【摘要】近些年，牛肝中地塞米松的抽檢不合格現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生，因而檢測牛肝中地塞米松的殘留具有重要意義。目前，檢測牛肝中地塞米松殘留最常用的方法是高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。本文綜合評(píng)述了包括薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-質(zhì)譜法以及高效液相色譜法在內(nèi)的多種地塞米松檢測技術(shù)，并特別對(duì)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行了深入分析，以期為后續(xù)研究提供參考和借鑒。

【關(guān)鍵詞】地塞米松；殘留檢測；牛肝

【DOI編碼】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.008

Review of Research on Detection Technology of Dexamethasone Residue in Bovine Liver

FU Chuling， GUO Siqi， LAN Yumeng， GUO Guoxian， SUN Weiwei， GU Meng， CAO Mengna

（Liaoning Inspection， Examination&Certification〔Liaoning Institute forAgro-product Veterinary Drugs and Feed Control〕， Liaoning Key Laboratory of Livestock Product Safety， Shenyang 110036， China）

Abstract： In recent years， the phenomenon of unqualified dexamethasone residues in bovine liver has occurred from time to time， so it is important to detect dexamethasone residues in bovine liver. Currently， the most commonly used method for detecting dexamethasone residues in bovine liver is high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry. This article comprehensively reviews various dexamethasone detection techniques， including thin-layer chromatography， enzyme-linked immunosorbent assay， gas chromatography-mass spectrometry， and high-performance liquid chromatography， with a particular in-depth analysis of highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry， in order to provide a reference and reference for further research.

Keywords： dexamethasone； residue detection； bovine liver

1地塞米松概述

1.1地塞米松的理化性質(zhì)

地塞米松（Dexamethasone，DXM）是一種人工合成的糖皮質(zhì)類激素藥物。它的化學(xué)結(jié)構(gòu)是在潑尼松龍的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改良：在B環(huán)的第9位引入氟原子，在D環(huán)的第16位引入甲基。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)上的改變顯著增強(qiáng)了地塞米松的抗炎活性。特別是第16位的甲基顯著降低了水鈉潴留副作用。

1.2地塞米松的作用及危害

地塞米松在獸醫(yī)臨床上被廣泛應(yīng)用于治療畜禽的感染性疾病，然而，有些養(yǎng)殖企業(yè)經(jīng)常濫用地塞米松，甚至非法將其添加至飼料中。另外，地塞米松會(huì)殘留在動(dòng)物的肝臟中。如果人長期食用含有地塞米松的牛肝，不僅會(huì)影響機(jī)體的激素平衡，引發(fā)代謝紊亂、骨質(zhì)疏松、肥胖等病癥，還有致癌風(fēng)險(xiǎn)[1]。地塞米松殘留超標(biāo)的牛肝會(huì)對(duì)人體健康以及環(huán)境安全產(chǎn)生極大危害。

1.3地塞米松殘留限量規(guī)定

為了規(guī)范地塞米松的使用，GB 31650—2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最大殘留限量》和《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》（中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)）都明確規(guī)定了地塞米松在牛肝中的最大殘留限量為2.0μg/kg。

2檢測方法

目前，檢測地塞米松的方法有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、高效液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法等。

2.1薄層色譜法

薄層色譜法是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，形成一均勻薄層，經(jīng)過點(diǎn)樣、展開后，與適宜的對(duì)照物按同法所得的色譜圖作對(duì)比，以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定。K.E.Vanoosthuyze[2]等建立了糖皮質(zhì)激素（包含地塞米松）的高效薄層色譜法。薄層色譜法僅使用薄層板，不需要大型儀器，因而檢測成本較低，能夠快速分離和定性分析地塞米松，但此方法的靈敏度較低且前處理復(fù)雜，需要衍生化。

2.2酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法是利用目標(biāo)物抗體和抗原結(jié)合的特異性，通過酶標(biāo)儀測定吸光度，根據(jù)吸光度的值得出地塞米松的含量。SN/T 4141—2015《畜及畜產(chǎn)品中糖皮質(zhì)激素殘留量檢測方法酶聯(lián)免疫法》規(guī)定，牛肝中地塞米松的測定限為0.20μg/ kg，回收率范圍為53.0%～89.2%。Kolanovic[3]等建立了酶聯(lián)免疫吸附法測定牛奶中殘留的地塞米松，檢測限為0.2 mg/kg，回收率范圍為68%～131%。該方法的優(yōu)點(diǎn)：靈敏度更高，不需要大型儀器，不需要專業(yè)的操作人員，操作者經(jīng)過簡單的培訓(xùn)即可進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作，大部分樣品的前處理方法簡單、步驟少，所需試劑耗材量簡單，檢測成本低，檢測速度快。

2.3氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

氣相色譜技術(shù)以氣體為流動(dòng)相，通過與地塞米松標(biāo)準(zhǔn)品比對(duì)待測組分的保留時(shí)間及峰面積，實(shí)現(xiàn)定性定量分析。在實(shí)際測定地塞米松時(shí)，基質(zhì)干擾可能導(dǎo)致雜質(zhì)峰的出現(xiàn)，這些雜質(zhì)峰若出現(xiàn)在地塞米松的保留時(shí)間范圍內(nèi)，可能被誤認(rèn)為是待測組分。引入氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)后，可以在氣相色譜儀的分離富集基礎(chǔ)上，通過串聯(lián)質(zhì)譜儀對(duì)待測組分的特征離子裂解片段進(jìn)行精確的定性定量分析。這種方法顯著提高了地塞米松的測定靈敏度和檢出限，有效克服了因雜質(zhì)峰與待測組分保留時(shí)間重疊而引起的分析誤判。因此，許多研究人員開始廣泛使用這一技術(shù)對(duì)地塞米松殘留進(jìn)行分析。Hidalgo O H[4]等采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)尿液中地塞米松進(jìn)行檢測，檢測限可以達(dá)到0.2 ng/mL，且實(shí)現(xiàn)了地塞米松和倍他米松的分離。與薄層色譜法相比，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的靈敏度、特異性高，但同樣需要衍生，過程煩瑣。

2.4高效液相色譜法

高效液相色譜以液體為流動(dòng)相，通過保留時(shí)間來確定待測組分。待測物質(zhì)在適合的流動(dòng)相下通過色譜柱進(jìn)行分離，分離后的物質(zhì)進(jìn)入檢測器進(jìn)行檢測。在《豬可食性組織中地塞米松殘留檢測方法高效液相色譜法》（農(nóng)業(yè)部958號(hào)公告—6—2007）中，豬肝的檢測限為1μg/kg。高效液相色譜法樣品前處理一般不需要衍生化，比氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法簡單。但地塞米松和倍他米松分子結(jié)構(gòu)相似，使用高效液相色譜法很難完全分離兩者。與氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法相比，高效液相色譜法檢測結(jié)果準(zhǔn)確、前處理方法簡單。但高效液相色譜法同樣需要使用大型儀器和固定的實(shí)驗(yàn)場所，這導(dǎo)致該方法在便捷性方面有所欠缺，因而在基層檢測工作中難以廣泛推廣。

2.5高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法將色譜的分離能力與質(zhì)譜的定性能力相結(jié)合，具有更好的選擇性和靈敏性，是目前檢測地塞米松最常用的方法。

2.5.1色譜柱的討論

高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定地塞米松選用的色譜柱有BEH C18柱（1.7μm）、C18柱（5μm）、Atlantis d C18柱（3μm）等。色譜柱固定相粒徑越小，其表面積越大，所以小粒徑的固定相有助于提高色譜柱的分離效率。研究表明，地塞米松在色譜檢測中顯示出更優(yōu)的分離效果和較高的目標(biāo)峰響應(yīng)。此外，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的柱壓最高可達(dá)15，000 psi（約103 MPa），較高的柱壓可以縮短地塞米松與色譜柱和流動(dòng)相平衡的時(shí)間，進(jìn)而縮短洗脫時(shí)間，提升檢測效率。

2.5.2流動(dòng)相的討論

Olivia Van den hauwe[5]等用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法方法測定牛肝中的倍他米松和地塞米松時(shí)，流動(dòng)相為乙腈和0.3%甲酸水，回收率為56%～69%，最低檢測限為0.2×10-9。參照文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)可知，使用負(fù)離子模式的電噴霧離子源時(shí)，甲酸水的濃度通常維持在0.1%～0.3%。這是因?yàn)槟繕?biāo)物能與甲酸形成共軛離子[M+HCOO]-，需要一定濃度的甲酸以促進(jìn)目標(biāo)物的有效離子化，所以不能使用純水。需要注意的是，甲酸的濃度會(huì)直接影響儀器的響應(yīng)值。研究發(fā)現(xiàn)，綜合比較0.1%甲酸水、0.2%甲酸水、0.3%甲酸水，當(dāng)甲酸含量為0.1%時(shí)，地塞米松響應(yīng)值最高。另外，使用甲酸含量為0.1%的甲酸乙腈溶液時(shí)，響應(yīng)值也有所提升。由于倍他米松和地塞米松互為差向異構(gòu)體，通過高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分離倍他米松和地塞米松時(shí)，倍他米松和地塞米松的母離子和碎片離子的定量離子對(duì)、定性離子對(duì)完全相同。因此，無法通過不同的定量離子對(duì)和定性離子對(duì)分離倍他米松和地塞米松，需要通過液相部分對(duì)地塞米松和倍他米松進(jìn)行分離。通常，流動(dòng)相流量越大，出峰效率越高，但同時(shí)柱壓會(huì)升高，離子化效率也會(huì)隨之降低。研究發(fā)現(xiàn)，綜合考慮柱壓、出峰效率和離子化效率，流動(dòng)相的流量為0.3 mL/min時(shí)最為適宜。

2.5.3固相萃取小柱的討論

固相萃取對(duì)于樣品的凈化和濃縮起到了關(guān)鍵的作用。固相萃取小柱的選擇會(huì)影響樣品的回收率和儀器的使用壽命。使用了不正確的固相萃取小柱，樣品濃縮效果差，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果固相萃取小柱凈化效果差，那么上機(jī)的樣品雜質(zhì)含量高，會(huì)影響儀器的使用壽命。不同的固相萃取小柱按類別不同填充了不同的填料，當(dāng)樣品以液體形式流過時(shí)，填料對(duì)樣品中的目標(biāo)化合物進(jìn)行吸附，過濾掉樣品的本體干擾以及其余化合物干擾，再用適合的洗脫液進(jìn)行洗脫，最終達(dá)到分離、凈化、濃縮的效果。

傳統(tǒng)的液液萃取方法雖然實(shí)驗(yàn)材料簡單，但回收率偏低、實(shí)驗(yàn)步驟復(fù)雜、背景干擾大、凈化效果差，且樣品容易產(chǎn)生假陽性。固相萃取法很好地克服了上述缺點(diǎn)，不僅可用于復(fù)雜樣品中微量或痕量目標(biāo)化合物的提取，也可用于凈化、濃縮或富集。因此，將液液萃取方法與固相萃取法相結(jié)合，也是目前獸藥殘留分析中樣品前處理的主流方法。二者結(jié)合不但可以讓樣品得到很好的凈化和濃縮，提高方法靈敏度，還能延長儀器和色譜柱的壽命。由于高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的色譜柱粒徑小，為了防止色譜柱的污染和堵塞，對(duì)通過色譜柱的樣品溶液有較高的要求。多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)推薦使用不同規(guī)格的Silica固相萃取柱進(jìn)行樣品凈化。研究表明，在處理含有較多雜質(zhì)的復(fù)雜樣品時(shí)，較大規(guī)格的Silica柱能更有效地除去這些雜質(zhì)，從而保護(hù)色譜柱并提高分析的可靠性。

與其余色譜法相比，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法的準(zhǔn)確度和靈敏度更高，而且對(duì)樣品的前處理過程進(jìn)行了簡化，但高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法所需設(shè)備的成本較高，不適用于常規(guī)實(shí)驗(yàn)室分析，同樣也較難實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的現(xiàn)場檢測。

3結(jié)束語

在地塞米松殘留檢測方法中，薄層色譜法、酶聯(lián)免疫法都不需要大型儀器，且人員培訓(xùn)較為簡單，適合初期大規(guī)模檢測使用，但薄層色譜法前處理時(shí)需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理，較為復(fù)雜，因而應(yīng)用較少。氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法靈敏度雖高，但同樣需要對(duì)樣品進(jìn)行衍生化處理。同時(shí)，儀器運(yùn)行時(shí)間較長，因而應(yīng)用同樣較少。高效液相色譜法前處理過程得到了簡化，具有較高的靈敏度和較快的運(yùn)行時(shí)間，但受基質(zhì)干擾較大，對(duì)于同分異構(gòu)體的地塞米松和倍他米松分離較為困難。高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法前處理過程較高效液相色譜法得到了進(jìn)一步簡化，靈敏度也是最高的，適合痕量檢測，同時(shí)也能很好地分離地塞米松和倍他米松。但其檢測難度高，需要專業(yè)的檢測人員，且液質(zhì)儀器昂貴，維護(hù)和維修成本很高，通常應(yīng)用于中心實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

為了解決在不同場景和不同需求下對(duì)地塞米松檢測的問題，我們還需開發(fā)更多的檢測方法。隨著科技的日新月異，地塞米松殘留的檢測技術(shù)也在不斷發(fā)展和優(yōu)化。相信不久的將來，地塞米松殘留檢測會(huì)更加簡單、快捷并且準(zhǔn)確，進(jìn)而為消費(fèi)者食用放心牛肝提供可靠保障。

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【作者簡介】

傅楚凌，女，1996年出生，學(xué)士，研究方向?yàn)楂F藥殘留檢測。

（編輯：李鈺雙）