%、76．67%，各組與慢性淺表性胃炎組比較HP陽性率差異有統(tǒng)計學意義(P<0．05)。

2．3 在同一病變組Hp感染陽性組PCNA、Caspase-3的表達高于Hp陰性組，在所有試驗對象中63例Hp陽性組各基因的表達與陰性組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0．05）。

3 討論

3．1 胃黏膜癌變過程中PCNA及Caspase-3的表達 PCNA是DNA聚合酶δ的輔助蛋白,是細胞增殖周期中DNA合成的必要蛋白，在G1期表達逐漸增加,S期達到高峰，G2/M期迅速降低,可作為S期的特異性標記，其含量多少可以反映細胞增殖程度^[2]。本研究顯示:PCNA表達從CSG到GC逐漸增加,提示GC演變過程中,胃黏膜細胞增殖程度逐漸增加,從而增加內(nèi)外源性DNA受損機會,增加胃癌發(fā)生的危險性。Caspase-3可看作是調(diào)控胃上皮細胞凋亡最重要的執(zhí)行者之一,它的激活能使許多細胞結(jié)構(gòu)、細胞周期及DNA修復等相關(guān)蛋白或激酶失活,在細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導啟動途徑中起著關(guān)鍵性作用。本研究發(fā)現(xiàn)隨著胃黏膜的癌變進展Caspase-3的表達下降，這與徐進等^[2]研究一致，表明Caspase-3介導的細胞凋亡參與了胃黏膜的癌變過程。

3．2 胃黏膜癌變過程中PCNA、Caspase-3的表達與Hp感染的相關(guān)性 鑒于Hp與GC關(guān)系的大量研究,國際癌癥研究會已把Hp列為GC的Ⅰ類致癌原。本研究顯示Hp感染率隨著癌變的進展而明顯升高,HP陽性組PCNA的表達高于HP陰性組，表明HP感染促進細胞增殖,使黏膜處于高增殖狀態(tài),從而增加細胞DNA的損傷，這可能是HP感染引起胃癌的機制之一^[1]。在同一病變中HP陽性組Caspase-3的表達高于HP陰性組,表明HP感染通過調(diào)控Caspase-3基因的表達而促進細胞凋亡。Hp感染引起胃黏膜細胞凋亡、增殖的機制仍不明確，可能與Hp產(chǎn)生的毒素、細胞因子、氧自由基等有關(guān),還與bak、fas、p53等基因表達增強有關(guān)^[4]。總之，Hp感染可能參與胃癌癌前病變乃至胃癌的發(fā)生,近來研究顯示Hp感染促進胃黏膜細胞凋亡、增殖作用主要發(fā)生在胃癌癌前病變早期階段。因此胃癌癌前病變早期階段抗Hp治療可能能預防胃癌的發(fā)生。

參 考 文 獻

［1］ Preston MS，Pike MC，Ross RK，et al.Increased cell division as a cause of human cancer.Cancer Res，1990，50 (23):7415.

［2］ 徐進,文繼航,鄭暉,等.Caspase-3蛋白在胃癌及非典型增殖中的表達及其細胞凋亡的關(guān)系.湖南醫(yī)科大學學報,2002，27(2):181-182.

［3］ 劉海峰,劉為紋,房殿春,等.幽門螺桿菌感染對胃粘膜上皮細胞增殖和凋亡的影響.中華消化內(nèi)鏡雜志，1998,15(2):91.