摘要：【目的】通過Box-Behnken響應面優(yōu)化熱水浴法解除蠶卵滯育的處理條件，并測試以不同來源水處理蠶種的孵化效果，為熱水浴法在蠶業(yè)生產(chǎn)中的推廣應用提供科學依據(jù)，探索出可替代傳統(tǒng)鹽酸孵化法且更安全環(huán)保、成本低廉的蠶種人工孵化方法?！痉椒ā窟x用兩廣二號為供試蠶種，以卵齡（A）、處理時間（B）和處理溫度（C）為變量，以蠶卵實用孵化率（Y）為響應值，通過Box-Behnken響應面優(yōu)化熱水浴法解除蠶卵滯育的處理條件；選擇自來水、純凈水及礦泉水等不同來源的水，并選取薩尼斯、932、湘暉和春5等4個蠶種品種，分別采用優(yōu)化后的條件對蠶卵進行熱水浴處理，檢驗熱水浴法解除蠶卵滯育的效果?！窘Y果】蠶卵實用孵化率對3個變量因素的二項式擬合方程為：Y=91.03-2.01A-4.60B+22.89C+0.040AB+4.03AC+0.89BC-10.46A2+3.25B2-19.60C2，響應面設計模型擬合程度較好。各因素對蠶卵實用孵化率的影響排序為處理溫度（C）gt;處理時間（B）gt;卵齡（A），其中，處理溫度影響極顯著（Plt;0.01），處理時間影響顯著（Plt;0.05，下同），卵齡影響不顯著（Pgt;0.05，下同）;兩因素間交互作用對蠶卵實用孵化率的影響排序為ACgt;BCgt;AB。修正后的熱水浴法最佳處理條件：卵齡17.5h，處理時間13s，處理溫度50℃，此條件下的實際蠶卵實用孵化率為97.94%，與理論預測值（98.81%）接近。不同來源水對兩廣二號正、反交種進行熱水浴處理后的實用孵化率均在95.00%以上，僅陽山自來水和純凈水1在熱水浴處理兩廣二號正交種時的實用孵化率顯著低于鹽酸即時浸酸法，但其實用孵化率仍高于93.00%;薩尼斯、932、湘暉、春5等4個家蠶品種的熱水浴實用孵化率與鹽酸即時浸酸法相比均無顯著差異，表明熱水浴法具有較強的普適性?！窘Y論】熱水浴法能有效解除蠶卵滯育，具有較強的普適性，且成本低廉、操作簡單，可作為蠶業(yè)生產(chǎn)上替代傳統(tǒng)鹽酸孵化法的新方法。

關鍵詞：熱水浴法；二化性家蠶品種；蠶卵；解除滯育；人工孵化；響應面優(yōu)化

中圖分類號：S882.35文獻標志碼：A文章編號：2095-1191（2024）01-0280-10

Optimization of conditions and application effect analysis for prevention of diapause in silkworm eggs by hot water treatment

SUN Zhen-bo1·2，LIAO Sen-tai1，YANG Qiong1，LIU Ji-ping2，XIAO Yang'，LI Qing-rong'，XING Dong-xu1

（'Sericulture and Agri-food Research Institute，Guangdong AcademyofAgricultural Sciences，Guangzhou，Guangdong 510610，China;2College of Animal Science，South China Agricultural University，Guangzhou，

Guangdong510642，China）

Abstract：[Objective]The Box-Behnken response surface was used to optimize the treatment conditions of the hot water bath method for relieving silkworm egg diapause，and to test the hatching effect of sikworm eggs treated with wa-ter from different sources，so as to provide ascientific basis for the promotion of the hot water bath method in sericul-ture production，and to explore asafer，environmentally friendly and cost-effective method of artificial hatching for silk-worm egs，which could be used instead of the traditional hydrochloric acid hatching method.[Method]The treatment conditions of relieving silkworm egg diapause by hot water bath were optimized by Box-Behnken response using Liang-guangNo.2as the test species，with egg age（A），treatment time（B）and treatment temperature（C）as the variables，and practical hatching rate（Y）as theresponse value;different sources of water suchas tap water，pure water and mineral wa-ter were selected and four silkworm varieties such as Sanisi，932，Xianghui and Chun5were selected to test the effect of hot water bath method in relieving diapause by applying optimized conditions to silkworm eggs in hot water bath treat-ment respectively.【Result]The binomial fitting equation of silkworm egg practical hatching rate to the thre variable factors was Y=91.03-2.01A-4.60B+22.89C+0.040AB+4.03AC+0.89BC-10.46A2+3.25B2-19.60C2，which was agood fit for the response surface design model.The effect of each factor on the practical hatching rate of eggs was ranked as treat-ment temperature（C）gt;treatment time（B）gt;egg age（A），in which the effects of treatment temperature were extremely significant（Plt;0.01），the effects of treatment time weresignificant（Plt;0.05，the samebelow），and theeffects of egg age were insignificant（Pgt;0.05，the same below）;and the effects of the interaction between the two factors on practical hat-ching rate of silkworm eggs wereranked as ACgt;BCgt;AB.The optimum treatment conditions of the modified hot water bath method were：egg age17.5h，treatment time13s，andtreatment temperature50°℃.The actual practical hatching rate of silkworm eggs was97.94%，which was close to the theoretical predicted value（98.81%）.The practical hatching rates of different sources of water for the hot water bath treatment of the orthogonal and inverse crosses of Liangguang No.2were all above95.00%，and only the practical hatching rates ofYangshan tap water andpure waterl in the hot water bath treat-ment of the orthogonal cross of LiangguangNo.2were significantly lower than those of the hydrochloric acid instant acid immersion method，but their practical hatching rate was still higher than93.00%;there was no significant difference in the practical hatching rate of four silkworm varieties，including Sanisi，932，Xianghui and Chun5，in the hot water bath method compared with the hydrochloric acid instant acid immersion method，indicating that the hot water bath method had astrong generalization.【Conclusion]Hot water bath method can effectively relieve the diapause of silkworm eggs has strong generalization，and low cost，simple operation，can be used as anew method to replace traditional hydrochlo-ric acid incubationmethod in sericulture production.

Keywords：hot water treating method;bivoltine silkworm breed;sikworm egg;relieving diapause;artificial incu-bation;response surface optimization

Foundation items：Youth Project of National Natural Science Foundation of China（31702189）;Guangxi Key Re-search and Development Plan Project（GuikeAB23026056）;General Project of Guangdong Natural Science Foundation（2021A1515010595）;Guangdong Agricultural Science and Technology Innovation and Extension System Construction Project（2021KJ124）

0引言

【研究意義】蠶桑業(yè)是我國的特色優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)，而廣西是我國最大的桑蠶產(chǎn)區(qū)。為滿足蠶桑業(yè)的生產(chǎn)需求，通常需要對蠶種進行人工孵化處理，其中鹽酸孵化是目前生產(chǎn)上通用的方法（蔣滿橋等，2012;Li et al.，2019;張靜宇，2020），但鹽酸對人體具有很強的刺激毒害性，對機械設施也有較強的腐蝕性。隨著我國對化學品管控的日趨嚴格，鹽酸的采購和管理也極為不便。此外，即時浸酸對鹽酸濃度有嚴格要求，操作技術要求非常高（徐世清等，1990）。因此，亟待研發(fā)出更安全、環(huán)保、便捷的人工孵化方法以促進蠶桑業(yè)高質量發(fā)展?！厩叭搜芯窟M展】除了鹽酸孵化法外，已報道的人工孵化方法還包括溫水浸漬法（楊邦杰等，1983;楊希哲和付圖強，1993）、電暈人工孵化法（葉士璟等，1996;張雨麗等，2020;Zhang et al.，2022）、過氧化氫活化法（沈愛英等2003;江志勇等，2005）、二甲基亞砜孵化法（Yama-moto et al.，2013）、高濃度氧孵化法（龔競等，2020）等，且部分方法涉及的相關作用機制已得到初步驗證（徐世清等，2004;Gong et al.，2016;龔競等，2017）。在上述方法中，高濃度氧孵化法、電暈人工孵化法和過氧化氫活化法較安全環(huán)保且有效，但高濃度氧孵化法的處理時間較長（龔競等，2020），電暈人工孵化法尚未實現(xiàn)大批量處理蠶種（張雨麗等，2020;Zhang et al.，2022），而過氧化氫活化法因產(chǎn)卵介質不同其處理方法也不同（沈愛英等，2003）。因此，這3種人工孵化方法在蠶桑生產(chǎn)中仍未能推廣應用。此外，楊邦杰等（1983）以二化性白繭種華十原種及華九×瀛汗為供試蠶種，發(fā)現(xiàn)溫水浸漬處理后蠶卵實用孵化率可超過90%。楊希哲和付圖強（1993）通過研究溫水浴種對二化性蠶品種秋星、781和蘇3×秋3的孵化效果，發(fā)現(xiàn)溫水浴種對二化性蠶品種781和蘇3×秋3的效果較好。但與鹽酸孵化法相比，上述人工孵化方法的蠶種孵化效果還有待進一步提高。蔣滿橋等（2012）采用不同酸類物質和溫水處理產(chǎn)卵后20h的兩廣二號蠶種，結果發(fā)現(xiàn)溫水浸漬時間為1～20min時，家蠶孵化率僅在18.4%～85.7%，不具備實用價值。可見，溫水浸漬處理條件對蠶種解除滯育的效果并不理想，達不到實用化水平?！颈狙芯壳腥朦c】本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，卵齡16h的兩廣二號蠶種經(jīng)50℃水浴處理15s可獲得與鹽酸孵化法相當?shù)姆趸Ч?，但針對熱水浴法的處理條件尚未進行深入研究，其應用效果也有待進一步驗證?！緮M解決的關鍵問題】通過Box-Behnken響應面優(yōu)化熱水浴法解除蠶卵滯育的處理條件，同時測試以不同來源水處理蠶種的孵化效果，以期為熱水浴法在蠶業(yè)生產(chǎn)中的推廣應用提供科學依據(jù)，探索出可替代傳統(tǒng)鹽酸孵化法且更安全環(huán)保、成本低廉的蠶種人工孵化方法。

1材料與方法

1.1試驗材料

供試蠶種為二化性四元雜交品種兩廣二號正交種（9芙×7湘）和反交種（7湘×9芙），由廣東絲源集團有限公司陽山分公司提供。自來水分別取自廣州市天河區(qū)和陽山縣陽城鎮(zhèn)，其他純凈水和礦泉水購自盒馬鮮生超市，各種水pH如下：廣州自來水pH6.7、陽山自來水pH6.5、純水（RO）pH6.8、純凈水1pH6.9、純凈水2pH6.5、純凈水3pH6.8、礦泉水1pH7.5、礦泉水2pH7.2、礦泉水3pH7.3。

1.2單因素試驗

1.2.1處理溫度對蠶卵實用孵化率的影響將兩廣二號正交種（9芙×7湘）蠶卵（卵齡18h）熱水浴處理20s，比較不同處理溫度（46、48、50、52和54℃）對蠶卵實用孵化率的影響，每個溫度處理3個卵圈。

1.2.2卵齡對蠶卵實用孵化率的影響兩廣二號正交種（9芙×7湘）蠶卵在50℃下熱水浴處理20s，比較不同卵齡（12、15、18、21和23h）對蠶卵實用孵化率的影響，每個卵齡處理3個卵圈。

1.2.3處理時間對蠶卵實用孵化率的影響兩廣二號正交種（9芙×7湘）蠶卵（卵齡18h）在50℃下進行熱水浴處理，比較不同處理時間（10、15、20、25和30s）對蠶卵實用孵化率的影響，每個時間處理3個卵圈。

1.3Box-Behnken響應面優(yōu)化熱水浴處理法

以卵齡（A）、處理時間（B）和處理溫度（C）為變量，以蠶種實用卵化率（Y）為響應值，設計3因素3水平試驗，利用Design-Expert10進行Box-Behnken試驗設計，試驗因素與水平設計見表1，試驗方案見表2。每個組處理6個卵圈。

1.4熱水浴法應用效果分析

1.4.1不同來源水對蠶卵實用孵化率的影響按Box-Behnken響應面試驗得到的最優(yōu)處理條件，分別以不同來源的水進行熱水浴處理，以鹽酸即時浸酸法（1.075g/mL HCl，卵齡20h，46℃處理5min）為陽性對照，未處理蠶卵為陰性對照。每個試驗組處理12個卵圈（6個正交種卵圈，6個反交種卵圈），收蟻后統(tǒng)計實用孵化率。

1.4.2不同家蠶品種對實用孵化率的影響按Box-Behnken響應面試驗得到的最優(yōu)處理條件，分別對一化性家蠶品種薩尼斯和二化性家蠶品種932、湘暉、春5等進行熱水浴處理，以鹽酸即時浸酸法（1.075g/mL HCl，卵齡20h，46℃處理5min30s）為陽性對照。每個試驗組處理3個卵圈，收蟻后統(tǒng)計實用孵化率。

1.5統(tǒng)計分析

采用Excel2019和SPSS26.0進行數(shù)據(jù)整理及顯著性分析，并以Origin2019b進行繪圖。

2結果與分析

2.1單因素試驗結果

2.1.1處理溫度對蠶卵實用孵化率的影響由圖1可知，處理溫度為50℃時蠶卵實用孵化率最高[（98.50±0.57）%]，處理溫度上升到54℃時蠶卵實用孵化率最低[（0.87±0.44）%]。各溫度處理組間的蠶卵實用孵化率均存在顯著差異（Plt;0.05，下同），表明處理溫度對蠶卵實用孵化率影響顯著。

2.1.2卵齡對蠶卵實用孵化率的影響由圖2可知，卵齡18h的蠶卵實用孵化率最高[（96.23±1.56）%]，與其他卵齡處理組間存在顯著差異；卵齡12h的蠶卵實用孵化率最低[（45.96±4.17）%]。隨著卵齡的增加，蠶卵實用孵化率呈先上升后下降的變化趨勢，卵齡在18～24h的范圍內，蠶卵實用孵化率呈逐漸下降趨勢，說明隨著胚胎進入深度滯育后熱水浴法解除滯育的效果較差。

2.1.3處理時間對蠶卵實用孵化率的影響由圖3可知，處理時間為20s時蠶卵實用孵化率最高[（96.83±0.91）%]，與處理15、25和30s的蠶卵實用孵化率存在顯著差異。各處理組的蠶卵實用孵化率均在90.00%以上，表明蠶卵實用孵化率受處理時間的影響較小。

2.2Box-Behnken響應面優(yōu)化結果

2.2.1回歸方程建立及方差分析結果采用Design-Expert10對表3的試驗數(shù)據(jù)進行多元回歸擬合，得到二項式擬合方程：Y=91.03-2.01A-4.60B+22.89C+0.040AB+4.03AC+0.89BC-10.46A2+3.25B2-19.60C2。

由表4可知，該模型的Plt;0.0001，表明該模型極顯著;失擬項P=0.7484gt;0.05，表明模型失擬項不顯著，說明該方程對試驗擬合較好，可用于后續(xù)研究。對模型進行回歸方程系數(shù)顯著性檢驗，結果顯示，處理溫度影響極顯著（Plt;0.01，下同），處理時間影響顯著，卵齡影響不顯著（Pgt;0.05，下同），卵齡和處理溫度的平方項均極顯著，而處理時間的平方項不顯著，說明各因素對蠶卵實用孵化率的影響不是簡單線性關系。交互項均表現(xiàn)為不顯著，說明不同因素間的交互作用對蠶卵實用孵化率的影響較小。根據(jù)F可知，在所取因素水平范圍內，各因素對蠶卵實用孵化率的影響排序為處理溫度（C）gt;處理時間（B）gt;卵齡（A），各因素間交互作用對蠶卵孵化率的影響排序為ACgt;BCgt;AB。

2.2.2交互作用影響分析結果由回歸方程得出響應面圖（圖4～圖6），可直觀反映卵齡（A）、處理時間（B）、處理溫度（C）各因素交互作用對蠶卵實用孵化率的影響。兩因素交互作用的響應曲面越陡峭且等高線越接近橢圓形，表明交互作用對響應值的影響越顯著（劉彥峰等，2022;李凡等，2023）。圖4中

響應曲面平緩，表明卵齡（A）與處理時間（B）對蠶卵實用孵化率的交互作用不明顯；圖5中響應曲面較陡峭，且其等高線呈橢圓形，表明卵齡（A）與處理溫度（C）的交互作用對蠶卵實用孵化率有明顯影響；圖6也顯示處理時間（B）與處理溫度（C）的交互作用對蠶卵實用孵化率的影響較小，與模型方差分析結果一致。

2.2.3驗證試驗結果通過Design-Expert10分析得到熱水浴處理最優(yōu)條件為卵齡17.65h、處理時間13.11s、處理溫度50.32℃，在此條件下的蠶卵理論孵化率為98.81%。綜合考慮實際生產(chǎn)中的操作可行性，對最優(yōu)條件進行修正：卵齡17.5h，處理時間13s，處理溫度50℃。3次平行試驗得到的蠶卵實用孵化率平均值為97.94%，與模型預測值接近，說明可通過Box-Behnken響應面法優(yōu)化熱水浴處理條件。

2.3熱水浴法應用效果分析

2.3.1不同來源水對蠶卵實用孵化率的影響為檢驗熱水浴法的應用效果，選取不同來源的自來水、純凈水和礦泉水，以優(yōu)化后的條件處理蠶卵，試驗結果如圖7～圖8及表5所示。以不同來源水對兩廣二號正、反交種進行熱水浴處理后的實用孵化率均在95.00%以上。其中，與鹽酸即時浸酸法相比，以不同來源水對兩廣二號反交種（7湘×9芙）進行熱水浴處理的實用孵化率均無顯著差異，但在正交種（9芙×7湘）中陽山自來水和純凈水1的熱水浴實用孵化率顯著降低。無論正交種還是反交種，采用熱水浴法處理后各組的蠶卵實用孵化率均超過生產(chǎn)合格指標（實用孵化率≥93%）。

2.3.2不同家蠶品種對實用孵化率的影響為檢驗不同家蠶品種對熱水浴法解滯育效果的影響，采用優(yōu)化后的熱水浴處理條件（卵齡17.5h，處理時間13s，處理溫度50℃）對薩尼斯、932、湘暉和春5等家蠶品種滯育卵進行處理，結果（圖9）顯示，與鹽酸即時浸酸法相比，4個家蠶品種滯育卵經(jīng)熱水浴處理后的實用孵化率均無顯著差異。其中，一化性品種薩尼斯經(jīng)2種孵化方法處理后的實用孵化率均較低，可能是其滯育程度相對于二化性品種更深所致。

3討論

本研究以二化性四元雜交組合兩廣二號為供試家蠶品種，選用對蠶卵孵化率影響較大的卵齡、處理溫度和處理時間3個因素進行Box-Behnken試驗設計，所得試驗結果以Design-Expert10進行分析并擬合構建相應的數(shù)學模型，其回歸分析結果表明：處理溫度對蠶卵實用孵化率的影響極顯著，處理時間的影響顯著，卵齡的影響不顯著，且不同因素間的交互作用對蠶卵實用孵化率的影響較小。結合生產(chǎn)實際，優(yōu)化得到熱水浴法處理蠶卵的最優(yōu)條件：卵齡17.5h，處理時間13s，處理溫度50℃。在此條件下，蠶卵實用孵化率平均值達97.94%，可有效解除蠶種滯育。據(jù)統(tǒng)計，1992—2020年家蠶品種兩廣二號在廣西和廣東蠶區(qū)的發(fā)種量已超過1億張，其中鹽酸即時浸酸蠶種占有較高比例（陳振烽和肖杰章，2013;馮家新等，2021）。熱水浴法的操作簡便、普適性強，與鹽酸孵化法相比更加安全、環(huán)保，且能降低生產(chǎn)成本，在我國蠶區(qū)具有極高的推廣價值。本課題組下一步將針對全國其他蠶區(qū)的主導品種開展熱水浴解滯育試驗，同時探究熱水浴法對家蠶生長發(fā)育及經(jīng)濟性狀的影響，為熱水浴法的實際推廣應用提供更多科學依據(jù)。

為綜合考慮全國各蠶區(qū)自來水的pH和成分組成差異是否會影響熱水浴的處理效果，本研究選取不同來源的自來水、純凈水和礦泉水進行蠶種熱水浴處理，結果發(fā)現(xiàn)，不同來源水對兩廣二號正、反交種進行熱水浴處理后的實用孵化率均在95.00%以上，僅陽山自來水和純凈水1在熱水浴處理兩廣二號正交種時的實用孵化率顯著低于鹽酸即時浸酸法，但其實用孵化率仍高于93.00%，超過現(xiàn)行標準對蠶卵實用孵化率的要求，說明不同來源水對熱水浴處理蠶種的孵化效果無明顯影響。此外，本研究選用一化性品種薩尼斯及二化性品種932、湘暉和春5等不同家蠶品種進行熱水浴處理，結果發(fā)現(xiàn)4個家蠶品種的熱水浴實用孵化率與鹽酸即時浸酸法相比均無顯著差異，表明熱水浴法具有較強的普適性，在蠶桑生產(chǎn)中具有極高的應用潛力。除家蠶品種春5外，其他品種經(jīng)熱水浴處理后的實用孵化率略低于鹽酸即時浸酸法，可能是不同家蠶品種的最佳熱水浴處理條件有所差異，因此今后需針對不同家蠶品種進行熱水浴處理條件優(yōu)化。

蔡曉明和朱勇（2003，2004a，2004b）研究認為，H*是鹽酸孵化法的效應離子，推測H*可改變細胞膜的通透性，同時影響生物酶的穩(wěn)定性和活性。蔣滿橋等（2012）用不同酸類物質處理滯育蠶卵，結果發(fā)現(xiàn)不同酸類物質間的效果差異是由pH不同所引起，指出H濃度在解除蠶卵滯育中發(fā)揮重要作用。

Gong等（2016）、許瑾等（2020，2021）通過研究鹽酸處理對生物酶的影響，發(fā)現(xiàn)在鹽酸即時浸酸卵中的海藻糖酶、海藻糖合成酶、山梨醇脫氫酶、己糖激酶及磷酸果糖激酶等生物酶表達水平與滯育卵存在顯著差異。此外，Kitta等（2015，2018）研究發(fā)現(xiàn)鹽酸孵化法解除蠶種滯育還與Ca2+從絨毛膜和蠶卵內部外排有關。本研究中，不同來源水的熱水浴處理均能有效解除蠶種滯育，其pH范圍在6.5～7.5，其中3個礦泉水均呈弱堿性，表明H*并非熱水浴法的主要影響因子。Box-Behnken響應面分析結果表明，處理溫度是影響熱水浴法實用孵化率的最主要因素，與徐世清等（2004）研究認為高溫在解除蠶卵滯育上可能發(fā)揮重要作用的結論一致，但熱水浴法解除蠶卵滯育的機制是否與鹽酸孵化法相同還有待進一步探究。

4結論

熱水浴法能有效解除蠶卵滯育，具有較強的普適性，且成本低廉、操作簡單，可作為蠶業(yè)生產(chǎn)上替代傳統(tǒng)鹽酸孵化法的新方法。熱水浴法解除蠶卵滯育的最佳處理條件：卵齡17.5h，處理時間13s，處理溫度50℃，在此條件下蠶卵實用孵化率可達97.94%。

參考文獻：

蔡曉明，朱勇.2003.浸酸孵化法解除家蠶滯育的機理研究（I）——H*在解除家蠶滯育中的效應初探[J].蠶學通訊，23（4）：12-14.[Cai XM，Zhu Y.2003.Study on the mechanism of diapause termination with acid-rinsing in silkworm（I）—Effect of H*in diapause termination in silk-worm[J].Newsletter of Sericultural Science，23（4）：12-14.]doi：10.3969/j.issn.1006-0561.2003.04.006.

蔡曉明，朱勇.2004a.浸酸孵化法解除家蠶滯育的機理研究（Ⅱ）——醋酸解除家蠶滯育機理分析[J].蠶學通訊，24（2）：22-23.[Cai XM，Zhu Y.2004a.Study on the mecha-nisms for diapause termination by acid hatching of silk-worm eggs（II）—Analysis of the mechanisms for diapause termination by acetic acid hatching[J].Newsletterof Seri-cultural Science，24（2）：22-23.]doi：10.3969/j.issn.1006-0561.2004.02.008.

蔡曉明，朱勇.2004b.鹽酸解除家蠶滯育的機理研究[J].四川蠶業(yè)，32（2）：7-10.[Cai XM，Zhu Y.2004b.Study on the mechanism of hydrochloric acid for relieving diapause"of silkworm[J].Sichuang Sericulture，32（2）：7-10.]doi：10.3969/j.issn.1006-1185.2004.02.004.

陳振烽，肖杰章.2013.兩廣二號不同卵齡即時浸酸處理的發(fā)育進度及孵化率差異分析[J].廣東蠶業(yè)，47（4）：39-41.[Chen ZF，Xiao JZ.2013.Analysis of differences in developmental progress and hatching rate between the immediate acid immersion treatments at different egg ages of Liangguang No.2[J].Guangdong Sericulture，47（4）：39-41.]doi：10.3969/j.issn.2095-1205.2013.04.11.

馮家新，葉夏裕，李標，胡智明，蔣滿貴.2021.家蠶品種兩廣二號創(chuàng)發(fā)種量超億張的歷史最高記錄[J].中國蠶業(yè)，42（2）：44-46.[FengJX，Ye XY，LiB，Hu ZM，Jiang MG.2021.Domestic silkworm variety Liangguang No.2sets"all-time record of over100million seeds distributed[J]China Sericulture，42（2）：44-46.]doi：10.16839j.cnki.zgcy2021.02.009.

龔競，尚杉，張育浩，顏嘉敏，朱勇.2020.高濃度氧處理法阻斷蠶卵滯育[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報，41（1）：61-68.[Gong J，Shang S，ZhangYH，Yan JM，Zhu Y.2020.Prevention of diapause in silkworm eggs by hyperoxia method[J].Journal of South China Agricultural University，41（1）：61-68.]doi：10.7671/j.issn.1001-411X.201903013.

龔競，田莎，侯勇，趙歡歡，朱勇.2017.HCl和DMSO阻斷滯育條件下桑蠶卵殼電鏡觀察[J].華南農(nóng)業(yè)大學學報，38（2）：1-5.[Gong J，Tian S，Hou Y，Zhao HH，Zhu Y.2017.SEM observation on silkworm eggshell under HCl or dimethyl sulfoxide（DMSO）treatment for preventing dia-pause[J].Journal ofSouthChina Agricultural University，38（2）：1-5.]doi：10.7671/j.issn.1001-411X.2017.02.001.

蔣滿橋，韋廷秀，黃藝，黎書明，余武昌，李國棟，陽誠，覃月鳳，唐永飛.2012.不同酸類物質浸漬解除家蠶卵滯育的研究[J].廣西蠶業(yè)，49（2）：10-13.[Jiang MQ，WeiTX，Huang Y，LiSM，YuWC，LiGD，Yang C，Qin YF，Tang YF.2012.Study on the release of diapausing egg of Bom-byx mori by impregnation with different acids[J].Guangxi Sericulture，49（2）：10-13.]doi：10.19553/j.cnki.1006-1657.2012.02.003.

江志勇，陳偉煉，曾淑歡.2005.過氧化氫對鹽酸解除家蠶滯育的促進作用研究[J].廣東蠶業(yè)，39（3）：38-40.[Jiang ZY，Chen WL，Zeng SH.2005.The investigation that H?O?accelerate hydrochloric acid termination of diapause of silkworm[J].Guangdong Sericulture，39（3）：38-40.]

李凡，張景霞，王衛(wèi)鋒，李莎莎，毛阿娟，李雅娟，陳曦，李芳.2023.Box-Behnken響應面法優(yōu)化附子的蒸制及干燥工藝[J].特產(chǎn)研究，45（2）：20-25.[LiF，Zhang JX，Wang WF，LiS S，Mao AJ，LiY J，Chen X，LiF.2023.Optimi-zation of the steaming and drying process of aconite bythe Box-Behnken response surface methodology[J].Special"Wild Economic Animal and Plant Research，45（2）：20-25.]doi：10.16720/j.cnki.tcyj.2023.037.

劉彥峰，李俊娥，毛亞玲，韓舜愈，李霞.2022.葡萄皮皂苷提取條件優(yōu)化及其穩(wěn)定性分析[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學學報，57（5）：240-248.[Liu YF，LiJE，Mao YL，Han SY，Li X.2022.Optimization of extraction conditions and stability analysis of grape skin saponins[J].Journal of Gansu Agri-cultural University，57（5）：240-248.]doi：10.13432/j.cnki.jgsau.2022.05.028.

沈愛英，趙林川，劉慧婷.2003.外源H?O?活化家蠶滯育性卵的研究[J].蠶業(yè)科學，29（3）：311-313.[ShenAY，ZhaoL C，Liu HT.2003.Study on the activation of silkworm diapausing eggs with hydrogen peroxide[J].Acta Serico-logica Sinica，29（3）：311-313.]doi：10.3969/j.issn.0257-4799.2003.03.022.

徐世清，劉建潮，沈小明.1990.產(chǎn)后100小時內蠶卵的即時浸酸試驗[J].江蘇蠶業(yè)，（2）：19-25.[XuS Q，Liu JC Shen XM.1990.Immediate acid soaking test for silk-wormeggs within100hours oflaying[J].Jiangsu Sericul-ture，（2）：19-25.]

徐世清，司馬楊虎，陳息林，戴璇穎.2004.家蠶卵溫湯處理酯酶A?的活性變化[J].蠶業(yè)科學，30（1）：50-54.[XuSQ，Sima YH，Chen XL，DaiXY.2004.Changes of esterase A?-activity in hot water treated eggs of silkworm，Bombyx mori[J].Acta Sericologica Sinica，30（1）：50-54.]doi：10.3969/j.issn.0257-4799.200401.011.

許瑾，蔣濤，薛鵬，沈廣勝，黃靜怡，朱娟，王梅仙，唐順明，沈興家.2020.二化性家蠶滯育、非滯育和即時浸酸卵中糖代謝相關酶mRNA水平和活性的變化[J].昆蟲學報，63（12）：1431-1440.[Xu J，Jiang T，Xue P，Shen GS，Huang JY，Zhu J，Wang MX，Tang SM，Shen XJ.2020.Changes in themRNA levels and activities of carbohydrate metabolism-related enzymes in the diapause-destined，non-diapause-destined and immediately acid-treated eggs of the bivoltine silkworm（Bombyx mori）[J].Acta Entomologica Sinica，63（12）：1431-1440.]doi：10.16380/j.kcxb.2020.12.001.

許瑾，邵云華，黃靜怡，沈廣勝，朱娟，王梅仙，唐順明，沈興家.2021.家蠶己糖激酶基因進化分析及其多轉錄本在胚胎早期發(fā)育過程中的表達特性[J].南方農(nóng)業(yè)學報，52（6）：1701-1708.[Xu J，Shao YH，Huang JY，Shen GS，Zhu J，Wang MX，Tang SM，Shen XJ.2021.Phylogene-tics of hexokinase gene and expression characteristics of its multiple transcripts in the early embryonic stage of Bom-byx mori[J].Journal of Southern Agriculture，52（6）：1701-1708.]doi：10.3969/j.issn.2095-1191.2021.06.031.

楊邦杰，鄭庭杏，鄒良華，1983.二化性白繭種浸溫水孵化試驗（預報）[J].廣東蠶絲通訊，（2）：10-13.[Yang BJ，Zheng TX，ZouLH.1983.Experiment on hatching of dimophic white cocoon seeds in warm water（forecast）[J].Guang-dong Silk Newsletter，（2）：10-13.]

楊希哲，付圖強.1993.對溫湯浸種孵化法的實施標準探討[J].蠶學通訊，（3）：20-23.[Yang XZ，F(xiàn)u TQ.1993.Ex-ploration of implementation standards for warm soup soa-king and incubation method[J].Newsletter of Sericultural Science，（3）：20-23.]

葉士璟，陳家森，葉永青，孫樹峰，楊明觀，吳春泉.1996.家蠶卵電暈孵化法研究[J].蠶業(yè)科學，22（1）：26-30.[Ye SJ，Chen JS，Ye YQ，Sun SF，Yang MG，Wu CQ.1996.A study on the corona hatching method for silkworm eggs[J].Acta Sericologica Sinica，22（1）：26-30.]doi：10.13441/j.cnki.cykx.1996.01.006.

張靜宇.2020.鹽酸刺激解除家蠶胚胎滯育機理的研究[J].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學.[ZhangJ Y.2020.Study on mecha-nism of relieving diapause of silkworm embryo by hydro-chloric acid stimulation[J].Guangzhou：South China Agri-cultural University.]doi：10.27152/d.cnki.ghanu.2020.000533.

張雨麗，閉立輝，陶積陽，安春梅，韋博尤，黃玲莉，王霞，劉艷偉，張桂征.2020.電暈人工孵化兩廣二號蠶種試驗[J].廣西蠶業(yè)，57（1）：8-13.[Zhang YL，BiLH，Tao JY，An CM，Wei BY，Huang LL，Wang X，Liu YW，Zhang GZ.2020.Experiment on artificial incubation of Liangguang No.2silkworm eggs by corona[J].Guangxi Sericulture，57（1）：8-13.]doi：10.19553/j.cnki.1006-1657.2020.01.002.

Gong J，Tian S，Zhou X，Yang H，Zhu Y，Hou Y.2016.Tran-scriptional response of silkworm（Bombyx mori）eggs to O?or HCI treatment[J].International Journal of Molecular Sciences，17（12）：1838.doi：10.3390/ijms17121838.

Kitta R，Okawa S，Saito M，Mase K，Sawada H.2015.HC1treatment for preventing diapause causes Ca2+efflux in"Bombyx mori eggs[J].Zoological Science，32（2）：124-128.doi：10.2108/zs140168.

Kitta R，Yamahama Y，Yamamoto T，Mase K，Sawada H.2018.Molecular characterization and tissue distribution of mito-chondrial Ca2-dependent solute carrier protein during pre-vention of diapause by HCl treatment in the silkworm，Bombyxmori[J].Zoological Science，35（6）：487-493.doi：10.2108/zs180041.

Li B，Hu P，Zhang SZ，Toufeeq S，Wang J，Zhao K，Xu X，Xu JP，Huang SJ.2019.DNA methyltransferase BmDnmtl and BmDnmt2in silkworm（Bombyx mori）and the regula-tion of silkworm embryonic development[J].Archives of Insect Biochemistry and Physiology，100（3）：e21529.doi：10.1002/arch.21529.

Yamamoto T，Mase K，Sawada H.2013.Diapause prevention effect of Bombyx mori by dimethyl sulfoxide[J].PLoS One，8（5）：e64124.doi：10.1371/journal.pone.0064124.

Zhang YL，Huang Y，Wang PY，Li Q，Bi LH，Zhao AC，Xiang ZH，Long DP.2022.Veryearly corona treatment-mediated artificial incubation of silkwormeggs and germ-line transformation of diapause silkworm strains[J].Fron-tiers in Bioengineering and Biotechnology，10：843543.doi：10.3389/fbioe.2022.843543.

（責任編輯 蘭宗寶）