摘要：通過對轄區(qū)內(nèi)生豬養(yǎng)殖、屠宰、無害化處理環(huán)節(jié)的病原學(xué)及血清學(xué)監(jiān)測，在獲得本市偽狂犬病病原學(xué)血清學(xué)陽性率的同時，對區(qū)域性風(fēng)險評估的采樣監(jiān)測策略進(jìn)行了顯著性差異及影響因素分析，認(rèn)為在本市偽狂犬病處于病原學(xué)低水平陽性率、有效控制的情況下，可靠的區(qū)域性采樣－監(jiān)測策略，應(yīng)為采取分組采樣，在種/母豬場采集血清樣品，屠宰場采集源自自繁自養(yǎng)場與肥育豬場的血清樣品，以gE抗體監(jiān)測結(jié)果評估流行狀況，以gB抗體監(jiān)測評估豬群暴露風(fēng)險，從而獲得全面可靠的流行狀況信息，用于評估偽狂犬病區(qū)域性流行風(fēng)險，指導(dǎo)凈化工作開展。

關(guān)鍵詞：區(qū)域性監(jiān)測；采樣策略；豬偽狂犬病；抗體檢測

偽狂犬病是一種可以侵害多種動物，對養(yǎng)豬業(yè)危害很大的病毒性疫病。目前由于廣泛使用gE基因缺失疫苗，其危害得到明顯控制；偽狂犬病凈化工作也在逐步展開，目前比較多見的是免疫凈化場創(chuàng)建；要實現(xiàn)免疫凈化到非免疫凈化，持久鞏固凈化成果，區(qū)域性凈化必不可少；區(qū)域性凈化有賴于持續(xù)的區(qū)域性監(jiān)測與風(fēng)險評估。

1 樣品

在無害化處理環(huán)節(jié)采集了源自全市203個豬場的病死豬組織樣品488份，其中部分豬場在三年內(nèi)存在多次隨機(jī)采樣。

屠宰環(huán)節(jié)采集了源自全市91個豬場的組織樣品620份，血清樣品606份；其中35個豬場的育成豬采集淋巴結(jié)的同時采集血清樣品338份。

生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)采集來自37家大型養(yǎng)豬企業(yè)368份母豬血清樣品，其中30家還采集了110份病死豬淋巴結(jié)。

2 方法

1）檢測方法：病原學(xué)樣品采用ASF-PRRS-CSF-PRV-gB四通道熒光PCR試劑盒檢測PRV-gB核酸，血清學(xué)樣品采用阻斷ELISA法檢測PRV-gE抗體。

2）統(tǒng)計學(xué)方法：檢測結(jié)果用無限群抽樣公式通過excel表格進(jìn)行推算，查標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布Z值表，以獲得置信水平。

采用顯著性差異計算，檢驗每兩個總體之間的差異。其中豬場群陽性率計算中的陰性場與陽性場作為二分類變量，適用卡方檢驗，個體陽性率采用t檢驗。由于生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)樣品只能來自少數(shù)大型養(yǎng)豬企業(yè)，不屬于完全隨機(jī)抽樣，無法代表全市養(yǎng)豬業(yè)整體，因此不做置信水平與顯著性差異檢驗。

3 監(jiān)測與檢驗結(jié)果

3.1 檢測結(jié)果與置信水平檢驗見表1。

3.2 不同時期以相同采樣策略監(jiān)測結(jié)果顯著性差異的縱向?qū)Ρ龋é?0.05）2020年11月—2021年3月對比2022年3—12月的無害化處理環(huán)節(jié)病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果，發(fā)現(xiàn)個體陽性率之間t=0.0316＜1.98.豬場群陽性率之間卡方值 x2=2.4633＜3.84，說明這兩個時間段之間個體陽性率沒有顯著差異，豬場群陽性率有顯著差異。

2022年3—12月對比2023年3—12月無害化處理環(huán)節(jié)病原學(xué)監(jiān)測結(jié)果，個體陽性率之間t =0.2646＜1.98，豬場群陽性率之間卡方值x2=0.038＜3.84，說明這兩個時間段的個體與豬場群陽性率均無顯著差異。

4 分析

4.1 技術(shù)因素

1）免疫情況與致死率因素：根據(jù)調(diào)查，衡陽市范圍的豬場以往受偽狂犬病疫情的沖擊，一直實行普免。其中部分曾經(jīng)發(fā)病的豬場仍然采用初生仔豬滴鼻+保育豬注射的免疫措施；其余豬場在斷奶后5周與9周各注射免疫1次。在衡陽市無害化處理環(huán)節(jié)檢出的病死豬PRV核酸個體陽性率三年來一直處于低水平且個體陽性率無顯著差異，說明通過普免，偽狂犬病在本市范圍死亡率低、穩(wěn)定控制狀態(tài)。生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)監(jiān)測的種豬gE抗體個體陽性率17.13%，豬場群陽性率在24.32%，但同批次種豬gB抗體個體/場群陽性率均在90%以上，說明偽狂犬病陽性豬更有可能以健康帶病毒的狀態(tài)存活，并未進(jìn)入無害化處理環(huán)節(jié)，造成無害化處理環(huán)節(jié)核酸陽性率顯著低于屠宰環(huán)節(jié)核酸陽性率，無害化處理環(huán)節(jié)的病死豬病原學(xué)監(jiān)測無法充分反映豬群實際感染分布狀況。

2）檢測技術(shù)因素：養(yǎng)豬行業(yè)一般采用PRV-gE基因缺失疫苗，因此一般認(rèn)為采集血清檢測PRV-gE抗體是確定感染狀況最簡單可靠的方法。采集的血清樣品還可用于監(jiān)測PRV-gB抗體，以評估豬群免疫狀況與暴露風(fēng)險。2023年11月屠宰環(huán)節(jié)采樣監(jiān)測出現(xiàn)的一個問題，即同時采集淋巴結(jié)與血清的育成豬中，PRV-gE抗體全部陰性的同時，同批次屠宰豬淋巴結(jié)中有8.27%為PRV核酸陽性。分析其侵入的時間、地點及其性質(zhì)，有兩種可能：一是在屠宰場侵入，待宰豬屠場停留時間一般在12～24 h。根據(jù)文獻(xiàn)，偽狂犬病的最短潛伏期為36 h，人工接種偽狂犬病病毒可在侵入后第7天產(chǎn)生低水平的抗體，在此感染病毒（野毒）后病毒抵達(dá)淋巴結(jié)而被檢出，同時又不產(chǎn)生感染抗體的可能性不能完全排除；二是病毒在豬場已經(jīng)侵入體內(nèi)，考慮到疫苗株作為偽狂犬病弱毒，仍然具有其固有的可以終身攜帶的特點，在衡陽市豬群偽狂犬病普免，同批次育成豬完全沒有檢出gE抗體，沒有采用可以鑒別野毒株的試劑盒的情況下，疫苗株殘留被檢出陽性的可能性更大。

4.2 抽樣因素

采樣基點監(jiān)測覆蓋的對象：

1）生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)：在區(qū)域性偽狂犬病監(jiān)測中，存在為數(shù)眾多的中小型豬場因采血技術(shù)欠缺而不能納入?yún)^(qū)域性監(jiān)測范圍，因此，目前生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的采樣基點只能代表種母豬場等大型養(yǎng)豬企業(yè)的流行狀況。

2）屠宰環(huán)節(jié)：覆蓋的采樣監(jiān)測對象包括自繁自養(yǎng)場與肥育豬場的出欄育成豬，基本沒有涵蓋母豬場的淘汰母豬。

3）無害化處理環(huán)節(jié)可以完全覆蓋包括種/母豬場、自繁自養(yǎng)場與肥育豬場在內(nèi)的所有類型豬場。但只能做病原學(xué)監(jiān)測，考慮本市偽狂犬病目前處于通過普免有效控制狀態(tài)，死亡率低，攜帶病毒的生豬容易以臨床健康狀態(tài)進(jìn)入屠宰環(huán)節(jié)，而非進(jìn)入無害化處理環(huán)節(jié)。

4.3 結(jié)論

1）偽狂犬病風(fēng)險評估的采樣策略選擇

由以上監(jiān)測結(jié)果與分析可見，作為偽狂犬病區(qū)域性風(fēng)險評估的監(jiān)測，需要把屠宰環(huán)節(jié)監(jiān)測涵蓋的自繁自養(yǎng)場與肥育豬場，以及生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)種/母豬場血清學(xué)監(jiān)測整合，才能完整反映區(qū)域內(nèi)PRV流行狀況。對于屠宰環(huán)節(jié)的采樣－監(jiān)測策略選擇，從檢測方法特異性，以及與生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)的種/母豬群血清學(xué)監(jiān)測方法上保持一致性、結(jié)果具有可比性的角度，屠宰環(huán)節(jié)宜采用血清學(xué)方法監(jiān)測gE抗體。同時可監(jiān)測gB抗體，掌握與評估肥育豬為代表的自繁自養(yǎng)場與肥育豬場豬群暴露風(fēng)險。

2）本市偽狂犬病防控效果與風(fēng)險評估

根據(jù)從無害化處理環(huán)節(jié)的幾年結(jié)果，都呈現(xiàn)病原學(xué)低水平陽性，三年個體陽性率無顯著性差異；雖然2022年5月生豬養(yǎng)殖環(huán)節(jié)監(jiān)測的大型豬場母豬群存在少數(shù)gE抗體陽性，個體gE抗體陽性率17.13%（63/368），豬場群陽性率25%（5/20），但同場gB抗體水平均保持在90%以上合格率，屠宰環(huán)節(jié)連續(xù)監(jiān)測育成豬gE抗體全部陰性，可以認(rèn)為衡陽市范圍內(nèi)防控措施對野毒的水平傳播與垂直傳播阻斷可靠，gB抗體代表的豬群暴露風(fēng)險低，連續(xù)三年偽狂犬病在衡陽市的流行處于低水平流行、穩(wěn)定控制狀態(tài)。

根據(jù)衡陽市信旺農(nóng)牧公司偽狂犬病凈化場成功創(chuàng)建經(jīng)驗，從引種階段，就必須以偽狂犬病清凈場作為種源，全群同源調(diào)入。如果種源場暫無偽狂犬病凈化場資質(zhì)，必須經(jīng)過嚴(yán)格采樣程序與第三方檢測，確認(rèn)陰性后方可引入。引種后遵循免疫程序，定期進(jìn)行g(shù)E與gB抗體檢測，強(qiáng)化全場生物安全措施，是維持免疫無疫狀態(tài)的保證。通過區(qū)域性監(jiān)測評估，確認(rèn)風(fēng)險程度達(dá)到可接受標(biāo)準(zhǔn)后，再由點到面，有序轉(zhuǎn)入非免疫無疫狀態(tài)。經(jīng)過幾個母豬生產(chǎn)－淘汰周期，在養(yǎng)豬集團(tuán)化趨勢日益明顯的情況下，從種豬場源頭開始，中長期全面有序全面凈化偽狂犬病是可能的。

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