董捷 唐柳生 楊小兵 黃麗玲

[摘要]?目的?評價ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀在痰涂片查找抗酸桿菌的閱片效果。方法?收集2023年5月于廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院就診患者的合格痰標(biāo)本203份，分別采用萋-尼染色法和熒光染色法進行染色，通過人工鏡檢和ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀進行抗酸桿菌檢測，以分枝桿菌液體培養(yǎng)為標(biāo)準(zhǔn)，計算不同方法查找抗酸桿菌的敏感度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。結(jié)果?熒光染色人工閱片和儀器智能閱片的陽性率分別為12.3%和18.7%，萋-尼染色人工閱片和儀器智能閱片的陽性率分別為13.3%和17.7%，4種閱片檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。以分枝桿菌液體培養(yǎng)結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，熒光染色人工閱片和儀器智能閱片、萋-尼染色人工閱片和儀器智能閱片檢測抗酸桿菌的敏感度分別為40.0%、45.0%、45.0%和53.3%，特異性分別為99.3%、92.3%、100.0%和97.2%，陽性預(yù)測值分別為96.0%、71.0%、100.0%和88.9%，陰性預(yù)測值分別為79.8%、80.0%、81.2%和83.2%，一致性均較好。結(jié)論?兩種染色方法應(yīng)用ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀檢測抗酸桿菌的性能較好，值得推廣應(yīng)用。

[關(guān)鍵詞]?顯微掃描儀；抗酸桿菌；敏感度；特異性；一致性

[中圖分類號]?R446??????[文獻標(biāo)識碼]?A??????[DOI]?10.3969/j.issn.1673-9701.2024.16.007

Evaluation?of?ZOPOMED-60?mycobacterium?tuberculosis?microscanner?for?detecting?acid-fast?bacilli?in?sputum?smears

DONG?Jie1，?TANG?Liusheng1，?YANG?Xiaobing1，?HUANG?Liling2

1.Medical?Laboratory，?Chest?Hospital?of?Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region，?Liuzhou?545005，?Guangxi，?China;?2.Department?of?Science?and?Education，?Chest?Hospital?of?Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region，?Liuzhou?545005，?Guangxi，?China

[Abstract]?Objective?To?evaluate?the?effect?of?ZOPOMED-60?mycobacterium?tuberculosis?microscanner?on?detecting?acid-fast?bacilli?in?sputum?smears.?Methods?A?total?of?203?qualified?sputum?specimens?from?patients?treated?in?Chest?Hospital?of?Guangxi?Zhuang?Autonomous?Region?in?May?2023?were?collected.?The?samples?were?stained?by?using?Ziehl-Neelsen?staining?and?fluorecent?staining，?respectively，?and?the?acid-fast?bacillus?was?detected?by?the?manual?microscopy?and?ZOPOMED-60?mycobacterium?tuberculosis?microscanner.?The?sensitivity，?specificity，?positive?predictive?value?and?negative?predictive?value?of?acid-fast?bacillus?were?calculated?using?different?methods?based?on?liquid?culture?of?mycobacterium.?Results?The?positive?rates?of?manual?reading?and?instrument?intelligent?reading?of?fluorecent?staining?were?12.3%?and?18.7%，?respectively，?and?the?positive?rates?of?manual?reading?and?instrument?intelligent?reading?of?Ziehl-Neelsen?staining?were?13.3%?and?17.7%，?respectively.?There?was?no?significant?difference?between?the?four?reading?results?（P>0.05）.?Based?on?the?results?of?liquid?culture?of?mycobacterium，?sensitivity?of?manual?reading?and?instrument?intelligent?reading?of?fluorecent?staining?and?manual?reading?and?instrument?intelligent?reading?of?Ziehl-Neelsen?staining?were?40.0%，?45.0%，?45.0%?and?53.3%，?specificity?were?99.3%，?92.3%，?100.0%?and?97.2%，?positive?predictive?values?were?96.0%，?71.0%，?100.0%?and?88.9%，?and?negative?predictive?values?were?79.8%，?80.0%，?81.2%?and?83.2%，?respectively.?The?consistency?was?good.?Conclusion?The?performance?of?ZOPOMED–60?mycobacterium?tuberculosis?microscanner?in?the?detection?of?acid-fast?bacilli?by?two?staining?methods?is?good，?and?it?is?worth?popularizing.

[Key?words]?Microscanner;?Acid-fast?bacilli;?Sensitivity;?Specificity;?Consistency

結(jié)核病是由結(jié)核桿菌引起的一類慢性傳染病，抗酸桿菌檢測是診斷結(jié)核病的重要手段，其中抗酸桿菌涂片是最簡單易行的一種方法[1-7]。但傳統(tǒng)的閱片方法陽性率低，實驗室人員容易疲勞從而造成漏檢。本研究納入203份痰標(biāo)本，采用萋-尼染色法和熒光染色法進行染色，通過人工鏡檢和ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀進行閱片，對ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀的應(yīng)用效果進行評價。

1??材料與方法

1.1??標(biāo)本來源

收集2023年5月于廣西壯族自治區(qū)胸科醫(yī)院就診患者的合格痰標(biāo)本203份作為研究對象，標(biāo)本量2～3ml。

1.2??儀器與試劑

ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀購自鄭州中普公司，BS1000全自動分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測儀、液體培養(yǎng)管、樣本稀釋液、痰消化液、熒光染液和萋-尼染液均購自珠海貝索公司，CX-40顯微鏡購自浙江舜宇公司。

1.3??方法

1.3.1??痰涂片查找抗酸桿菌??患者晨起后清水漱口，立即從下呼吸道咳出第一口痰，吐在無菌塑料痰盒中，及時送檢。小心打開痰標(biāo)本容器，挑取標(biāo)本的膿樣、干酪樣或可疑部分0.05～0.10ml，在玻片正面的右側(cè)2/3中央處均勻涂抹成1.0cm×2.0cm大小的卵圓形痰膜，同樣方法制片兩張，待自然干燥后，分別用萋-尼染液和金胺“O”染液進行染色，通過人工鏡檢和ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀進行抗酸桿菌檢測。人工鏡檢的熒光染色法結(jié)果分級報告標(biāo)準(zhǔn)：抗酸桿菌陰性（–）：0條/50視野；抗酸桿菌陽性（報告抗酸桿菌數(shù)）：1～9條/50視野；抗酸桿菌陽性（+）：10～49條/50視野；抗酸桿菌陽性（++）：1～9條/視野；抗酸桿菌陽性（+++）：10～99條/視野；抗酸桿菌陽性（++++）：≥100條/視野。人工鏡檢的萋-尼染色法結(jié)果分級報告標(biāo)準(zhǔn)：抗酸桿菌陰性（–）：連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌；抗酸桿菌陽性（報告抗酸桿菌數(shù)）：1～6條/300視野；抗酸桿菌陽性（+）：3～9條/100視野；抗酸桿菌陽性（++）：1～9條/10視野；抗酸桿菌陽性（+++）：1～9條/視野；抗酸桿菌陽性（++++）：≥10條/視野。ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀可自動報告陰性、高度懷疑（熒光<5條/50視野，萋-尼<5條/300視野）、陽性（+）（熒光10～49條/50視野，萋-尼3～9條／100視野）、陽性（++）（熒光1～9條/視野，萋-尼1～9條／10視野）、陽性（+++）（熒光10～99條/視野，萋-尼1～9條／視野）及陽性（++++）（熒光≥100條/視野，萋-尼≥10條／視野）結(jié)果。

1.3.2??分枝桿菌液體培養(yǎng)??無菌吸管取2～5ml痰液至50ml無菌離心管內(nèi)，根據(jù)樣本的黏稠度和污染度，加入1～2倍的痰消化液，渦旋振蕩20s至樣本均化，上下顛倒5次使溶液接觸整個離心管內(nèi)表面，靜置15min去污染。靜置去污染的間隙，每支分枝桿菌培養(yǎng)管中加入0.8ml添加劑復(fù)溶物。去污染完成后，加入磷酸鹽緩沖液至總體積45ml，蓋緊蓋子，顛倒混勻。將離心管放入帶蓋的安全離心杯中，消毒外表面，移出安全柜，在冷凍離心機中以3000g，4℃離心15～20min。離心完成后，上清液倒入含消毒劑的防濺廢液瓶內(nèi)，以沾有消毒劑的紗布消毒離心管管口，再蓋上試管蓋。加入1～2ml無菌磷酸鹽緩沖液，將沉淀輕微混合成懸液，取0.5ml接種至培養(yǎng)管。接種后的培養(yǎng)管掃碼放入全自動分枝桿菌培養(yǎng)監(jiān)測儀進行培養(yǎng)，儀器自動報告檢測結(jié)果，報告陽性的培養(yǎng)管用萋-尼染色法進行抗酸桿菌確定。

1.4??統(tǒng)計學(xué)方法

采用Excel?2010建立數(shù)據(jù)庫，SPSS?13.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。以液體培養(yǎng)法為金標(biāo)準(zhǔn)，計算不同方法查找抗酸桿菌的敏感度、特異性、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值。不同方法檢測結(jié)果的一致性用Kappa檢驗判別（Kappa<0.4為一致性較差，0.4≤Kappa<0.75為具有較好一致性，Kappa≥0.75為高度一致性）。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2??結(jié)果

2.1??熒光染色兩種閱片結(jié)果比較

人工閱片陽性25例（其中2例陽性1條、2例陽性2條、5例陽性5條、1例陽性6條、5例陽性（+）、2例陽性（++）、5例陽性（+++）、3例陽性（++++），陽性率為12.3%（25/203）；ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀智能閱片陽性38例，其中9例陽性（+）、4例陽性（++）、6例陽性（+++）、2例陽性（++++）、高度懷疑17例，陽性率為18.7%（38/203），二者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=2.71，P=0.08），兩種閱片結(jié)果一致率為92.6%（188/203），見表1。

2.2??萋-尼染色兩種閱片結(jié)果比較

人工閱片陽性27例，其中2例陽性1條、3例陽性2條、1例陽性3條、1例陽性5條、10例陽性（+）、3例陽性（++）、5例陽性（+++）、2例陽性（++++），陽性率為13.3%（27/203）；ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀智能閱片陽性36例，其中8例陽性（+）、4例陽性（++）、4例陽性（+++）、3例陽性（++++）、高度懷疑17例，陽性率為17.7%（36/203），二者比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=1.20，P=0.18），兩種閱片結(jié)果一致率為93.6%（190/203），見表2。

2.3??兩種染色方法人工閱片結(jié)果比較

萋-尼染色法與熒光染色法的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.02，P=0.45），兩種染色方法檢測抗酸桿菌結(jié)果的一致率為95.1%（193/203），見表3。

2.4??兩種染色方法儀器智能閱片結(jié)果比較

萋-尼染色法與熒光染色法的陽性率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=0.02，P=0.47），兩種染色方法檢測抗酸桿菌結(jié)果的一致率為85.2%（173/203），見表4。

2.5??不同染色查找抗酸桿菌與液體培養(yǎng)法檢測抗酸桿菌的比較

203份標(biāo)本經(jīng)液體培養(yǎng)，陽性60例，陽性率為29.6%。以液體培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)，4種閱片方法查找抗酸桿菌與液體培養(yǎng)法檢測抗酸桿菌均具有較好的一致性，見表5。

3??討論

目前，結(jié)核病仍是嚴重危害人類健康的主要傳染病之一，是全球關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會問題。中國的結(jié)核病負擔(dān)較重，亟需一種快速又簡單易行的病原學(xué)方法診斷結(jié)核病。傳統(tǒng)的抗酸桿菌涂片雖簡單易行但較費時，按照每天一名鏡檢人員涂片閱讀量不應(yīng)超過25張的規(guī)定，遠不能滿足臨床需求。近年來有學(xué)者報道智能閱片檢測抗酸桿菌的陽性率高于人工閱片[8]。本研究采用萋-尼染色法和熒光染色法進行染色，通過人工鏡檢和ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀進行閱片，結(jié)果顯示兩種染色方法ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀的閱片陽性率均高于人工閱片，但比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。李強等[9]研究也顯示掃描儀陽性率略高于人工鏡檢，體現(xiàn)智能閱片的優(yōu)勢。本研究顯示兩種方法染色后無論人工閱片還是ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀閱片，抗酸桿菌檢測結(jié)果差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。趙慧等[10]報道熒光染色的敏感度（57.58%）高于萋-尼染色（41.67%），可能是ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀與其他設(shè)備在性能上存在差異，情況是否屬實仍有待進一步研究。通常情況下萋-尼染色法使用熱染方式進行染色，溫度較難控制而引起染色效果不佳，而熒光染色法染色無需加熱，從初染到復(fù)染操作便捷，自然干燥后即可用低倍鏡進行鏡檢，觀察50個視野即可報告陰性結(jié)果，而萋-尼染色法需要用油鏡進行鏡檢，觀察300個視野才能報告陰性結(jié)果，用人工閱片方式進行檢測比熒光染色法更易產(chǎn)生疲勞。

本研究發(fā)現(xiàn)，兩種染色方法的人工閱片陽性率均略低于ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀智能閱片，但差異均無統(tǒng)計學(xué)意義，提示ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀智能閱片可提高分枝桿菌的檢出率，萋-尼染色兩種方法閱片結(jié)果一致率和一致性均略高于熒光染色，說明熒光染色易出現(xiàn)假陽性或假陰性；唐柳生等[11]報道非結(jié)核分枝桿菌檢測采用涂片法易產(chǎn)生漏檢，可能與非結(jié)核分枝桿菌的形態(tài)不典型有關(guān)。

本研究以液體培養(yǎng)法為標(biāo)準(zhǔn)[12]，熒光染色和萋-尼染色人工閱片的敏感度分別為40.0%和45.0%，儀器智能閱片的敏感度較高，分別為45.0%和53.3%，4種閱片結(jié)果的敏感度相差不大。王前等[13]研究也證實自動閱片技術(shù)診斷病原學(xué)陽性肺結(jié)核的敏感度高于人工閱片，可用于患者抗酸桿菌的篩查。本研究還顯示萋-尼染色人工閱片的陽性預(yù)測值和特異性均達100%，高于儀器智能閱片，說明智能閱片存在少量的假陽性，報告結(jié)果時仍需人工審核。

綜上，本研究結(jié)果證明ZOPOMED-60結(jié)核分枝桿菌顯微掃描儀可快速檢測抗酸桿菌，具有敏感度和特異性高、自動化程度高、操作簡單、便捷的特點，可替代傳統(tǒng)的人工閱片方式，值得推廣應(yīng)用。

利益沖突：所有作者均聲明不存在利益沖突。

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（收稿日期：2023–09–06）

（修回日期：2024–04–19）

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