摘要：D型流感病毒（IDV）是一種近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的正粘病毒科D型流感病毒屬成員，可引起牛、豬、豚鼠等多種動(dòng)物的呼吸道疾病，具有潛在的人獸共患性?；贖EF基因遺傳多樣性，IDV可分為5個(gè)不同的譜系，分別是D/OK、D/660、D/Yama2016、D/Yama2019和 D/CA2019譜系。不同于甲型、乙型流感病毒，IDV的潛在N-糖基化位點(diǎn)主要集中分布在HEF基因上。為系統(tǒng)了解不同譜系毒株HEF蛋白的N-糖基化位點(diǎn)和B細(xì)胞表位，從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)獲得151條全長(zhǎng)HEF基因序列，通過(guò)使用MEGA-X生物信息學(xué)軟件構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)，并用在線工具進(jìn)行各毒株N-糖基化位點(diǎn)和線性B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)分析。結(jié)果表明IDV的HEF蛋白具有6～8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，其中有2個(gè)N-糖基化位點(diǎn)（N146和N613）在不同譜系間相同，有6個(gè)N-糖基化位點(diǎn)（N28、N54、N249、N346、N390和N513）在不同譜系間存在差異。B細(xì)胞表位在不同譜系間有3個(gè)保守的表位和8～9個(gè)各譜系獨(dú)特的表位。線性B細(xì)胞表位的預(yù)測(cè)將有助于設(shè)計(jì)激活體液反應(yīng)的多表位疫苗，預(yù)測(cè)結(jié)果還需要體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)來(lái)證明該應(yīng)用的可行性。

關(guān)鍵詞：D型流感病毒；譜系；HEF蛋白；N-糖基化位點(diǎn)；B細(xì)胞表位；預(yù)測(cè)

正粘病毒科（Orthomyxoviridae）有四種類型的流感病毒（influenza viruses），分別命名為A、B、C和D型流感病毒（IAV、IBV、ICV和IDV）。已知IAV、IBV和ICV會(huì)導(dǎo)致人類呼吸道疾病[1-2]。IDV是一種新發(fā)現(xiàn)的正粘病毒科成員，最初于2011年在美國(guó)俄克拉何馬州的一頭患有嚴(yán)重呼吸道癥狀的病豬中分離出來(lái)[3]。目前已在美洲、歐洲、非洲、亞洲的多個(gè)國(guó)家和地區(qū)豬群、野豬群、牛群等檢測(cè)到該新型病毒[4-12]。IDV比IDC具有更加寬泛的宿主范圍，已在多種動(dòng)物物種中檢測(cè)到，除了牛、豬和野豬外，還包括山羊、綿羊、馬、駱駝等[13-17]，在小鼠、豚鼠和雪貂中也建立了動(dòng)物模型。IDV感染會(huì)導(dǎo)致牛的輕度呼吸道疾病，并與牛呼吸道綜合征相關(guān)[18]，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)產(chǎn)生重大經(jīng)濟(jì)影響。

IDV的病毒基因組與ICV的基因組有約50%的相似性，與IAV和IBV相比，IDV的基因組由7條單鏈負(fù)義RNA片段組成，編碼9種蛋白質(zhì)，分別是血凝素-酯酶-融合蛋白（HEF蛋白）、聚合酶PB2、PB1和P3、核蛋白、基質(zhì)蛋白M1和CM2以及非結(jié)構(gòu)蛋白NS1和NEP[3]。研究表明IDV的HEF蛋白具有與ICV HEF蛋白相似的受體結(jié)合、受體降解（乙酰酯酶）和膜融合等生物學(xué)功能，HEF由HEF1和HEF2兩個(gè)亞基組成，分為受體結(jié)合區(qū)（receptor binding domain，R）、酯酶活性區(qū)（esterase domain，E）以及融合活性區(qū)（fusion domain，F(xiàn)）[19]。

HEF是IDV中最易變異的基因組節(jié)段，HEF蛋白具有很好的免疫原性，主要用于該病毒的遺傳演變分析。根據(jù)HEF的序列差異，IDV可分為5個(gè)不同的遺傳演化譜系，即D/OK、D/660、D/Yama2016、D/Yama2019和D/CA2019。在歐洲和美洲，主要流行D/OK和D/660 譜系；在日本，主要流行D/Yama2016和D/Yama2019譜系[20]。此外，D/ CA2019 譜系只在美國(guó)的加利福尼亞州報(bào)道[21]。HEF蛋白是IDV的唯一糖基化蛋白，其糖基化位點(diǎn)的變化可能影響病毒的復(fù)制力、致病性和穩(wěn)定性等。因此，通過(guò)生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)分析比較IDV不同譜系HEF蛋白理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、潛在N-糖基化位點(diǎn)和B細(xì)胞抗原表位，對(duì)于研究IDV復(fù)制、致病性、抗病毒藥物以及多表位疫苗研制等具有重要的意義。

1 材料和方法

1.1 毒株信息

從GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，共獲得151條全長(zhǎng)的HEF基因序列（截止至2023年3月30日），具體見(jiàn)表1。通過(guò)使用MEGA-X軟件采用最大似然性法（maximum likelihood）進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，選擇Tamura-Nei為最適替換模型，設(shè)置自展值（bootstrap replicates）為1000，構(gòu)建遺傳進(jìn)化樹(shù)。

1.2 HEF蛋白理化性質(zhì)與蛋白結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

對(duì)不同譜系D型流感病毒HEF蛋白通過(guò)在線軟件網(wǎng)站ProParam（https：//www.expasy.org/protparam），利用Expasy工具分析其基本物理和化學(xué)性質(zhì)。蛋白跨膜預(yù)測(cè)使用TMHMM Server v.2.0 （https：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/）工具；蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)，采用SignalP4. 1 Server （http：//www.cbs.dtu dk/services/SignalP/）在線工具。

1.3 HEF蛋白N-糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)

用N-糖基化位點(diǎn)在線預(yù)測(cè)軟件（https：//services.healthtech. dtu.dk/services/NetNGlyc-1.0/）對(duì)不同譜系D型流感病毒HEF蛋白進(jìn)行預(yù)測(cè)，陽(yáng)性閾值定為0.5以上。

1.4 HEF蛋白線性B細(xì)胞表位預(yù)測(cè)與驗(yàn)證

利用在線工具軟件ABCpred（https：//webs. iiitd.edu.in/raghava/abcpred/ABC_submission.html）和 Bepipred（http//tools.iedb. org/bcell/）預(yù)測(cè)B細(xì)胞表位。ABCpred軟件預(yù)測(cè)氨基酸長(zhǎng)度設(shè)置為18，閾值設(shè)置為0.80；Bepipred軟件預(yù)測(cè)設(shè)置閾值為0.35，肽段長(zhǎng)度為5～30 個(gè)氨基酸。綜合分析上述兩種在線工具軟件預(yù)測(cè)結(jié)果篩選候選線性B細(xì)胞表位。

2 結(jié)果

2.1 基于HEF基因的D型流感病毒譜系劃分

GenBank中可檢索到151株完整的HEF基因序列，其中12株來(lái)源于感染豬的IDV，139株來(lái)源于感染牛的IDV?；谘仵ッ溉诤希℉EF）蛋白的核苷酸序列運(yùn)用生物軟件MEGA-X分析，IDV可分為5個(gè)不同的譜系（圖1），即D/OK、D/660、D/Yama2016、D/Yama2019和D/CA2019。D/OK譜系包含的毒株最多，151株HEF基因序列中有69.54%（105/151）的毒株屬于該譜系，其次是D/660譜系為23.18%（35/151），D/OK譜系和D/660譜系流行于美洲、歐洲和亞洲地區(qū)。D/Yama2016譜系和D/CA2016譜系的毒株最少，均有3株序列，占比僅1.99%，分別流行于日本和美國(guó)地區(qū)，其他地區(qū)未見(jiàn)分離報(bào)道。D/Yama2019譜系里的5株流行株分別來(lái)自日本、中國(guó)和土耳其地區(qū)。11株國(guó)內(nèi)流行株分別屬于D/OK譜系和D/Yama2019譜系，其中9株屬于D/OK譜系，并與其他國(guó)家分離的毒株在遺傳進(jìn)化樹(shù)上彼此分離，形成獨(dú)立的小分支。豬源的12株IDV HEF基因序列，除1株（D/swine/Kentucky/17TOSU1262/2017）屬于D/660譜系外，其余11株均屬于D/OK 譜系，由圖1可見(jiàn)豬源和牛源毒株聚集在一起，沒(méi)有形成獨(dú)立的分支，表明IDV在豬和牛之間可能可以相互傳播。

IDV的5個(gè)譜系 （D/OK、D/660、D/CA2019、D/Yama2016和D/Yama2019）分別用藍(lán)色、紫色、黃色、綠色和橙色標(biāo)記，各譜系的代表株和中國(guó)分離株分別用紅色和亮藍(lán)色標(biāo)記。

2.2 HEF蛋白理化性質(zhì)與結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

根據(jù)ProParam分析可知，IDV各譜系HEF蛋白均由644個(gè)氨基酸組成，該蛋白相對(duì)分子質(zhì)量在71575.2～71761.02之間，pI值在5.39～6.22之間，不穩(wěn)定性指數(shù)在36.42～37.56之間（>40判定為不穩(wěn)定蛋白），平均親水系數(shù)在-0.075～-0.138之間，歸為穩(wěn)定性親水蛋白。由 TMHMM 軟件和SignaIP軟件分析顯示，IDV 各譜系HEF蛋白信號(hào)肽區(qū)為1～16位氨基酸，D/OK譜系胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)序列分別位于第17～636，637～660 和 661～664 位氨基酸（圖 2），其他譜系跨膜區(qū)分別為17～644或17～640位氨基酸。

2.3 不同譜系D型流感病毒的N-糖基化位點(diǎn)預(yù)測(cè)分析

經(jīng)N-糖基化位點(diǎn)在線軟件預(yù)測(cè)（糖基化可靠性閾值大于0.5），結(jié)果如表2所示。IDV HEF蛋白有8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，分別位于N28，N54、N146，N249，N346，N390、N513和N613位點(diǎn)，各譜系分別具有其中的6～8個(gè)潛在N-糖基化位點(diǎn)。IDV各譜系毒株HEF蛋白中有2個(gè)最保守的潛在N-糖基化位點(diǎn)分別為N146和N613；其次是N28和N54位點(diǎn)均只有1株糖基化可靠性閾值小于0.5，N28位點(diǎn)只有D/Yama2019譜系的D/bovine/CHN/JLSL/2021糖基化可靠性閾值小于0.5，N54位點(diǎn)只有D/OK譜系的D/bovine/Mississippi/C00148N/2014在該位點(diǎn)天冬酰胺（N）突變?yōu)樘於彼幔―）而不具有潛在的N-糖基化位點(diǎn)；D/Yama2019和D/ CA2019 譜系所有毒株具有N249位的潛在N-糖基化，D/Yama2019譜系毒株和D/660譜系的D/bovine/France/2986/2012因在該位點(diǎn)的天冬酰胺（N）突變?yōu)榻z氨酸（S）而缺失了N-糖基化位點(diǎn)，D/OK譜系中有4株N-糖基化可靠性閾值小于0.5；D/Yama2019、D/Yama2016和D/ CA2019譜系的N346位比較保守，其N-糖基化可靠性閾值均大于0.5，D/660譜系中有1株T348突變?yōu)镮348而不具有該位點(diǎn)的N-糖基化，D/OK譜系中有2株N346突變?yōu)镠346而不具有該位點(diǎn)的N-糖基化；N390位只有D/Yama2019譜系N-糖基化可靠性閾值均大于0.5；N513位和N346位有D/Yama2019、D/Yama2016和D/ CA2019譜系N-糖基化可靠性閾值大于0.5，D/660和D/OK譜系各有1株第513位天冬酰胺（N）突變?yōu)樘於彼幔―）以及D/OK譜系中有3株N513位臨近位點(diǎn)有突變而不具備該位點(diǎn)的N-糖基化。

糖基化主要有N-X-T和N-X-S兩種形式，在IDV各譜系中8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)中有6個(gè)位點(diǎn)（N54、N146，N249，N346，N390和N513）是N-X-T形式，N28位點(diǎn)只有D/Yama2016譜系是N-X-T形式，其他4個(gè)譜系均為N-X-S形式，只有N613位點(diǎn)在各譜系中均為N-X-S形式。IDV各譜系潛在的N-糖基化位點(diǎn)數(shù)量也不相同，D/Yama2016譜系最少為6個(gè)，D/OK譜系中除了6株來(lái)源于中國(guó)的毒株具有7個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)外都是6個(gè)，D/ CA2019和D/660譜系（其中1株D/bovine/France/2986/2012為5個(gè)）具有7個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)，D/Yama2019譜系除1株D/bovine/CHN/JLSL/2021外其他都有8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)。

2.4 HEF蛋白B 細(xì)胞抗原表位預(yù)測(cè)

ABCpred和BepiPred在線工具軟件對(duì)HEF蛋白氨基酸序列進(jìn)行分析，得到的B細(xì)胞表位序列及分值，D/OK譜系代表株（JQ922308）分別用ABCpred和BepiPred軟件分析預(yù)測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3和表4，其中表中加粗部分有12個(gè)表位為ABCpred和BepiPred預(yù)測(cè)的重疊表位可認(rèn)為是 D/OK譜系HEF蛋白的B細(xì)胞抗原表位，每個(gè)潛在的表位都高于2個(gè)軟件包設(shè)置的閾值，具有合適的長(zhǎng)度和較高的抗原性。用同樣的方法獲得了其他4個(gè)譜系HEF蛋白的B細(xì)胞抗原表位（表5）。256FGCGD260、278NRVAA291和404YTKGETPFVK DYLSPP415這3個(gè)保守的B細(xì)胞抗原表位為IDV 的5個(gè)不同譜系共有；42YSMKTEPMTGF TNVTK57和302PGTYSI- KS309為 D/OK、D/Yama2019、D/Yama2016和D/CA2019這4個(gè)譜系共有，479GYFWGRSNGGGGGA492為D/660、D/Yama2019、D/Yama2016和D/CA2019這4個(gè)譜系共有。

3 討論

IDV最早發(fā)現(xiàn)于有流感樣病征的美國(guó)豬群，進(jìn)一步的研究表明IDV在牛群中比在豬群中更普遍，這種病毒可能利用牛作為主要宿主，并與牛的呼吸道綜合征密切相關(guān)[18]。在我國(guó)，IDV最早于2014年在山東的養(yǎng)牛場(chǎng)被發(fā)現(xiàn)[22]，隨后研究人員在南方一些省份（廣東、江蘇、安徽和福建）的牛群或豬群中檢測(cè)到該病毒[23-24]，這些毒株均屬于D/OK譜系。2021年10月—2022年2月從中國(guó)廣州市各地屠宰場(chǎng)采集的250份健康牛鼻拭子樣本中鑒定出一株（D/bovine/CHN/JY3001/2021）屬于D/Yama2019譜系的毒株，結(jié)果表明國(guó)內(nèi)牛群中存在D/OK譜系和D/Yama2019譜系IDV毒株[25]。

IAV熱穩(wěn)定性和耐酸能力對(duì)其跨種傳播能力具有重要作用。Yu等[26]通過(guò)反向遺傳學(xué)研究表明HEF蛋白對(duì)IDV的熱穩(wěn)定性和耐酸能力起到關(guān)鍵作用，發(fā)現(xiàn)IDV較IAV、IBV和ICV具有較強(qiáng)的熱穩(wěn)定性和酸穩(wěn)定性，因此推測(cè)IDV具有較廣泛的組織嗜性和宿主感染性。本研究對(duì)5個(gè)不同譜系的IDV HEF糖蛋白經(jīng)N-糖基化位點(diǎn)相關(guān)軟件預(yù)測(cè)，最早發(fā)現(xiàn)的IDV毒株D/Swine/Oklahoma/1334/2011屬于D/OK譜系，其HEF蛋白含有6個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)（N28，N54，N146，N346，N513，N613），日本流行的D/Yama2016譜系毒株一樣只有6個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)；隨著新的IDV譜系的發(fā)現(xiàn)，其潛在的N-糖基化位點(diǎn)也增多，D/660、D/ CA2019 和D/Yama2019譜系增加到7個(gè)，潛在的N390位N-糖基化位點(diǎn)為D/Yama2019譜系內(nèi)毒株所特有，D/Yama2019譜系部分毒株甚至具有8個(gè)潛在的N-糖基化位點(diǎn)。潛在的N-糖基化位點(diǎn)增加可能進(jìn)一步增強(qiáng)IDV毒株的熱穩(wěn)定性和耐酸能力，引起其免疫原性、組織嗜性、致病性以及宿主范圍等發(fā)生變化。

抗原表位預(yù)測(cè)在疫病疫苗設(shè)計(jì)和基礎(chǔ)科學(xué)研究中具有重大意義，在疫苗研究中使用生物信息學(xué)分析蛋白結(jié)構(gòu)和預(yù)測(cè)表位成為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的首選方案，獲得的預(yù)測(cè)結(jié)果比常規(guī)試驗(yàn)更加準(zhǔn)確和高效?；谌斯ど窠?jīng)網(wǎng)絡(luò)的B細(xì)胞表位數(shù)預(yù)測(cè)的ABCpred和B細(xì)胞表面積預(yù)測(cè)IEDB[27]具有較高的抗原表位預(yù)測(cè)精度而成為最常用的2個(gè)預(yù)測(cè)工具。Wang等[28]采用ABCpred、IEDB和LBtope預(yù)測(cè)了24株ADV HE蛋白的B細(xì)胞抗原表位獲得了5個(gè)保守的抗原表位。本研究預(yù)測(cè)的HEF蛋白B 細(xì)胞抗原表位均位于胞外區(qū)，在5個(gè)不同譜系中預(yù)測(cè)各獲得11～12個(gè)抗原表位，其中有3個(gè)抗原表位是5個(gè)譜系的保守抗原表位，還有3個(gè)抗原表位是其中4個(gè)譜系的保守抗原表位。預(yù)測(cè)的抗原表位為選擇合適肽段設(shè)計(jì)和制備多表位疫苗提供了理論依據(jù)，但仍需試驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證其免疫原性和免疫保護(hù)效果。

IDV在世界范圍內(nèi)的家畜（如牛和豬）中傳播，擴(kuò)散到包括豬在內(nèi)的其他哺乳動(dòng)物宿主。研究顯示，人血清中也有D型流感病毒的特異性抗體，尤其是牛場(chǎng)工作人員血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率非常高，這表明IDV存在感染人的風(fēng)險(xiǎn)[29]。因此，需要對(duì)IDV流行病學(xué)進(jìn)行持續(xù)調(diào)查，尤其是人群中IDV流行情況，同時(shí)對(duì)其診斷方法、遺傳進(jìn)化規(guī)律、致病機(jī)制以及疫苗研發(fā)等相關(guān)問(wèn)題進(jìn)一步研究?！?/p>

參考文獻(xiàn)：

[1] SEDERDAHL B K， WILLIAMS J V. Epidemiology and clinical characteristics of influenza C virus[J]. Viruses， 2020， 12 （1）： 89.

[2] TAUBENBERGER J K， MORENS D M. The pathology of influenza virus infections[J]. Annual Review of Pathology， 2008， 3： 499-522.

[3] HAUSE B M， DUCATEZ M， COLLIN E A， et al. Isolation of a novel swine influenza virus from Oklahoma in 2011 which is distantly related to human influenza C viruses[J]. PLoS Pathogens， 2013， 9（2）：e1003176.

[4] SNOECK C J， OLIVA J， PAULY M， et al. Influenza D virus circulation in cattle and swine， Luxembourg， 2012-2016[J]. Emerging Infectious Diseases， 2018， 24 （7）： 1388-1389.

[5] FLYNN O， GALLAGHER C， MOONEY J， et al. Influenza D virus in cattle， Ireland[J]. Emerging Infectious Diseases， 2018， 24 （2）： 389-391.

[6] FERGUSON L， LUO K， OLIVIER A K， et al. Influenza D virus infection in feral swine populations， United States[J]. Emerging Infectious Diseases， 2018， 24 （6）： 1020-1028.

[7] SILVEIRA S， FALKENBERG S M， KAPLAN B S， et al. Serosurvey for influenza D virus exposure in cattle， United States， 2014-2015[J]. Emerging Infectious Diseases， 2019， 25 （11）： 2074-2080.

[8] TROMBETTA C M， MARCHI S， MANINI I， et al. Influenza D virus： Serological evidence in the Italian population from 2005 to 2017[J]. Viruses， 2019， 12 （1）： 30.

[9] MITRA N， CERNICCHIARO N， TORRES S， et al. Metagenomic characterization of the virome associated with bovine respiratory disease in feedlot cattle identified novel viruses and suggests an etiologic role for influenza D virus. Journal Of General Virology， 2016， 97 （8）： 1771-1784.

[10] ZHANG M， HILL JE， FERNANDO C， et al. Respiratory viruses identified in western Canadian beef cattle by metagenomic sequencing and their association with bovine respiratory disease[J]. Transboundary and Emerging Diseases， 2019， 66 （3）： 1379-1386.

[11] ZHANG M， HILL J E， GODSON D L， et al. The pulmonary virome， bacteriological and histopathological findings in bovine respiratory disease from western Canada[J]. Transboundary and Emerging Diseases， 2020， 18182943274770d961f6a039a80bd97949b8c60d1ce9a53a2a7e2baf75a73cc067 （2）： 924-934.

[12] YILMAZ A， UMAR S， TURAN N， et al. First report of influenza D virus infection in Turkish cattle with respiratory disease[J]. Research In Veterinary Science， 2020， 130： 98-102.

[13] SREENIVASAN C， THOM0afa7b02d63f7df716e4567f217aa392e3459e2337b6d14bf5c317798ad0e69eAS M， SHENG Z， et al. Replication and transmission of the novel bovine influenza D virus in a guinea pig model[J]. Journal of Virology， 2015， 89 （23）：11990-2001.

[14] FERGUSON L， OLIVIER A K， GENOVA S， et al. Pathogenesis of influenza D virus in cattle[J]. Journal of Virology， 2016， 90 （12）： 5636-5642.

[15] SALEM E， H?GGLUND S， CASSARD H， et al. Pathogenesis， host innate immune response， and aerosol transmission of influenza D virus in cattle[J]. Journal of Virology， 2019， 93 （7）： e01853-18.

[16] WAN Y， KANG G， SREENIVASAN C， et al. A DNA vaccine expressing consensus hemagglutinin-esterase fusion protein protected guinea pigs from infection by two lineages of influenza D virus[J]. Journal of Virology， 2018， 92 （11）： e00110-18.

[17] OLIVA J， METTIER J， SEDANO L， et al. Murine model for the study of influenza D virus[J]. Journal of Virology， 2020， 94 （4）： e01662-19.

[18] HAUSE B M， COLLIN E A， LIU R， et al. Characterization of a novel influenza virus in cattle and Swine： proposal for a new genus in the Orthomyxoviridae family[J]. Microbiology， 2014， 5 （2）： e00031-00014.

[19] SONG H， QI J， KHEDRI Z， et al. An open receptor-binding cavity of hemagglutinin-esterase- fusion glycoprotein from newly identified influenza D virus： Basis for its broad cell tropism[J]. PLoS Pathogens， 2016， 12 （1）： e1005411.

[20] MURAKAMI S， SATO R， ISHIDA H， et al. Influenza D virus of new phylogenetic lineage， Japan[J]. Emerging Infectious Diseases， 2020， 26 （1）： 168-171.

[21] HUANG C， YU J， HAUSE B M， et al. Emergence of new phylogenetic lineage of influenza D virus with broad antigenicity in California， United States[J]. Emerging Microbes & Infections， 2021， 10 （1）： 739-742.

[22] JIANG W M， WANG S C， PENG C， et al. Identification of a potential novel type of influenza virus in Bovine in China[J]. Virus Genes， 2014， 49： 493-496.

[23] ZHAI S L， ZHANG H， CHEN S N， et al. Influenza D virus in animal species in Guangdong province， southern China[J]. Emerging Infectious Diseases， 2017， 23 （8）： 1392-1396

[24] HE W T， LU M， XING G， et al. Emergence and adaptive evolution of influenza D virus[J]. Microbial Pathogenesis， 2021， 160 （9）： 105193.

[25] YU J， LI T， WEN Z， et al. Identification of D/Yama2019 Lineage-Like Influenza D virus in Chinese cattle[J]. Frontiers In Veterinary Science， 2022， 9 （7）： 939456.

[26] YU J， HIKA B， LIU R， et al. The hemagglutinin-esterase fusion glycoprotein is a primary determinant of the exceptional thermal and acid stability of influenza D virus[J]. mSphere， 2017， 2 （4）： e00254-17.

[27] PONOMARENKOJ V， BOUREN P E. Antibody-protein interactions： benchmark datasets and prediction tools evaluation[J]. BMC structural biology， 2007， 7 （1）： 64.

[28] WANG X， SUN Q， YE Z， et al. Computational approach for predicting the conserved B-cell epitopes of hemagglutinin H7 subtype influenza virus[J]. Experimental and Therapeutic Medicine， 2016， 12 （4）： 2439-2446.

[29] WHITE S K， MA W， MCDANIEL C J， et al. Serologic evidence of exposure to influenza D virus among persons with occupational contact with cattle[J]. Journal Of Clinical Virology， 2016， 81： 31-33.