摘要：綿羊和山羊均易感染羊口瘡，羊口瘡在羔羊中通常呈現(xiàn)群體性發(fā)病。感染該病主要特征為唇、外陰等部位皮膚及黏膜出現(xiàn)丘疹、潰瘍、膿皰，病程較長者形成疣狀結(jié)痂。2023年春季，在臨床發(fā)現(xiàn)一例山羊口唇、乳房皮膚膿皰、結(jié)痂，嚴重的融合成大面積的黑色凸起斑塊，經(jīng)過采集結(jié)痂病料進行實驗室檢測，確診為羊口瘡。

關(guān)鍵詞：山羊；羊口瘡；傳染；防治

1 羊口瘡病毒特性

羊口瘡病毒屬于痘病毒科副痘病毒屬，有囊膜。自然環(huán)境中該病毒非常穩(wěn)定，能夠在羊舍長期存在，干痂中病毒可以存活幾個月甚至幾年，冰箱中保存3年仍具有傳染性；散落于地面的病毒在寒冷冬季仍能存活，次年春天仍可感染宿主。

病毒不耐高溫，60 ℃ 30 min、65 ℃ 2 min均可將其殺死，羊口瘡病毒對含氯消毒劑和苯酚等敏感，紫外線處理可以滅活該病毒。

2 流行特點

羔羊較成年羊更加容易受到羊口瘡病毒感染且多群發(fā)，而成年羊多零星發(fā)病。本病多發(fā)生于春秋季節(jié)。病羊、帶毒羊為主要傳染源，受損的皮膚或黏膜為其主要感染途徑，發(fā)病的羔羊通過吸吮乳汁可以傳染給母羊。

3 臨床癥狀

2023年2月初到5月底，在正定縣南崗鎮(zhèn)發(fā)現(xiàn)一例山羊口瘡病例，共有20多只母羊和約30只羔羊發(fā)病，體溫40.2～40.7 ℃，精神沉郁，少食或不食，離群呆立。

羔羊首先在口腔、齒齦、上下眼瞼、鼻腔的皮膚上出現(xiàn)小米粒至黃豆粒大的水皰，繼而變成黑色結(jié)痂，發(fā)病嚴重的羊只口腔流涎、眼瞼粘連；嚴重的2只羔羊因無法進食和飲水而脫水死亡。母羊也是首先在口腔（圖1）、鼻部皮膚出現(xiàn)黃豆粒大水皰，發(fā)病嚴重的羊只口腔流涎；乳房皮膚上出現(xiàn)小紅點，繼而變成膿皰，再而融合成較大的黑色片狀結(jié)痂（圖2）。

經(jīng)詢問，發(fā)病羊場現(xiàn)存欄波爾山羊53只、奶山羊30只，奶山羊和波爾山羊混合圈養(yǎng)，自2018年至今一直自繁自養(yǎng)。冬春季節(jié)主要飼喂干樹葉、干花生秧、干紅薯秧、干胡蘿卜秧，搭配飼喂胡蘿卜、玉米、麩皮；夏秋季節(jié)主要飼喂新鮮青草、樹葉和玉米、麩皮；礦物質(zhì)和微量元素攝入以羊只舔食鹽磚方式提供。春秋兩季使用阿苯達唑、伊維菌素各驅(qū)蟲1次；每7天消毒1次，消毒藥品定期輪換；口蹄疫、山羊痘、小反芻獸疫、羊三聯(lián)四防滅活疫苗和布魯氏菌病、羊敗血性鏈球菌病菌苗均按照獸醫(yī)推薦免疫程序（見表1）正常接種，未接種羊口瘡疫苗。

4 實驗室診斷

4.1 材料與方法

1）試劑盒。96孔病毒DNA試劑盒購自長沙海揚生物科技有限公司。

2）引物設(shè)計。依據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫收錄的ORFV基因序列設(shè)計引物，具體見表2。

3）病毒核酸提取。根據(jù)病毒DNA試劑盒說明書操作。具體步驟如下：

①取100 mg病料，加入1 mL緩沖PBS，用玻璃勻漿器勻漿；14 000×g

離心3 min，轉(zhuǎn)移250 μL上清液至1.5 mL離心管中。

②加入20 μL蛋白酶、3 μL Carrier RNA和250 μL Buffer ACL，渦旋混勻15 s，55 ℃水浴10 min。

③加入250 μL無水乙醇，渦旋混勻15 s。

④把DNA柱裝入收集管，轉(zhuǎn)移混合液至柱子中，13 000×g離心1 min，倒棄流出液。

⑤倒棄流出液，把柱子裝回收集管中，加入500 μL用乙醇稀釋的Buffer GW1至柱子中，13 000×g離心1 min。

⑥倒棄濾液，把柱子重新裝回收集管中，加入600 μL用乙醇稀釋的Buffer GW2至柱子中，13 000×g離心1 min；重復(fù)操作1次。

⑦倒棄濾液，把柱子重新裝回收集管中，13 000×g離心空柱3 min以徹底去除柱子中殘留的乙醇。

⑧將柱子轉(zhuǎn)移至新的1.5 mL離心管中，加入50 μL預(yù)熱至56 ℃洗脫緩沖液至柱子的膜中央，靜置3 min，13 000×g離心1 min，將洗脫下的DNA -20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

4）PCR檢測。在25 μL體系里，按照比例加入DNA，2×TaqPCR Mix，引物（10 uM）和dd H2O；94 ℃預(yù)變性4 min；94 ℃變性1 min、36 ℃復(fù)性1 min、72 ℃延伸1.5 min，執(zhí)行30個循環(huán)；最后72 ℃延伸5 min。同時設(shè)立陰性對照。反應(yīng)完成后，取5 μL PCR擴增產(chǎn)物進行1%瓊脂糖凝膠電泳。

4.2 結(jié)果

按照上述條件進行ORFV擴增，經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測，擴增產(chǎn)物條帶大小為1 137 bp（圖3）?；厥誔CR產(chǎn)物，經(jīng)連接轉(zhuǎn)化后測序證實，擴增產(chǎn)物均為ORFV特異性核酸片段。

5 確診

根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀及實驗室PCR檢測確診為羊口瘡。

6 綜合防制措施

6.1 預(yù)防措施

1）勿從發(fā)病地區(qū)引進羊只或購進飼料，新引進的羊需要隔離觀察14～21 d，證明無病后才可以混進大群飼養(yǎng)。

2）因羊口瘡病毒具有嗜上皮特性，所以要盡量避免羊的皮膚、黏膜損傷：羊舍墻壁和飼養(yǎng)用器具光滑、無毛刺；飼料中不含鐵絲、芒刺等尖銳物質(zhì)，并加入礦物質(zhì)、微量元素以免羊異嗜咬傷；飼料中加入富含維生素A、維生素E、維生素C的復(fù)合維生素、黃芪多糖等提高免疫力，尤其是增強黏膜免疫力，以減少感染機會。

6.2 疫苗接種

頻繁發(fā)生感染的地區(qū)和羊場，使用羊口瘡活疫苗免疫接種，在健康羊的股內(nèi)側(cè)劃痕免疫，通常接種10 d后便可形成有效的免疫保護，保護期為3個月，要及時加強免疫。

6.3 消毒隔離

平時要做好養(yǎng)殖者與羊舍的消毒工作，減少病毒感染機會。

因羊口瘡為接觸傳播的傳染病，如果發(fā)現(xiàn)羊口瘡感染或者疑似感染，需要迅速做好隔離工作，高度接觸的畜主或者獸醫(yī)工作者不能繼續(xù)工作，以免傳染其他羊只；由于病毒抵抗力較強，對確診羊口瘡病例的圈舍、器具、車輛、排泄物要選擇高效消毒劑徹底消毒。

6.4 藥物治療

對發(fā)病的羊只要做到早發(fā)現(xiàn)、早隔離、早治療，有效降低大群暴發(fā)和死亡率。本病沒有特異性治療藥物，主要是采用對癥治療和防止繼發(fā)感染。3個月以內(nèi)羔羊可以靜脈注射治療；日齡較大的羊只可以采用青霉素、安痛定、復(fù)合維生素、黃芪多糖等藥物肌內(nèi)注射；口腔、眼瞼、乳房等破潰、結(jié)痂處涂抹聚維酮碘溶液。臨床實踐證明采用上述方案治療，大部分病羊10～15 d后治愈。

7 羊口瘡類癥鑒別

7.1 羊口炎

羊口炎不具有傳染性，所以一般為散發(fā)；羊口瘡具有傳染性，尤其是羔羊，多為群體發(fā)病。羊口炎發(fā)病后口腔黏膜僅會出現(xiàn)水皰、潰瘍，不結(jié)痂；羊口瘡結(jié)痂。

7.2 羊口蹄疫

口蹄疫在羊的蹄部有病變，而羊口瘡很少導(dǎo)致羊蹄部病變；在口蹄疫發(fā)病初期患病羊體溫就會升高，而單純的羊口瘡不會出現(xiàn)高燒癥狀。

7.3 羊痘

羊痘的痘疹結(jié)節(jié)突出、界限明顯，分布于全身各處；而羊口瘡的痘疹僅在嘴唇或外陰處。羊痘往往會伴隨有體溫升高，而單純的羊口瘡不會出現(xiàn)高燒癥狀。

8 總結(jié)與討論

8.1 重視皮膚和黏膜完整性在防制羊口瘡中的重要作用

皮膚和黏膜是動物機體抵抗疾病的第一道防線，能夠?qū)雇饨?5%以上的病原微生物的侵襲。皮膚廣泛覆蓋在身體表面，由多層鱗狀上皮細胞構(gòu)成，并通過間質(zhì)緊密連接在一起，完整的皮膚僅允許水分、氣體等小分子物質(zhì)進出，病毒、細菌等病原微生物通常不能夠通過完整的皮膚入侵體內(nèi)；黏膜是動物機體表面積最大的免疫組織，是機體與外界接觸最廣泛的部位，是大多數(shù)病原微生物入侵機體的門戶，95%以上傳染病的病原微生物都由黏膜入侵機體。皮膚和黏膜的完整性和免疫狀況是決定動物機體是否被病原微生物感染并入侵的重要因素——當黏膜完整、無損傷及免疫功能正常時，病原微生物就不容易入侵機體或入侵數(shù)量較少，反之則容易受到病原微生物大量入侵而發(fā)?。?/p>

防制羊口瘡，一方面要保護皮膚和黏膜、維護皮膚和黏膜的完整性；另一方面羊口瘡病毒會直接損害羊的皮膚和黏膜，在確診后注意修復(fù)受損傷的黏膜，減少繼發(fā)感染、并發(fā)感染，促進康復(fù)；還有通過增加黏膜免疫細胞數(shù)量和功能，促使其產(chǎn)生分泌型免疫球蛋白A（sIgA）等免疫活性物質(zhì)來提高黏膜的免疫力。

維生素A是維持皮膚和黏膜上皮細胞發(fā)育和完整性、促進皮膚和黏膜再生的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，具有保護皮膚和黏膜上皮細胞健全和完整、促進皮膚和黏膜的發(fā)育再生、促進結(jié)締組織中黏多糖的合成、維護細胞膜和細胞器膜結(jié)構(gòu)的完整、改變細胞膜和溶菌膜的穩(wěn)定性等功能，同時維生素A又能促進黏膜免疫細胞如巨噬細胞、T淋巴細胞、樹突狀細胞功能，促進sIgA等免疫活性物質(zhì)產(chǎn)生；當維生素A不足時黏多糖合成受阻，黏膜上皮干燥和過度角化，使黏膜易被病原微生物感染。維生素E可作為細胞內(nèi)生理性抗氧化劑，保護細胞膜的完整性。維生素C清除自由基，避免發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，保護細胞膜，維護黏膜的完整性。這就是在防制羊口瘡時加入大劑量復(fù)合維生素的道理所在。

8.2 重視防止繼發(fā)感染

由于黏膜遭受破壞，會增加經(jīng)黏膜感染疾病的發(fā)生機會，如本病中后期往往會繼發(fā)壞死桿菌等感染，所以在治療過程中使用青霉素等抗生素十分必要。

8.3 重視選擇高效消毒劑徹底消毒

由于病毒抵抗力較強，羊口瘡可在羊群中連年發(fā)病，所以一旦確診，應(yīng)對圈舍、器具、車輛、排泄物要選擇高效消毒劑徹底消毒。

8.4 做好個人防護

羊口瘡屬于人畜共患病，在接觸病羊或者疑似病羊時，飼養(yǎng)員、獸醫(yī)應(yīng)做好個人防護，如穿戴防護服、手套、口罩等，如果人皮膚破潰，避免接觸病羊。