【摘要】 背景 肝細胞癌是癌癥相關(guān)死亡的主要原因，目前的防治形勢依然嚴峻，對新的肝細胞癌治療藥物進行探索研究具有科學(xué)意義。目的 通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析漢黃芩素干預(yù)肝細胞癌的作用機制，并進行體外實驗驗證。方法 在TCMSP數(shù)據(jù)庫中檢索漢黃芩素的藥物靶點，從TTD、GenCard、OMIM、DisGent數(shù)據(jù)庫中收集肝細胞癌的疾病靶點。將收集的藥物靶點和疾病靶點取交集，作為藥物干預(yù)疾病的潛在靶點。對交集靶點運用R軟件進行富集分析，使用STRING數(shù)據(jù)庫和Cytoscape軟件對交集靶點構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)和篩選核心靶點。在GIEPA數(shù)據(jù)庫對核心靶點行進一步分析。最后通過體外實驗對前期分析結(jié)果進行驗證：采用CCK-8試劑盒測定細胞活性；采用平板克隆形成實驗測定細胞增殖；采用劃痕實驗測定細胞遷移；采用Western-blotting（WB）實驗測定蛋白質(zhì)表達水平。結(jié)果 分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)漢黃芩素的吸收、分布、代謝、排泄特性符合小分子藥物成藥規(guī)則并且毒性分析結(jié)果表明無毒性。收集到漢黃芩素靶點135個，肝細胞癌靶點8 238個，兩者交集靶點113個。通過對構(gòu)建的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)篩選出的前10位的核心基因進行分析，發(fā)現(xiàn)細胞周期蛋白依賴性激酶1（CDK1）、原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src（SRC）在肝細胞癌組織中mRNA水平較正常肝組織上調(diào)（P<0.05），并且在肝細胞癌患者中高表達與不良預(yù)后相關(guān)（P<0.05）。KEGG富集分析發(fā)現(xiàn)交集基因富集在PI3K/AKT信號通路上最多，分子對接結(jié)果顯示漢黃芩素與CDK1、SRC結(jié)合構(gòu)型活力較強。CCK-8試劑盒檢測結(jié)果顯示，加入漢黃芩素75.0、150.0、300.0 μmol/L組HepG2細胞活性均低于對照組（P<0.05）；平板克隆形成實驗結(jié)果顯示，加入漢黃芩素37.5、75.0、150.0 μmol/L組HepG2細胞克隆形成數(shù)均低于對照組（P<0.05）；劃痕實驗結(jié)果表明，加入漢黃芩素37.5、75.0、150.0 μmol/L組HepG2細胞遷移率均低于對照組（P<0.05）；WB實驗結(jié)果表明，加入漢黃芩素75.0、150.0 μmol/L組PI3K、P-AKT/AKT、CDK1、SRC蛋白表達水平均低于對照組（P<0.05）。結(jié)論 漢黃芩素通過下調(diào)CDK1、SRC蛋白表達，減弱PI3K/AKT通路信號，抑制肝癌細胞增殖和遷移，誘導(dǎo)細胞凋亡，從而達到干預(yù)肝細胞癌發(fā)生和進展的目的。

【關(guān)鍵詞】 癌，肝細胞；漢黃芩素；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；體外實驗

【中圖分類號】 R 730.261 【文獻標識碼】 A DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0238

Mechanism and in Vitro Experiment of Wogonin in Treatment of Hepatocellular Carcinoma Based on Network Pharmacology

YANG Anyin1，LIU Hongli2，CHEN Miaoyang1，ZHENG Yufeng1，XU Zhiyuan3，YANG Yongfeng1*

1.Department of Liver Disease，the Second Hospital of Nanjing/Nanjing Hospital Affiliated to Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210000，China

2.School of Medicine，Southeast University，Nanjing 210000，China

3.School of Public Health，Nanjing Medical University，Nanjing 210000，China

*Corresponding author：YANG Yongfeng，Chief physician/Doctoral supervisor；E-mail：yyf1997@163.com

【Abstract】 Background Hepatocellular carcinoma（HCC） is the leading cause of cancer-related deaths. The current prevention and treatment situation remains critical. It is of scientific significance to explore new therapeutic agents for HCC. Objective To analyze the mechanism of wogonin on HCC by network pharmacology and to verify it in vitro. Methods The drug targets of wogonin were searched in TCMSP database，and the disease targets of HCC were collected from TTD，GenCard，OMIM，DisGent databases. The collected drug targets and disease targets were intersected as potential targets for drug intervention in diseases. R software was used for enrichment analysis of intersection targets，STRING database and Cytoscape software were used to construct protein interaction network and screen core targets. The core targets were further analyzed in GIEPA database. Finally，the preliminary analysis results were verified by in vitro experiments，including cell activity determination using CCK-8 kit，cell proliferation determination using plate clone formation experiment，cell migration determination using scoring test，protein expression level determination using Western-blotting（WB） assay. Results The AMDE characteristics of wogonin were found to be in accordance with the rules for small molecule drug formation and the toxicity analysis showed no toxicity. A total of 135 wogonin targets and 8 238 HCC targets were collected，and 113 targets were intersected. Through the analysis of the core genes of TOP10 screened by the constructed protein interaction network，it was found that the mRNA levels of CDK1 and SRC in liver cancer tissues were higher than those in normal liver tissues（P<0.05），and the high expression levels in liver cancer patients were related to poor prognosis（P<0.05）. KEGG enrichment analysis showed that the intersection genes were enriched in the PI3K/AKT signaling pathway，and the molecular docking results showed that wogonin had strong binding configuration activity with CDK1 and SRC. The results of CCK-8 kit showed that the activity of HepG2 cells in the 75.0，150.0，and 300.0 μmol/L wogonin groups was lower than that in the control group（P<0.05）. The results of plate clone formation experiment showed that the number of colony formation of HepG2 cells in the 37.5，75.0，150.0 μmol/L wogonin groups was lower than that in the control group（P<0.05）. The results of scoring test showed that the migration rate of HepG2 cells in the 37.5，75.0 and 150.0 μmol/L wogonin groups was lower than that in the control group （P<0.05）. The results of the WB assay showed that the expression levels of PI3K，P-AKT/AKT，CDK1 and SRC proteins in the 75.0 and 150.0 μmol/L wogonin groups were lower than those in the control group（P<0.05）. Conclusion Wogonin inhibits the proliferation and migration of HCC cells and induces apoptosis by down-regulating the expression of CDK1 and SRC proteins and attenuating the PI3K/AKT pathway signaling，to achieve the purpose of interfering with the occurrence and progression of HCC.

【Key words】 Carcinoma，hepatocellular；Wogonin；Network pharmacology；In vitro experiments

肝細胞癌（HCC）占原發(fā)性肝癌的大多數(shù)，是世界上許多地區(qū)癌癥相關(guān)死亡的主要原因［1］。多數(shù)亞洲國家、美國和歐盟批準Sorafenib和lenvatinib為HCC的一線治療藥物［2］。在過去的20年，學(xué)者研究了HCC的臨床管理，顯著改善了治療方案，其中包括新的藥物組合。盡管已經(jīng)取得了較大進展，但HCC的總體治療結(jié)果仍不能令人滿意［3］。所以對新的HCC治療方法進行探索研究具有重要意義。

藥物治療是癌癥治療的重要方法［4-5］。在藥物研發(fā)的過程中，臨床前研究的先導(dǎo)化合物篩選起著至關(guān)重要的作用［6-7］。藥用植物能產(chǎn)生許多具有藥理活性的代謝產(chǎn)物，是藥物研發(fā)中先導(dǎo)化合物的重要資源［8］。但是傳統(tǒng)的先導(dǎo)化合物篩選方法周期長，工作量大并且價格昂貴［9-10］，網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的發(fā)展，為從藥用植物的有效成分中篩選先導(dǎo)化合物開辟了新的途徑［11］。

漢黃芩素（wogonin）是一種黃酮類天然化合物，是黃芩屬植物的主要活性成分［12］。既往研究表明漢黃芩素具有良好的抗腫瘤活性［13］。本研究旨在通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法分析漢黃芩素治療HCC的作用機制，并通過體外實驗進行驗證，期望為HCC新的治療選擇進行探索。

1 材料與方法

1.1 漢黃芩素AMDE及毒性預(yù)測

在Pubchem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）中收集漢黃芩素的SMILES式，將檢索到的SMILES分別導(dǎo)入SWISS AMDE在線服務(wù)網(wǎng)站（http：//www.swissadme.ch/）分析漢黃芩素的吸收、分布、代謝、排泄（AMDE）特性及生物利用度。導(dǎo)入ProTox-Ⅱ-Prediction of TOXicity of Chemicals在線服務(wù)網(wǎng)站（https：//tox-new.charite.de/protox_II/index.php？site=compound_input）預(yù)測漢黃芩素的肝毒性、致癌性、致突變性、免疫毒性、細胞毒性。

1.2 漢黃芩素及HCC靶點收集

在TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：//tcmsp-e.com/tcmsp.php）中檢索“wogonin”，收集漢黃芩素藥物靶點。以關(guān)鍵詞“hepatocellular carcinoma”在TTD（https：//db.idrblab.net/ttd/）、GenCards（https：//www.genecards.org/）、OMIM（https：//www.omim.org/）、DisGnet（https：//www.disgenet.org/）數(shù)據(jù)庫中檢索并收集HCC疾病靶點。將藥物靶點與疾病靶點取交集，獲得藥物干預(yù)疾病的潛在靶點。

1.3 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和核心靶點篩選

將藥物干預(yù)疾病潛在靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫（https：//cn.string-db.org/），選擇物種為“Homo sapiens”，設(shè)置required score為“highest confidence（0.900）”構(gòu)建蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。將蛋白互作網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape 3.9.0軟件（隱藏連接度為0的節(jié)點），并使用“Cytohubba”插件篩選出前10位的基因，然后使用GIEPA數(shù)據(jù)庫（http：//gepia2.cancer-pku.cn/#index）分析核心基因在HCC組織和正常肝組織中mRNA表達水平（|logFC|>1和P<0.05表示基因有顯著差異）以及核心基因與HCC患者生存預(yù)后的關(guān)聯(lián)（Log-rank P<0.05視為有統(tǒng)計學(xué)差異）。

1.4 GO和KEGG富集分析

在R軟件中使用“clusterProfiler”包進行GO和KEGG富集分析，P<0.01視為具有顯著性。利用“ggplot2”包對分析結(jié)果進行可視化。

1.5 分子對接

在PDB數(shù)據(jù)庫（https：//www.rcsb.org/）中下載核心基因的蛋白三維結(jié)構(gòu)，并在Pymol軟件中完成移除水分子和小分子配體。在Pubchem數(shù)據(jù)庫中下載漢黃芩素的化合物3D結(jié)構(gòu)，使用Chem3D軟件將能量最小化。最后使用Autodock vina進行分子對接并在pymol中將對接結(jié)果可視化。

1.6 細胞培養(yǎng)

人肝癌細胞株HepG2（中喬新舟）和人正常細胞株LO2（中喬新舟）完全培養(yǎng)基條件為MEM（含NEAA）培養(yǎng)基90%+胎牛血清（FBS）10%。培養(yǎng)條件為5% CO2、37 ℃。

1.7 CCK-8試劑盒測定細胞活性

將細胞按1×104個/孔接種于96細胞培養(yǎng)板中，在5% CO2、37 ℃培養(yǎng)條件下過夜。移除培養(yǎng)基，每孔加入100 μL磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌，重復(fù)2次。每孔加入200 μL含漢黃芩素濃度分別為0、18.5、37.5、75.0、150.0、300.0 μmol/L的完全培養(yǎng)基，分別處理24、48、72 h。移除培養(yǎng)基，每孔加入100 μL PBS洗滌2次。將CCK-8試劑（普諾恩）按10%溶解于完全培養(yǎng)基中，每孔加入100 μL。在5% CO2、37 ℃

條件下孵育2 h。在酶標儀450 nm波長下檢測吸光度（OD值）。

1.8 平板克隆形成實驗

HepG2細胞按500個/孔接種于6孔細胞培養(yǎng)板中，5% CO2、37 ℃條件下孵育過夜。移除培養(yǎng)基，加入2 mL PBS洗滌2次。加入含漢黃芩素濃度分別為0、37.5、75.0、150.0 μmol/L的完全培養(yǎng)基，孵育48 h后，移除培養(yǎng)基，加入2 mL PBS洗滌2次。加入完全培養(yǎng)基，3 d換液1次，連續(xù)培養(yǎng)14 d。移除培養(yǎng)基，加入2 mL PBS洗滌2次，加入多聚甲醛固定25～30 min，使用結(jié)晶紫染色，拍照。

1.9 劃痕實驗

HepG2細胞按5×105個/孔接種于6孔板中，培養(yǎng)至細胞完全融合后，使用無菌100 μL移液器槍頭劃傷層細胞，加入2 mL PBS洗滌2次，加入含漢黃芩素濃度分別為0、37.5、75.0、150.0 μmol/L的無血清培養(yǎng)基，分別在0 h和48 h對劃痕進行拍照，使用Image J軟件進行分析。細胞遷移率為劃痕恢復(fù)距離相對于原始距離。

1.10 細胞凋亡

HepG2細胞按2×105個/孔接種于24孔板中，加入含漢黃芩素濃度分別為0、37.5、75.0、150.0 μmol/L

的完全培養(yǎng)基進行處理24 h，使用Annexin V-FITC試劑盒檢測細胞凋亡。在熒光顯微鏡下對加入Annexin V-FITC試劑的細胞進行拍照，綠色熒光信號越強，代表細胞凋亡越多。

1.11 蛋白質(zhì)免疫印跡

加入含漢黃芩素濃度分別為0、37.5、75.0、150.0 μmol/L的完全培養(yǎng)基處理HepG2細胞48 h。使用含蛋白酶抑制劑的RIPA裂解液分離總蛋白，BCA蛋白檢測試劑盒檢測蛋白濃度。10% SDS-PAGE分離后轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。5%脫脂牛奶室溫封閉2 h，然后，將膜與一抗4 ℃孵育過夜。再次與IgG偶聯(lián)二抗在室溫下孵育2 h。最后，用ELC檢測蛋白條帶。

1.12 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)以（x-±s）表示（所有實驗重復(fù)3次）。采用GraphPad Prism軟件進行分析和作圖。多組間比較采用單因素方差分析（ ANOVA ）。兩組間比較采用成組t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 漢黃芩素AMDE及毒性預(yù)測結(jié)果

SWISS AMDE和ProTox-Ⅱ-Prediction of TOXicity of Chemicals在線服務(wù)網(wǎng)站對漢黃芩素分析結(jié)果顯示，分子式：C16H12O5，分子量（MW）：284.26，可旋轉(zhuǎn)鍵：2，氫鍵受體：5，氫鍵供體：2，脂水分配系數(shù)：0.77，生物利用度較高。肝毒性、致癌性、致突變性、免疫毒性、細胞毒性均為無活性的。

2.2 漢黃芩素及HCC靶點

在TCMSP數(shù)據(jù)庫中收集到漢黃芩素靶點135個，在TTD、GeneCards、OMIM、DisGenet數(shù)據(jù)庫中收集到HCC靶點8 238個。將化合物與疾病交集靶點113個作為漢黃芩素干預(yù)HCC的潛在靶點。

2.3 漢黃芩素干預(yù)HCC潛在靶點蛋白互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建及核心靶點篩選

將化合物與疾病交集靶點導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫，得到92個節(jié)點（隱藏連接度為0的節(jié)點），265條邊的蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（圖1）。使用Cytoscape軟件中的“Cytohubba”插件的“MCC”算法獲得前10位的核心靶點，分別為原癌基因酪氨酸蛋白激酶Src（SRC）、熱休克蛋白HSP90-α（HSP90AA1）、細胞腫瘤抗原p53（TP53）、細胞周期蛋白依賴性激酶1 （CDK1）、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶（AKT1）、G1/S-特異性周期蛋白-D1（CCND1）、轉(zhuǎn)錄因子Jun（JUN）、RELA原癌基因（RELA）、一氧化氮合酶（NOS2）及細胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑1（CDKN1A）（圖2）。在GEIPA數(shù)據(jù)中基于TCGA數(shù)據(jù)庫中的數(shù)據(jù)對核心基因在HCC患者及正常肝組織中mRNA表達水平（圖3）進行分析發(fā)現(xiàn)：CDK1和SRC在HCC組織中表達水平高于正常肝組織（P<0.05）。CDK1、HSP90AA1、RELA、SRC、JUN在HCC患者中高表達與不良預(yù)后相關(guān)（P<0.05）（圖4）。

2.4 GO和KEGG富集分析

GO富集（圖5A）分析顯示，交集基因主要富集的生物學(xué)過程（BP）有抗氧化反應(yīng)（response to oxidative stress），細胞對化學(xué)應(yīng)激的響應(yīng)（cellular response to chemical stress），對輻射的響應(yīng)（response to radiation）等，富集的細胞組分（CC）有膜筏（membrane raft），膜微結(jié)構(gòu)域（membrane microdomain）等，分子功能主要富集在蛋白質(zhì)絲氨酸/蘇氨酸激酶活性（protein serine/threonine kinase activity）、跨膜受體蛋白酪氨酸激酶活性（transmembrane receptor protein tyrosine kinase activity）、膽酸結(jié)合作用（bile acid binding）等。KEGG通路富集（圖5B）分析中交集基因主要富集的通路有PI3K/AKT信號通路（PI3K-Akt signaling pathway）、p53信號通路（p53 signaling pathway）、白介素（IL）-17信號通路（IL-17 signaling pathway）等。

2.5 分子對接

將核心靶點CDK1和SRC的三維蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與漢黃芩素化合物三維結(jié)構(gòu)使用Autodock vina進行分子對接，結(jié)果顯示CDK1、SRC與漢黃芩素的結(jié)合能均低于-7 kcal/mol，證明蛋白質(zhì)與化合物結(jié)合構(gòu)型活性較強（圖6）。

2.6 漢黃芩素抑制HCC細胞增殖

使用CCK-8試劑盒檢測漢黃芩素對HCC細胞增殖影響發(fā)現(xiàn)，24、48、72 h時，各組HepG2細胞活性比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。在相同濃度和時間梯度下，HepG2細胞活性低于LO2細胞活性，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表2～4。平板克隆形成實驗結(jié)果顯示，各組HepG2細胞克隆形成數(shù)比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖7、表5。

2.7 漢黃芩素抑制HCC細胞遷移和誘導(dǎo)HCC細胞凋亡

劃痕實驗結(jié)果表明，各組HepG2細胞遷移率比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見圖8、表5。HepG2細胞在一定濃度的漢黃芩素的處理后，使用Annexin V-FITC試劑盒在熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，隨著漢黃芩素的濃度升高，綠色熒光信號增強，說明細胞凋亡數(shù)量增加（圖9）。

2.8 漢黃芩素抑制核心靶點CDK1、SRC表達和減弱PI3K/AKT信號通路

Western-blotting（WB）實驗結(jié)果表明，一定濃度范圍內(nèi)，漢黃芩素能夠下調(diào)核心靶點CDK1和SRC的表達水平。PI3K、P-AKT蛋白表達下調(diào)，總AKT蛋白表達無影響，表明漢黃芩素能夠減弱PI3K/AKT信號通路（圖10，表6）。

3 討論

漢黃芩素的AMDE特性經(jīng)過分析，符合小分子化合物類藥規(guī)則-利平斯基五規(guī)則［14］。并且毒性預(yù)測結(jié)果顯示無肝毒性、致癌性、致突變性、細胞毒性、免疫毒性，具有開發(fā)為藥物的潛力。通過對漢黃芩素干預(yù)HCC的前10位的核心靶點進行分析后，既往研究表明，AKT1缺失能夠阻止小鼠腫瘤的形成［15］。CCND1沉默能夠抑制HCC干細胞的分化［16-17］。TP53突變導(dǎo)致免疫應(yīng)答下調(diào)與HCC預(yù)后相關(guān)［18-20］。通過沉默CDKN1A能夠促進HCC的增殖和遷移［21-22］。CDK1在HCC中高表達并且與不良預(yù)后相關(guān)，下調(diào)CDK1的表達，能夠抑制HCC細胞的增殖、遷移和誘導(dǎo)凋亡［23-25］。SRC高表達促進HCC的進展，抑制SRC的表達，HCC細胞的增殖受到明顯的抑制［26-28］。KEGG富集分析結(jié)果中，IL-17信號通路能促進HCC的進展，通過影響IL-17信號通路能抑制HCC細胞的增殖［29-30］。通過靶向p53信號通路能夠調(diào)控HCC的發(fā)生和進展［31-32］。PI3K/AKT信號通路與細胞的增殖、遷移、凋亡等方面相關(guān)，在癌癥中被異常激活，與腫瘤的發(fā)生和進展有關(guān)，靶向PI3K/AKT信號通路是癌癥治療的有效策略［33-34］。在網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析中發(fā)現(xiàn)CDK1、SRC兩個核心靶點的mRNA表達水平在HCC組織顯著高于正常肝組織，并且在HCC患者中，CDK1、SRC的高表達與不良生存預(yù)后相關(guān)。PI3K/AKT信號通路富集到的基因數(shù)量最多。

體外實驗證明，一定濃度范圍內(nèi)的漢黃芩素能夠抑制人肝癌細胞株HepG2的增殖能力，并且在一定濃度范圍內(nèi)對人正常肝細胞株LO2的增殖抑制能力小于癌細胞，說明漢黃芩素對HCC細胞的抑制能力具有特異性。劃痕實驗和凋亡實驗表明，漢黃芩素能夠抑制HCC細胞的遷移和誘導(dǎo)HCC細胞凋亡。通過WB實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，漢黃芩素處理HepG2細胞后，核心靶點CDK1、SRC的表達量降低，PI3K/AKT信號通路信號減弱。

結(jié)合體外實驗和既往文獻研究，漢黃芩素可能為通過抑制核心基因CDK1、SRC的表達和減弱PI3K/AKT通路信號，然后抑制HCC細胞增殖、遷移和誘導(dǎo)細胞凋亡，達到干預(yù)HCC發(fā)生和進展的目的。結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析以及體外實驗結(jié)果，證明漢黃芩素是一個具有潛力開發(fā)為HCC治療藥物的天然化合物，本研究對漢黃芩素治療HCC的作用機制進行了初步探索，為漢黃芩素的后期開發(fā)利用提供了一定的參考。

局限性：本研究僅對在mRNA表達水平在HCC組織與正常肝組織有顯著差異并且與不良生存預(yù)后相關(guān)的核心基因進行體外實驗驗證，未對其他核心基因進行深入研究分析。由于實驗條件的限制，未能進行體外實驗進一步研究漢黃芩素對HCC發(fā)生和進展的干預(yù)作用。

作者貢獻：楊永峰提出研究思路，制定總體研究目標；楊安銀、劉紅麗進行數(shù)據(jù)分析，實驗操作以及文章撰寫；陳妙洋、鄭玉鳳、徐志遠進行相關(guān)文獻和資料收集。

本文無利益沖突。

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（收稿日期：2023-04-04；修回日期：2023-08-19）

（本文編輯：賈萌萌）

基金項目：國家自然科學(xué)基金面上項目（81970454）

引用本文：楊安銀，劉紅麗，陳妙洋，等. 基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探析漢黃芩素治療肝細胞癌作用機制和體外實驗研究［J］. 中國全科醫(yī)學(xué)，2024，27（32）：4040-4049. DOI：10.12114/j.issn.1007-9572.2023.0238. ［www.chinagp.net］

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? Editorial Office of Chinese General Practice. This is an open access article under the CC BY-NC-ND 4.0 license.