摘要：為篩選灰葡萄孢（Botrytis cinerea）高效生防菌株，對(duì)解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）菌株P(guān)B-1從抑菌譜、發(fā)酵液的抑菌作用、抗生素合成基因PCR檢測(cè)、揮發(fā)性物質(zhì)（VOC）的抑菌作用、離體葉片防效幾個(gè)方面進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明，PB-1的抑菌譜較廣，對(duì)8種供試植物病原菌菌絲生長(zhǎng)均有抑制作用，其中對(duì)灰葡萄孢（B. cinerea）、新月彎孢霉（Curvularia lunata）、大斑凸臍蠕孢（Exserohilum turcicum）、禾谷鐮孢（Fusarium graminearum） 4種病原真菌具有較強(qiáng)的抑制作用，抑菌率分別為63.5%、70.7%、63.4%、56.0%。PB-1發(fā)酵液不僅對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)具較強(qiáng)抑制作用（20%濃度發(fā)酵液抑菌率達(dá)96.6%，受抑制菌絲腫脹扭曲、原生質(zhì)外滲、分枝異常），而且對(duì)分生孢子萌發(fā)也具有強(qiáng)烈抑制作用?？股睾铣苫騊CR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PB-1擴(kuò)增出srfAB、ituA基因片段，這說(shuō)明PB-1能夠產(chǎn)生表面活性素（surfactin）、伊枯草菌素（iturins）脂肽類(lèi)抗生素。PB-1揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)也具有明顯抑制作用。此外，小白菜品種上海青離體葉片防病效果檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，PB-1能明顯抑制灰葡萄孢的侵染。本研究結(jié)果表明，PB-1有作為植物灰霉病生物防治菌劑的潛力。

關(guān)鍵詞：解淀粉芽孢桿菌；灰葡萄孢；抑菌機(jī)制；抑菌率；菌絲生長(zhǎng)；孢子萌發(fā)；離體葉片防效

中圖分類(lèi)號(hào)：S476；S182 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2024）16-0149-06

灰葡萄孢（Botrytis cinerea）是葡萄孢屬（Botrytis）中最具破壞力的病原菌，引起番茄、草莓、玫瑰等多種農(nóng)業(yè)、園藝植物的灰霉病，在世界范圍內(nèi)每年造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)100億～1 000億美元［1］。由于灰葡萄孢寄主的廣泛性，侵染及繁殖方式的多樣性等原因，導(dǎo)致灰霉病非常難于防治［2］。目前，化學(xué)防治仍然是灰霉病的有效防治途徑，但是殺菌劑的過(guò)度使用引發(fā)殺菌劑抗藥性［3-4］、環(huán)境污染、人類(lèi)健康和食品安全［5］等諸多問(wèn)題。因此，生產(chǎn)上亟需開(kāi)發(fā)環(huán)境友好型、低毒低殘留、高防效的生防菌劑來(lái)用于灰霉病的防治。

解淀粉芽孢桿菌（Bacillus amyloliquefaciens）是一種重要的生防細(xì)菌，具廣譜抑菌活性［6］，對(duì)植物病害生物防治具有重要意義［7］。解淀粉芽孢桿菌生防機(jī)制主要包括產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物，如表面活性素（surfactin）、伊枯草菌素（iturins）、豐原素（fengycin）等脂肽類(lèi)抗生素，以及幾丁質(zhì)酶、蛋白酶、纖維素酶等抗菌蛋白［8］；誘導(dǎo)植物抗病性［9］；以及產(chǎn)生揮發(fā)性抑菌物質(zhì)（volatile organic compounds，VOC） ［10］。盧彩鴿等報(bào)道解淀粉芽孢桿菌菌株MH71能夠產(chǎn)生嗜鐵素、蛋白酶等物質(zhì)，菌株發(fā)酵液對(duì)番茄離體葉片、果實(shí)灰霉病具有較好的防治效果［11］。Ma等研究發(fā)現(xiàn)，分離自海洋沉積物的解淀粉芽孢桿菌SH-B74發(fā)酵液產(chǎn)生環(huán)狀脂肽plipastatin A1，對(duì)灰葡萄孢分生孢子萌發(fā)具有較好的抑制作用［12］。明確生防新菌株的作用機(jī)制，對(duì)微生物殺菌劑領(lǐng)域具有積極的意義。目前，對(duì)于灰霉病的防治，大部分生防菌劑的研究是在條件可控的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的，大田實(shí)際應(yīng)用效果并不太理想［13］。菌株P(guān)B-1為筆者所在實(shí)驗(yàn)室分離得到的一株具較好抑菌效果的解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）。在此基礎(chǔ)上，本研究進(jìn)一步對(duì)PB-1的抑菌譜、抑菌機(jī)理及離體葉片生防效果進(jìn)行研究，即利用平板對(duì)峙方法檢測(cè)抑菌譜，含藥固體平板法及凹玻片法檢測(cè)PB-1發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)、孢子萌發(fā)的抑制作用，雙皿對(duì)扣法檢測(cè)揮發(fā)性物質(zhì)的抑菌活性，PCR檢測(cè)抗生素合成相關(guān)基因，以及離體葉片法檢測(cè)PB-1對(duì)灰葡萄孢的防效。研究結(jié)果將為深入評(píng)價(jià)PB-1對(duì)灰霉病的生防潛力及菌株進(jìn)一步的開(kāi)發(fā)利用提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株和培養(yǎng)基

本研究中所用解淀粉芽孢桿菌（B. amyloliquefaciens）PB-1、灰葡萄孢（B. cinerea）、禾谷鐮孢（Fusarium graminearum）、禾谷絲核菌（Rhizoctonia cerealis）、新月彎孢霉（Curvularia lunata）、膠孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides）、大斑凸臍蠕孢（Exserohilum turcicum）、粉紅聚端孢（Trichothecium roseum） 、榆樹(shù)間座殼菌（Diaporthe eres），均由河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院植物病理學(xué)研究室提供。植物病原真菌和PB-1的活化和保存，以及平板測(cè)定試驗(yàn)采用PDA培養(yǎng)基（馬鈴薯200 g/L、葡萄糖 20 g/L、瓊脂粉 15 g/L）；PB-1發(fā)酵采用LB培養(yǎng)基（Tryptone 10 g/L、Yeast Extract 5 g/L、NaCl 10 g/L，pH值7.0），各類(lèi)培養(yǎng)基均經(jīng)121 ℃滅菌20 min備用。

1.2 PB-1的抑菌譜測(cè)定

2022年2月于河南省河南科技學(xué)院資源與環(huán)境學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展以下相關(guān)試驗(yàn)。以灰葡萄孢（B. cinerea）、禾谷鐮孢（F. graminearum）、禾谷絲核菌（R. cerealis）、新月彎孢霉（C. lunata）、膠孢炭疽菌（C. gloeosporioides）、大斑凸臍蠕孢（E. turcicum）、粉紅聚端孢（T. roseum）及榆樹(shù)間座殼菌（D. eres）共8種病原為靶標(biāo)病原菌，采用平板對(duì)峙培養(yǎng)方法測(cè)定PB-1抑菌活性。各病原菌接種于PDA平板，24 ℃培養(yǎng)1～5 d，PB-1接種于PDA平板，28 ℃培養(yǎng)24 h。距PDA平板（直徑90 mm）邊緣2 cm處劃線接種PB-1，另一側(cè)（與PB-1中心距5 cm）接種直徑 5 mm 病原菌菌絲塊。以不接種PB-1為對(duì)照，每處理重復(fù)3次。將各平板置于 24 ℃ 培養(yǎng)直至對(duì)照長(zhǎng)滿(mǎn)平板為止，逐日觀察并測(cè)量各病原菌菌落半徑，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑菌率=（對(duì)照菌落半徑－處理菌落半徑）/（對(duì)照菌落半徑-2.5 mm）×100%。

1.3 PB-1發(fā)酵液的抑菌作用

1.3.1 發(fā)酵液的制備

PB-1接種PDA平板，28 ℃ 培養(yǎng)24 h后，接種環(huán)蘸取1環(huán)至裝有1.5 mL LB的EP管（規(guī)格2.0 mL）中，置于28 ℃、150 r/min培養(yǎng)24 h作為種子液。種子液以1%（體積比，下同）接種量接種至裝有99 mL LB的三角錐形瓶（規(guī)格250 mL）中，28 ℃、150 r/min培養(yǎng)48 h。發(fā)酵培養(yǎng)物經(jīng) 12 000 r/min 離心10 min，上清液分別經(jīng)0.45、0.22 μm 濾膜過(guò)濾得PB-1發(fā)酵液，置于 -20 ℃ 保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

采用含藥固體平板法［14］測(cè)定發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。即PB-1發(fā)酵液以20%的比例與40～50 ℃ PDA培養(yǎng)基混合均勻，分裝于直徑90 mm 培養(yǎng)皿，20 mL/皿，制成含藥固體平板。以LB培養(yǎng)基與PDA混合制平板為對(duì)照。各處理5次重復(fù)。灰葡萄孢菌株接種于PDA平板置于24 ℃培養(yǎng) 2 d 后，取菌落邊緣菌絲塊（直徑 5 mm）接種各處理平板中心處，置24 ℃培養(yǎng)，2 d后測(cè)量各平板菌落直徑。

1.3.3 發(fā)酵液濃度與抑菌活性的關(guān)系測(cè)定

采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定發(fā)酵液濃度與抑菌活性的關(guān)系。將PB-1發(fā)酵液分別以終濃度1.25%、2.50%、5.00%、10.00%和20.00%與PDA混合制平板，以添加相應(yīng)比例的LB培養(yǎng)基為對(duì)照，平板中心接種5 mm菌絲塊，每處理3次重復(fù)。將各平板置24 ℃培養(yǎng) 2 d，逐日測(cè)量菌落直徑，并計(jì)算菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑菌率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-5 mm）×100%。

1.3.4 發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)的抑制作用

采用凹玻片法測(cè)定PB-1發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢分生孢子萌發(fā)的抑制作用。將20 μL不同稀釋倍數(shù) PB-1 發(fā)酵液與20 μL孢子液（濃度1×104個(gè)/mL）混合滴加凹玻片，使發(fā)酵液終稀釋倍數(shù)分別為2倍、4倍、8倍、20倍、40倍，即20 μL發(fā)酵液+ 20 μL孢子液，10 μL發(fā)酵液+10 μL無(wú)菌水+ 20 μL孢子液，5 μL發(fā)酵上清液+ 15 μL無(wú)菌水+ 20 μL孢子液，2 μL發(fā)酵上清液+ 18 μL無(wú)菌水+ 20 μL孢子液，1 μL發(fā)酵上清液+ 19 μL無(wú)菌水+ 20 μL孢子液。以添加20 μL無(wú)菌水處理為對(duì)照，每個(gè)處理3次重復(fù)。24 ℃培養(yǎng)12 h后，隨機(jī)鏡檢200個(gè)孢子，計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

孢子萌發(fā)抑制率＝（對(duì)照萌發(fā)率-處理萌發(fā)率）/對(duì)照萌發(fā)率×100%。

1.3.5 PB-1 脂肽類(lèi)抗生素合成基因的PCR檢測(cè)

采用110F/110R、ituA1F/ituA1R 、FenB1F/FenB1R 3對(duì)引物分別擴(kuò)增表面活性素srfAB、伊枯草菌素ituA和豐原素fenB基因片段（表1）。PCR擴(kuò)增程序如下：94 ℃ 預(yù)變性5 min；94 ℃變性 30 s，58 ℃退火 30 s，72 ℃延伸1 min（35個(gè)循環(huán)）；72 ℃延伸 10 min，16 ℃保溫5 min。PCR采用25 μL反應(yīng)體系：細(xì)菌基因組DNA（50 ng/μL）1.0 μL，10× PCR Buffer（10 mmol/mL）2.5 μL，dNTP（2.5 mmol/L each）0.5 μL，上、下游引物（20 μmol/L）各0.5 μL，Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.25 μL，ddH2O 19.75 μL。PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)目標(biāo)片段擴(kuò)增情況，目標(biāo)片段回收后送公司測(cè)序，并用NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)分析。

1.4 PB-1揮發(fā)性物質(zhì)的抑菌活性測(cè)定

采用雙皿對(duì)扣法［17］測(cè)定PB-1揮發(fā)性物質(zhì)的抑菌活性。試驗(yàn)設(shè)置提前48 h接種和同時(shí)接種2個(gè)處理，提前48 h接種處理即PDA平板先接種 PB-1，28 ℃培養(yǎng)48 h后，去掉培養(yǎng)皿皿蓋，上扣接種灰葡萄孢菌絲塊（直徑5 mm）的PDA平板，透明膠帶密封對(duì)扣處；同時(shí)接種處理即同時(shí)將接種PB-1的平板與接種灰葡萄孢的平板對(duì)扣，以空白PDA平板與接種灰葡萄孢PDA平板對(duì)扣為對(duì)照（CK）。各處理重復(fù)3次。將各處理平板置24 ℃培養(yǎng)2 d后，測(cè)量灰葡萄孢菌落直徑。

1.5 PB-1對(duì)灰葡萄孢侵染的抑制作用

采用離體葉片接種法測(cè)定PB-1對(duì)灰葡萄孢侵染的抑制作用。用0.1% 吐溫-20溶液配制 PB-1 濃度分別為108、107、106、105、104 CFU/mL的細(xì)菌懸浮液，小白菜品種上海青離體葉片用1%的NaClO表面消毒1 min，無(wú)菌水沖洗2次，自然晾干后，置于鋪有濕潤(rùn)濾紙的搪瓷盤(pán)中。將不同濃度的PB-1細(xì)菌懸浮液均勻噴灑葉片，以只噴0.1% 吐溫-20溶液為對(duì)照，待葉片晾干后，接種灰葡萄孢菌絲塊（直徑 5 mm）。每張葉片2塊菌絲塊，每個(gè)處理3張葉子，3次重復(fù)。搪瓷盤(pán)覆保鮮膜保濕，置于24 ℃培養(yǎng)3 d，逐日觀察葉片發(fā)病情況，并測(cè)量病斑直徑。

2 結(jié)果與分析

2.1 PB-1抑菌譜

由表2可知，PB-1對(duì)8種植物病原真菌菌絲生長(zhǎng)均具有明顯抑制作用，抑菌率為34.5%～70.7%。PB-1對(duì)新月彎孢霉、灰葡萄孢、大斑凸臍蠕孢的抑制作用較強(qiáng)，菌絲生長(zhǎng)抑制率分別為70.7%、63.5%、63.4%，對(duì)禾谷鐮孢、禾谷絲核菌的抑制作用次之，抑制率分別為56.0%、42.0%，對(duì)膠孢炭疽菌的抑制作用最弱，抑菌率為34.5%，各處理之間存在顯著差異（P<0.05）。

2.2 PB-1發(fā)酵液的抑菌作用

2.2.1 發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)和形態(tài)的影響

由圖1-A可知，PB-1對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)存在明顯的抑制作用，培養(yǎng)2 d后，對(duì)照組灰葡萄孢菌落直徑為63.7 mm，而發(fā)酵液處理的菌落直徑為 7 mm，兩者之間存在極顯著差異（P<0.01），菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)96.6%。乳酸酚棉藍(lán)染色鏡檢發(fā)現(xiàn)，對(duì)照菌絲生長(zhǎng)正常，菌體飽滿(mǎn)且著色均勻（圖1-B）；而發(fā)酵液處理菌絲生長(zhǎng)受阻，表現(xiàn)為菌絲扭曲腫脹，細(xì)胞球狀膨大，原生質(zhì)外滲，著色不均勻（圖1-C）。

2.2.2 發(fā)酵液濃度與抑菌活性關(guān)系

PB-1發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)有明顯的抑制作用，隨著PDA培養(yǎng)基中PB-1發(fā)酵液濃度的增加，抑菌活性逐漸增強(qiáng)。由圖2可知，當(dāng)PB-1發(fā)酵液濃度為從1.25%增加到10.00%時(shí)，菌絲生長(zhǎng)抑菌率從14.2%上升到80.8%，發(fā)酵液濃度為20%時(shí)，抑菌率最高，達(dá)93.3%。發(fā)酵液濃度對(duì)數(shù)（x）與抑菌率概率值（y）之間呈顯著正相關(guān)（y=2.238 7x+3.444 0，r2=0.916 2，P<0.05）。

2.2.3 發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢分生孢子萌發(fā)的影響

由表3可知，PB-1發(fā)酵液對(duì)孢子萌發(fā)具有強(qiáng)烈的抑制作用。24 ℃下培養(yǎng)12 h后，PB-1不同稀釋倍數(shù)的發(fā)酵液處理對(duì)灰葡萄孢孢子萌發(fā)抑制率之間存在顯著差異。2×稀釋液、4×稀釋液及8×稀釋液處理均未觀察到灰葡萄孢分生孢子萌發(fā)，抑制率均為100%；而20×稀釋液、40×稀釋液抑制作用較弱，孢子萌發(fā)抑制率分別僅為5.4%、2.5%。

2.2.4 PB-1脂肽類(lèi)抗生素合成基因的PCR檢測(cè)

利用3對(duì)引物，分別對(duì)解淀粉芽孢桿菌PB-1脂肽類(lèi)抗生素合成基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果顯示，從PB-1中擴(kuò)增出srfAB、ituA基因片段（圖3），將基因片段測(cè)序BLAST比對(duì)分析結(jié)果表明，從PB-1中擴(kuò)增的srfAB基因片段序列與B. amyloliquefaciens菌株WS-8（CP018200.1）、B. velezensis菌株WLYS23（CP055160.1）等的相似性均為99%，ituA基因片段序列與B. amyloliquefaciens菌株WS-8（CP018200.1）、B. velezensis菌株WLYS23（CP055160.1）、B. subtilis菌株OFE17 ituA合成酶基因（MT957085.1）等的序列相似性均為100%；而fenB基因片段未擴(kuò)增出。由此可見(jiàn)，PB-1可以產(chǎn)生表面活性素、伊枯草菌素等脂肽類(lèi)抗生素。

2.3 PB-1 揮發(fā)性物質(zhì)的抑菌活性

由圖4可知，PB-1揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)具有明顯抑制作用。2d后，對(duì)照菌落直徑為57.5 mm，PB-1與灰葡萄孢同時(shí)接種處理菌落直徑為58 mm，兩者之間無(wú)顯著差異；而PB-1提前48 h 接種處理菌落直徑為35.2 mm，與對(duì)照之間存在顯著差異。

2.4 PB-1對(duì)灰葡萄孢侵染的抑制作用

由圖5可知，PB-1對(duì)灰葡萄孢侵染存在明顯的抑制作用。對(duì)照處理（0 CFU/mL）葉片病斑平均直徑為11.7 mm，1×104 CFU/mL處理為10.2 mm，1×105 CFU/mL處理為8.0 mm，1×106 CFU/mL處理為7.0 mm，1×107 CFU/mL處理為5.3 mm，而 1×108 CFU/mL處理抑制效果最好，病斑直徑為3.2 mm；統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，各處理之間存在顯著差異。

3 討論與結(jié)論

解淀粉芽孢桿菌抑菌活性物質(zhì)豐富，可防治多種植物病害。2010—2020年全球新登記微生物農(nóng)藥活性成分統(tǒng)計(jì)表明，解淀粉芽孢桿菌為新登記較多的一種芽孢桿菌［18］。盧彩鴿等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌MH71抑菌譜廣泛，對(duì)鐮刀病菌、灰霉病菌、大白菜黑腐病菌、黃瓜細(xì)菌性角斑病菌等多種植物病原菌具較強(qiáng)抗菌活性［11］。本研究結(jié)果表明，PB-1除了對(duì)B. cinerea具有較強(qiáng)抑制作用外，對(duì)新月彎孢霉（C. lunata）、大斑凸臍蠕孢（E. turcicum）和禾谷鐮刀菌（F. graminearum）均有較好的抑制作用，這說(shuō)明PB-1具有廣譜抗菌活性，具有較好的應(yīng)用前景。

解淀粉芽孢桿菌生防機(jī)制多樣［8］。劉人萱等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌FS6可濕性粉劑對(duì)人參灰霉病菌菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)均表現(xiàn)明顯的抑制作用［19］。本研究發(fā)現(xiàn)，PB-1發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，菌絲生長(zhǎng)抑制率達(dá)96.6%，被抑制菌絲出現(xiàn)著色不均勻、腫脹扭曲、分枝異常、原生質(zhì)外滲等現(xiàn)象，且發(fā)酵液濃度對(duì)數(shù)與菌絲生長(zhǎng)抑制率概率值間呈顯著正相關(guān)。PB-1發(fā)酵液對(duì)灰葡萄孢分生孢子萌發(fā)也具有較強(qiáng)的抑制作用。PB-1發(fā)酵液2×、4×及8×稀釋液處理，分生孢子均不萌發(fā)。灰霉病主要以分生孢子作為田間病害的初侵染和再侵染來(lái)源，PB-1發(fā)酵液對(duì)菌絲和分生孢子的較強(qiáng)抑制作用，說(shuō)明其具有較好的生防潛力。劉超等從解淀粉芽孢桿菌BA-26發(fā)酵液抑菌譜較廣，抗真菌活性物質(zhì)抑制灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)，導(dǎo)致菌絲分枝異常、菌絲膨大畸形，并從中分離純化到11個(gè)抑菌活性組分［20］。朱弘元等發(fā)現(xiàn)解淀粉芽孢桿菌B15可以產(chǎn)生iturin A、fengycin［21］。本研究結(jié)果表明，PB-1可以產(chǎn)生表面活性素、伊枯草菌素等脂肽類(lèi)物質(zhì)。下一步，還需要采用高效液相色譜（UPLC）與質(zhì)譜（LC-MS）檢測(cè)對(duì)PB-1的發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行抗生素類(lèi)型分析，以便更好地挖掘PB-1的生防潛力。細(xì)菌揮發(fā)性有機(jī)化合物（VOC）主要是通過(guò)一種間接機(jī)制來(lái)誘導(dǎo)植物系統(tǒng)抗性（ISR），在真菌病原體的生物防治中具有重要作用［22］。解淀粉芽孢桿菌NJN-6產(chǎn)生VOC抑制香蕉枯萎病菌（Fusarium oxysporum f. sp. cubense）的菌絲生長(zhǎng)和孢子萌發(fā)［10］。Gotor-Vila 等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌CPA-8 VOC不僅抑制灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)，并對(duì)櫻桃果實(shí)產(chǎn)孢抑制率達(dá)100%［23］。本研究揮發(fā)性物質(zhì)抑菌試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)，PB-1 揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢菌絲生長(zhǎng)具有明顯抑制作用。下一步，還需對(duì)PB-1揮發(fā)性物質(zhì)對(duì)灰葡萄孢侵染抑制效果進(jìn)行檢測(cè)，以期將其應(yīng)用于果蔬采后灰霉病的防治。Zhou等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌NCPSJ7不僅可以降低葡萄采后灰霉病的發(fā)病率、病變直徑和腐爛指數(shù)，而且提高了葡萄多酚氧化酶、過(guò)氧化物酶、幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶等抗性相關(guān)酶的活性［24］。本研究離體葉片接種試驗(yàn)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)PB-1對(duì)灰葡萄孢的侵染具有明顯的抑制作用。隨著PB-1濃度的提高，病斑直徑明顯減小。下一步還需開(kāi)展盆栽和大田防效試驗(yàn)，以評(píng)估PB-1田間應(yīng)用潛力。

生防細(xì)菌具有復(fù)雜的生防機(jī)理，因此明確其作用機(jī)制對(duì)于生防菌劑的成功應(yīng)用非常重要。本研究已初步明確PB-1的生防機(jī)理，該菌株具有廣譜抗菌活性，產(chǎn)生多樣抗菌物質(zhì)及揮發(fā)性抑菌物質(zhì)，并對(duì)灰葡萄孢侵染具有明顯抑制作用。本研究結(jié)果顯示，PB-1具有良好的灰霉病生防應(yīng)用前景。Salvatierra-Martinez等研究發(fā)現(xiàn)，解淀粉芽孢桿菌菌株BBC047在番茄葉片上產(chǎn)生強(qiáng)大生物膜，有助于其空間競(jìng)爭(zhēng)能力的提高［25］。因此，下一步還需展開(kāi)PB-1生物膜形成能力及植物表面定殖能力的研究，以期為PB-1的田間應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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基金項(xiàng)目：河南省重點(diǎn)研發(fā)與推廣專(zhuān)項(xiàng)（科技攻關(guān)）（編號(hào)：222102110266、232102111016）；河南科技學(xué)院高層次人才科研項(xiàng)目（編號(hào)：103020222001/025）。

作者簡(jiǎn)介：楊 蕊（1980—），女，河南新鄉(xiāng)人，博士，講師，從事植物病理學(xué)及植物病害生物防治方面的研究。E-mail：yrui2017@hist.edu.cn。

通信作者：陸寧海，博士，副教授，從事植物病害分子流行學(xué)和生物防治研究。E-mail：gsninghai@163.com。