●邵政一　朱毅芳　陳　霞

(南通醫(yī)學院藥理教研室,江蘇226001)

摘要為探討細胞外間質(zhì)中某些膠原成分在穴位注藥信息傳遞中的作用。應用不同劑量膠原酶Ⅰ、Ⅳ及混合膠原酶于"內(nèi)關"穴上方5 mm心包經(jīng)上預處理,30 min后觀察"內(nèi)關"穴注射胰島素的初始降糖作用,并與心包經(jīng)旁預處理組、蒸餾水經(jīng)上預處理組相比較。結(jié)果:膠原酶Ⅳ心包經(jīng)上預處理幾乎完全阻斷"內(nèi)關"穴注射胰島素初始降糖作用,并且呈一定劑量相關性,大劑量混合膠原酶也能明顯阻斷該降糖作用,而心包經(jīng)旁同樣預處理沒有阻斷作用。

主題詞穴,內(nèi)關胰島素/投藥和劑量血糖膠原酶類

我們以往的實驗研究發(fā)現(xiàn),穴位注射后出現(xiàn)的快速、強大的藥效作用與血藥濃度、神經(jīng)系統(tǒng)的完整性無明顯相關性^[1-2]。穴位注藥后強大的初始藥效(吸收前或未達有效血藥濃度)出現(xiàn)的機理及藥物信息傳遞途徑的探索有助于闡明穴位注藥及經(jīng)絡的實質(zhì),本研究目的在于探索穴位注藥后藥物信息傳遞與細胞外間質(zhì)中某些成分的關系,以期為探索經(jīng)絡實質(zhì)作更深入的研究。

1材料與方法

1.1材料

ICR小鼠20±2 g,雌雄各半,由南通醫(yī)學院實驗動物中心提供(蘇動質(zhì)字97025號,蘇動環(huán)97062)。膠原酶Ⅰ、膠原酶Ⅳ(Sigma公司生產(chǎn))?；旌夏z原酶(膠原酶粗品,上海醫(yī)藥工業(yè)研究院生產(chǎn))。One Touch Ⅱ血糖測定儀(美國強生公司產(chǎn)品)。胰島素40 U/ml(南京生化制藥廠生產(chǎn),批號980403)

1.2方法

(1)*"膠原酶Ⅰ預處理對小鼠"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響:已禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只:①小劑量預處理組:"內(nèi)關"穴上方5 mm心包經(jīng)上注射膠原酶Ⅰ 0.05 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關"穴注射胰島素0.05 ml(2 U);②大劑量預處理組:"內(nèi)關"上方5 mm,心包經(jīng)上注射膠原酶Ⅰ 0.1 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關"穴注射胰島0.05 ml(2 U);③大劑量經(jīng)旁預處理組"內(nèi)關"穴上方5 mm,心包經(jīng)旁開2 mm處注射膠原酶Ⅰ 0.1 mg(0.02 ml),30 min后"內(nèi)關"穴注射胰島素0.05 ml(2 U);④對照組:"內(nèi)關"穴上方5 mm,心包經(jīng)上注射蒸餾水0.02 ml,30 min后"內(nèi)關"穴注射等量胰島素。上述各組均在預處理后即刻采各鼠眶后靜脈血,用One Touch Ⅱ血糖測定儀測血糖,并在給藥后5 min,15 min各測血糖,以觀察各組的血糖下降百分率。

(2)*"膠原酶Ⅳ預處理對小鼠"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響:取禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只,分組及處理方式同(1)。1,2,3組分別用膠原酶Ⅳ 0.05 mg、0.1 mg、0.1 mg預處理。

(3)*"膠原酶(混合型粗品)預處理對小鼠"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響:取已禁食18 h的ICR小鼠40只,隨機分為4組,每組10只,分組及處理方式同(1)。1,2,3組分別用膠原酶(混合型粗品)0.05 mg、0.1 mg、0.1 mg預處理。

2結(jié)果

2.1膠原酶Ⅰ預處理對小鼠"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表1

從表1可見,用大、小劑量膠原酶Ⅰ在"內(nèi)關"穴上方同一經(jīng)上預處理能明顯降低"內(nèi)關"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,降糖作用明顯低于對照組(P<0.01),但與穴位上方經(jīng)旁預處理組無明顯差異,而大劑量膠元酶Ⅰ在"內(nèi)關"穴上方經(jīng)旁預處理,并不影響"內(nèi)關"穴注射胰島素5 min后的降糖作用。上述各組在"內(nèi)關"穴注射胰島素15 min后的降糖作用無明顯差異。

2.2膠原酶Ⅳ預處理對"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表2。

由表2可知大、小劑量膠元酶Ⅳ"內(nèi)關"穴上方同經(jīng)上預處理能明顯阻斷"內(nèi)關"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,該作用明顯強于用膠原酶Ⅰ相同的預處理。小劑量膠原酶Ⅳ同經(jīng)上預處理對"內(nèi)關"給藥后15 min的降糖作用仍有一定的影響。大劑量膠原酶Ⅳ"內(nèi)關"穴上方經(jīng)旁預處理對"內(nèi)關"穴注射胰島素后的降糖作用與對照組無明顯差異。

2.3混合膠原酶(粗品)預處理對"內(nèi)關"穴注射胰島素降糖作用的影響結(jié)果見表3。

從表3可知大劑量混合膠原酶"內(nèi)關"穴上方同經(jīng)上預處理,可明顯降低"內(nèi)關"穴注射胰島素后5 min的降糖作用,而小劑量同經(jīng)上或大劑量經(jīng)旁預處理,對"內(nèi)關"穴注射胰島素5min后的降糖作用均無明顯影響,大、小劑量同經(jīng)上預處理組間,對"內(nèi)關"穴注射胰島素15 min后降糖作用的影響亦有明顯差異(P<0.05)。

3討論

我們以往的研究發(fā)現(xiàn)穴位注藥不僅存在著藥物的特異性^[3],而且還存在穴位的相對特異性^[2,4]。穴位注藥后出現(xiàn)的初始藥效不僅迅速而且強大,這與穴位區(qū)藥物吸收速率、血藥濃度、靶器官藥物濃度以及神經(jīng)系統(tǒng)的完整性無相關性^[1-2],一些藥物的特殊拮抗劑不能完全拮抗該藥穴位注藥的初始藥效(如納絡酮對嗎啡之鎮(zhèn)痛)。因而研究穴位注藥后到初始藥效出現(xiàn)的中間環(huán)節(jié)即穴位藥效的作用機理既可豐富藥理學的內(nèi)容,亦可能是闡明經(jīng)絡本質(zhì)的一個途徑。

本研究應用膠原酶(粗品)、膠原酶Ⅰ及膠原酶Ⅳ在心包經(jīng)上或心包經(jīng)旁預處理,然后觀察"內(nèi)關"穴位注射胰島素后初始降糖作用的變化,結(jié)果表明:(1)大劑量(0.1 mg/鼠)混合膠原酶"內(nèi)關"穴上方心包經(jīng)上預處理能明顯阻斷"內(nèi)關"穴注射胰島素后的初始降血糖作用,并對15 min的降糖作用也有影響,而同劑量"內(nèi)關"穴上方心包經(jīng)旁預處理無此作用。(2)大、小劑量膠原酶Ⅰ"內(nèi)關"穴上方心包經(jīng)上預處理,能明顯降減"內(nèi)關"穴注射胰島素后初始降糖作用,但該作用與心包經(jīng)旁預處理組無明顯差異,經(jīng)旁預處理與對照組間無明顯差異。(3)大、小劑量膠原酶Ⅳ"內(nèi)關"穴上方心包經(jīng)上預處理能完全阻斷"內(nèi)關"穴注射胰島素的初始降糖作用,與大劑量膠原酶Ⅳ心包經(jīng)旁預處理組及對照組差異均有極顯著意義(P<0.001)。(4)除小劑量膠原酶Ⅳ經(jīng)上預處理可影響給藥后15 min的降糖作用外,所有各預處理組對"內(nèi)關"穴注射胰島素后15 min的降糖作用均無明顯影響。研究結(jié)果提示了"內(nèi)關"穴注射胰島素后初始降糖作用與膠原Ⅳ有著密切關系,表明穴位給藥后在未被吸收或血濃度未達有效濃度前其藥物信息傳遞可能通過膠原Ⅳ介導的。至于膠原Ⅳ產(chǎn)生何種理化改變,是否會釋放某種遞質(zhì)有待進一步研究。

近十幾年來的研究表明,細胞外間質(zhì)(ECM)如膠原蛋白等絕不僅僅是細胞外的一種惰性填充物,這類大分子具有活躍的生物活性,它不僅參與了細胞的運動、增殖和分化等細胞行為,而且介導細胞與細胞、細胞與生物分子間的作用,從而在胚胎發(fā)育和各種生理及病理過程中發(fā)揮重要作用^[5]。膠原蛋白是ECM的主要組成成分,分布于幾乎一切組織中^[6]。根據(jù)膠原存在的部位和可能的作用,我們選擇Ⅰ、Ⅳ型膠原作為研究對象,從實驗結(jié)果來看,心包經(jīng)上穴位注藥后信息傳遞與Ⅳ型膠原(基膜膠原)有著密切關系,至于該膠原受刺激后通過何種信息傳遞進行細胞間或細胞內(nèi)外信息交換有待進一步研究,此外,不同經(jīng)脈線上的信息傳遞是否都與Ⅳ型膠原有關亦有待進一步研究。

對此進行更深入的研究,可以進一步了解穴位受刺激(如針、灸、藥物)后其信息傳遞的物質(zhì)基礎是什么,不同經(jīng)脈線上信息傳遞物質(zhì)構(gòu)成成分間是否存在著質(zhì)或量方面的差異,這既有利于了解穴位注藥--這一新的給藥途徑藥理作用機理的特點,為傳統(tǒng)藥理學增添新的內(nèi)容,又可為經(jīng)穴相對特異性、經(jīng)穴歸經(jīng)理論提供新的理論基礎。

4參考文獻

1邵政一,劉祖舜,丁斐,等."內(nèi)關"穴位注射胰島素對去臂叢神經(jīng)小鼠STZ蔡悄蠆⌒∈蟮慕堤親饔眉捌潿砸雀哐糖素拮抗作用的影響.現(xiàn)代應用藥學,1987;4(4):7.

2邵政一,凌祥,周愛玲,等.經(jīng)穴類半導體性的藥理學實驗研究.中國針灸,1998;18(2):121

3周愛玲.小鼠穴位注藥的藥物特異性初探.南通醫(yī)學院學報,1991,11(3):207

4周愛玲,邵政一,劉祖舜.小鼠穴位特異性本質(zhì)的繼續(xù)探討.針刺研究,1994:19(2):60

5劉秉慈.細胞外間質(zhì).生理科學進展,1996;27(3):221

6Van der Rest,M.and Garrone.R.Gollagen Family of Protein.FASEB.J.1991;5:2814

(收稿日期:19990326,齊淑蘭發(fā)稿)