劉錦萍　鄭曉霞　徐劍　張永萍　劉耀　繆艷燕

【摘 要】 目的：建立芍藥苷的經(jīng)皮微透析方法，探究付罐療法（FCT）在體經(jīng)皮促滲效果。方法：通過增量法和減量法對(duì)微透析探針的體外回收率和傳遞率進(jìn)行測(cè)定，并利用反向滲析法校正探針對(duì)芍藥苷的在體回收率；以SD大鼠為動(dòng)物模型，含5%氮酮處理的芍藥苷溶液作為陽(yáng)性對(duì)照組，3號(hào)罐留罐法產(chǎn)生負(fù)壓為-0.30MPa處理10min作為FCT促滲處理組，采用皮下微透析取樣技術(shù)結(jié)合HPLC法測(cè)定付罐療法對(duì)芍藥苷的經(jīng)皮藥動(dòng)學(xué)的影響。結(jié)果：增量法和減量法所測(cè)得的芍藥苷的探針體外回收率與傳遞率基本一致，藥物與滲析膜間無相互作用；芍藥苷的在體回收率為（51.71±0.75）%。FCT促滲處理組能顯著提高芍藥苷的透皮速率0.0767μg/min（空白組0.0042μg/min），降低時(shí)滯，對(duì)芍藥苷的促滲倍數(shù)（ER）為18.26；5%氮酮組促滲倍數(shù)（17.69）比FCT組低。結(jié)論：付罐對(duì)芍藥苷具有明顯的在體經(jīng)皮促滲作用，提示付罐療法可作為一種新型的經(jīng)皮給藥物理促滲技術(shù)進(jìn)行應(yīng)用。

【關(guān)鍵詞】 付罐療法；物理促滲新技術(shù)；微透析技術(shù)；在體經(jīng)皮吸收；芍藥苷；反相滲析法

【中圖分類號(hào)】R285.6 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2024）10-0039-07

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2024.10.zgmzmjyyzz202410009

Evaluation of the in Vivo Transdermal Osmotic Effect of Fus Cupping Therapy Based on Microdialysis Technique

LIU Jinping1 ZHENG Xiaoxia1 XU Jian1，2，3﹡ ZHANG Yongping1，2，3 LIU Yao1，2，3 MIAO Yanyan1，2，3

1.College of Pharmaceutical Sciences， Guizhou University of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China；

2.National Engineering Technology Research Center for Miao Medicine， Guiyang 550025， China；

3.Guizhou Engineering Research Center for Processing and Preparation of Traditional Chinese

Medicine and Ethnic Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：Objective To establish a method of percutaneous microdialysis of paeoniflorin and to explore the effect of Fus Cupping Therapy （FCT） on percutaneous permeation in vivo.Methods The in vitro recovery and transmission rate of microdialysis probe were determined by incremental method and subtractive method， and the in vivo recovery rate of paeoniflorin was corrected by reverse dialysis.SD rats were used as animal model， paeoniflorin solution treated with 5% azone as positive control group， and 10 min was treated with negative pressure as-0.30MPa in No.3 can as FCT osmotic treatment group.Subcutaneous microdialysis sampling technique combined with HPLC method was used to determine the effect of cupping therapy on the transdermal pharmacokinetics of paeoniflorin.Results The probe recovery rate and transmission rate of paeoniflorin by incremental method and subtractive method were basically consistent， and there was no interaction between dialysis membranes; the in vivo recovery of paeoniflorin was （51.71±0.75）%.The permeation rate of paeoniflorin in FCT group was significantly increased by 0.0767 μg/min （blank group 0.0042 μg/min）， and the time lag was reduced.The penetration ratio （ER） of paeoniflorin in azone group was 18.26%， which was lower than that in FCT group.Conclusion Cupping has obvious effect on transdermal penetration of paeoniflorin in vivo， which suggests that cupping therapy can be used as a new technique of transdermal drug delivery.

Key words：Cupping Therapy; New Technology of Physical Osmosis; Microdialysis; in Vivo Percutaneous Absorption; Paeoniflorin;Reverse Dialysis

白芍為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall）的干燥根，具有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、斂陰止汗、柔肝止痛、平抑肝陽(yáng)等功效［1］。研究［2］表明白芍具有鎮(zhèn)痛抗炎、調(diào)節(jié)免疫等作用，可用于治療風(fēng)濕類疾病、自身免疫性疾病、皮膚黏膜疾病等。白芍的質(zhì)量控制成分和主要藥效成分為芍藥苷，具有抗自由基損傷、抗炎等作用［3］。然而，由于芍藥苷脂溶性差不易透過生物膜，從而導(dǎo)致其口服給藥生物利用度低、半衰期短，影響藥效發(fā)揮［4］。研究［5］發(fā)現(xiàn)經(jīng)皮給藥是提高其生物利用度的有效途經(jīng)，但由于皮膚角質(zhì)層的物理屏障是其經(jīng)皮制劑研發(fā)的一大挑戰(zhàn)，為克服其屏障作用，已有物理、化學(xué)、制劑等層面的多種促滲方法應(yīng)用于經(jīng)皮給藥系統(tǒng)領(lǐng)域［6］。

拔罐療法（罐療）是一種具有悠久歷史的傳統(tǒng)外治療法，付罐療法（Fus cupping therapy，F(xiàn)CT）是由付文心教授在中國(guó)傳統(tǒng)拔罐療法的基礎(chǔ)上，經(jīng)過基礎(chǔ)研究及大量臨床試驗(yàn)研究研制的一種新型罐療方法［7-8］。通過罐療處理對(duì)人體皮膚產(chǎn)生物理、化學(xué)、生物效應(yīng)及其他刺激作用可改變皮膚表皮的角質(zhì)層結(jié)構(gòu)［9］，從而促進(jìn)一般藥物的透皮吸收率，提高療效。課題組前期研究［10-15］表明，付罐療法對(duì)不同類型的藥物成分具良好經(jīng)皮促透效果，具備發(fā)展成為一種經(jīng)皮給藥物理促滲新技術(shù)的潛力。但是，目前對(duì)付罐療法經(jīng)皮促透效果的評(píng)價(jià)主要采用離體動(dòng)物皮膚為模型進(jìn)行研究，對(duì)藥物經(jīng)皮促滲活體研究較少。由于實(shí)驗(yàn)活體動(dòng)物的體內(nèi)環(huán)境與其剝離皮膚的離體皮膚所處的客觀環(huán)境存在一定的差異［16］，如動(dòng)物的血液循環(huán)系統(tǒng)、酶系統(tǒng)等因素對(duì)藥物的經(jīng)皮通透性有一定程度的影響，常用的體外促透實(shí)驗(yàn)是否能準(zhǔn)確反映付罐療法的實(shí)際經(jīng)皮促滲效果，還有待進(jìn)一步證實(shí)。

微透析技術(shù)（microdialysis，MD）是一種新型的活體生物釆樣技術(shù)，具有實(shí)時(shí)、在體、在線且對(duì)活體動(dòng)物組織損傷小的優(yōu)點(diǎn)，可很好地檢測(cè)藥物在體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)過程、評(píng)價(jià)藥物局部生物利用度和生物等效性，目前已廣泛用于藥物的局部藥動(dòng)學(xué)、藥效學(xué)、藥動(dòng)-藥效學(xué)等研究領(lǐng)域［17］。本文擬在前期付罐療法體外經(jīng)皮促透研究基礎(chǔ)上［15］，以芍藥苷作為模型藥物，設(shè)立空白對(duì)照組、5%氮酮陽(yáng)性對(duì)照組、FCT促滲處理組，采用皮下微透析取樣技術(shù)結(jié)合HPLC法測(cè)定付罐療法對(duì)芍藥苷的經(jīng)皮藥動(dòng)學(xué)的影響，研究其在體經(jīng)皮促透特征，進(jìn)一步驗(yàn)證FCT的體外經(jīng)皮促透效果，為FCT作為其他藥物促滲方法研究奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器 Agilen1260 Infinity II高效液相色譜儀（安捷倫公司生產(chǎn)），Agilent ZoRBAX SB-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；微透析系統(tǒng)（含CMA30線性微透析探針，半透膜長(zhǎng)度為1 cm，截留相對(duì)分子質(zhì)量6000 Da；Pump11Elite四通道注射泵；MAB85接樣器）；AE240電子天平（METTLER公司生產(chǎn)）；SK8210HP型超聲波清洗儀（上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司）；付罐（貴州中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院提供）。

1.2 試藥與試劑 芍藥苷對(duì)照品（批號(hào)：110736-201438，HPLC≥96.4%，中國(guó)食品藥品檢定研究院生產(chǎn)）；芍藥苷原料藥（批號(hào)：170318，純度≥99%，成都蘭貝植化科技有限公司生產(chǎn)）；烏來糖（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)）；乙腈（進(jìn)口色譜純，Merck公司生產(chǎn)）；甲酸（CNYTechnologies）；水為屈臣氏蒸餾水；脫毛膏為自制；其余試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物 BALB/c-nu小鼠，等級(jí)SPF級(jí)，4周齡，雄性（北京華阜康生物科技股份有限公司），合格證號(hào)：SCXK（京）2014-0004。SD大鼠，SPF級(jí)［5周齡，體重（200±10）g］，雄性（重慶騰鑫生物物科技有限公司），合格證號(hào)：SCXK（軍）2012-0011。

2 方法與結(jié)果

2.1 芍藥苷微透析樣品HPLC方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZoRBAX SB-C18 （4.6 mm×150 mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈∶[KG-*3/5]0.1%磷酸水（15∶[KG-*3/5]85）；流速1 mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣體積10 μL，檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm，理論塔板數(shù)按芍藥苷計(jì)不低于2000。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及方法學(xué)考察 取空白對(duì)照液、透析液芍藥苷樣品、芍藥苷對(duì)照品，考察測(cè)定方法色譜條件的專屬性，結(jié)果顯示，在對(duì)照品出峰位置處無其他色譜峰干擾，表明灌流液不存在干擾，該分析條件可行。精密稱取芍藥苷對(duì)照品10.36 mg，用甲醇稀釋配置成濃度為175.00 μg/mL、87.50 μg/mL、43.75 μg/mL、21.88 μg/mL、10.94 μg/mL、5.47 μg/mL、2.73 μg/mL、0.68 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，考察方法線性關(guān)系，芍藥苷在0.68～175.00 μg/mL線性范圍內(nèi)良好，得回歸曲線方程為y=12.041x+34.205（R2=0.9991）。取配制濃度為高、中、低43.75 μg/mL、10.94 μg/mL、2.73 μg/mL的3個(gè)質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，室溫放置0 h、2 h、4 h，計(jì)算高中低3個(gè)質(zhì)量濃度的RSD分別為2.41%、0.42%、0.17%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品在4 h內(nèi)穩(wěn)定。取高、中、低質(zhì)量濃度為43.75 μg/mL、10.94 μg/mL、2.73 μg/mL的對(duì)照品溶液，1日內(nèi)每個(gè)質(zhì)量濃度連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)得日內(nèi)精密度分別為0.27%、0.14%、0.21%；在3日內(nèi)對(duì)同一高、中、低質(zhì)量濃度的樣品進(jìn)行連續(xù)進(jìn)樣，計(jì)算其日間精密度RSD分別為0.18%、0.40%、0.64%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.2 影響付罐療法促滲效果因素考察 FCT促滲作為一種新型物理促滲技術(shù)，不同的罐法（顫罐、刮罐、留罐）、不同罐體大小（2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)、5號(hào)）、不同的處理時(shí)間、不同罐療壓力、不同透皮介質(zhì)都會(huì)對(duì)它的促滲效果有影響。基于本課題組的前期研究［11］，本實(shí)驗(yàn)在FCT罐法的選擇上選擇留罐法（由于動(dòng)物皮膚面積的大小有限，不宜使用顫罐或者走罐）；考察芍藥苷藥液對(duì)BALB/c-nu小鼠以留罐法、3號(hào)罐體處理5 min、10 min、15 min不同時(shí)間的促滲效果影響。

2.2.1 離體皮膚預(yù)處理 將健康的BALB/c-nu小鼠飼養(yǎng)1周后，脫頸處死且小心剪下動(dòng)物的皮膚，角質(zhì)層朝下置于玻璃板上使用手術(shù)眼科剪剔除多于的脂肪組織，然后反復(fù)使用0.9%的生理鹽水清洗，直至生理鹽水不渾濁為止，再使用10%的甘油潤(rùn)濕置于-0.4℃的冰箱中保存，1周內(nèi)使用完。

2.2.2 體外透皮實(shí)驗(yàn) 精密稱取一定量的芍藥苷提取物，使用80%的丙二醇溶液制備芍藥苷飽和藥液備用。采用Franz擴(kuò)散池，將皮膚固定在供給池與接受池之間，角質(zhì)層朝上，接受池注滿37℃的接受液，平衡0.5 h后，供給池注入1 mL供給液，并用保鮮膜封口。于恒溫37.0℃、轉(zhuǎn)速300 r/min條件下進(jìn)行芍藥苷的體外透皮實(shí)驗(yàn)，間隔時(shí)間2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h時(shí)取出1 mL透皮接收液，并補(bǔ)充等體積等溫的空白接收液。取出的透皮液以14000 r/min離心10 min，過0.45μm的微孔濾膜后進(jìn)行HPLC含量測(cè)定。按公式（1）計(jì)算藥物累積透過量：

其中，Q表示單位面積累積透過量，Cn和Cｉ分別表示第n次和第i次取樣時(shí)接收液中藥物的質(zhì)量濃度，A為擴(kuò)散池面積（2.80 cm2），V為擴(kuò)散池的體積（7 mL），1為每次取樣體積1 mL，以累積透過量Q對(duì)時(shí)間t作圖，所得直線部分的斜率即為穩(wěn)態(tài)透皮速率（Jss），直線部分反向延長(zhǎng)線與X軸的交點(diǎn)即為滯后時(shí)間（Tlag ）。

2.2.3 付罐處理不同時(shí)間的促滲效果考察 付罐采用3號(hào)罐體，罐法為留罐法，產(chǎn)生的負(fù)壓為-0.3 MPa，對(duì)BALB/c-nu小鼠皮膚的處理時(shí)間分別為5 min、10 min、15 min，比較FCT不同作用時(shí)間對(duì)BALB/c-nu小鼠皮膚的促滲效果。根據(jù)表1的結(jié)果可知，F(xiàn)CT對(duì)BALB/c-nu小鼠皮膚的處理時(shí)間分別為5 min、10 min、15 min的透皮速率最好的是15 min。FCT對(duì)皮膚處理的時(shí)間越長(zhǎng)其對(duì)角質(zhì)層破壞的程度越高，滲透效果越好，但是如果負(fù)壓過大或時(shí)間過長(zhǎng)則會(huì)破壞到皮膚的真皮層影響皮膚的可恢復(fù)性，雖然FCT處理15 min的效果最佳，但是個(gè)別皮膚會(huì)出現(xiàn)皸裂，所以最終選擇10 min作為FCT處理的最佳時(shí)間。

2.3 線性探針體外回收率影響因素考察

2.3.1 灌流速度對(duì)線性探針回收率的影響

2.3.1.1 增量法測(cè)定回收率 用等滲PBS緩沖液（pH=7.3）配制濃度為5.47 μg/mL的芍藥苷溶液，將微透析線性探針浸沒其中，以300 r/min的轉(zhuǎn)速持續(xù)攪拌，恒溫37℃；用空白PBS緩沖液以0.8μL/min、1μL/min、2μL/min、3μL/min、4μL/min的流速進(jìn)行灌注，每個(gè)灌流速度收集3次樣品（收集前均平衡1 h）。利用HPLC方法測(cè)定滲析液中芍藥苷濃度，然后按公式（2）：Re=Cout/Cin×100%計(jì)算芍藥苷的相對(duì)回收率。

2.3.1.2 減量法測(cè)定回收率 將微透析線性探針置于在空白PBS緩沖液中，以300 r/min的轉(zhuǎn)速持續(xù)攪拌，恒溫37℃，用濃度為5.47 μg/mL芍藥苷的等滲PBS緩沖液（pH=7.3）以0.8μL/min、1μL/min、2μL/min、3μL/min、4μL/min流速進(jìn)行灌注，每個(gè)灌流速度收集3次樣品（收集前均平衡1 h）。利用HPLC方法測(cè)定滲析液中芍藥苷的濃度，然后按公式（3）：Re=（Cin-Cout）/Cin×100%計(jì)算芍藥苷的相對(duì)損失率，結(jié)果如圖1。結(jié)果顯示，隨著灌流速度的增大，探針的回收率降低，當(dāng)以0.8 μL/min的速度進(jìn)行灌注時(shí)，增量法與減量法測(cè)量的回收率大致相同且最高。故選擇0.8μL/min為灌流液的流速；且增量法、減量法測(cè)得的回收率在各自的流速下均無顯著性差異（P<0.05），提示可以采用反向透析法測(cè)定芍藥苷體內(nèi)回收率。

2.3.2 濃度對(duì)回收率的影響 用等滲PBS緩沖液（pH=7.3）配制成不同濃度芍藥苷（43.75 μg/mL、21.88 μg/mL、5.47 μg/mL、0.68 μg/mL）溶液，將微透析線性探針置于其中，以300 r/min的轉(zhuǎn)速持續(xù)攪拌，恒溫37℃，用空白PBS緩沖液以0.8μL/min流速進(jìn)行灌注，每個(gè)濃度收集3次樣品，利用HPLC方法測(cè)定滲析液中芍藥苷濃度，按公式（2）計(jì)算芍藥苷的相對(duì)回收率，結(jié)果見表2。由表2可知，線性探針在芍藥苷濃度為43.75～0.68 μg/mL范圍內(nèi)，所得回收率無顯著性差異（P<0.05），表明藥物質(zhì)量濃度對(duì)探針的回收率影響較小。

2.4 反向滲析法測(cè)定探針體內(nèi)回收率

2.4.1 線性探針體內(nèi)回收率校正 取健康雄性SD大鼠［5周齡，（200±10）g］，用烏拉坦（0.5 mL/100 g，腹腔注射）麻醉后固定在鼠板上，用剃毛機(jī)剃除腹部毛發(fā)，再用脫脂棉蘸8%的硫化鈉溶液清除剩余毛發(fā)。將微透析線性探針（半透膜長(zhǎng)度為10 mm）用引導(dǎo)針穿剌植入大鼠皮下后，引導(dǎo)針小心抽回，采用等滲的PBS緩沖液（pH7.3）排除微透析探針內(nèi)的氣泡。然后用43.75 μg/mL、21.88 μg/mL、5.47 μg/mL、0.68 μg/mL的不同濃度芍藥苷溶液為灌流液，以0.8μL/min的流速進(jìn)行灌注，每間隔40 min收集1次透析液，每個(gè)濃度收集3次樣品（收集樣品前均平衡系統(tǒng)1 h），利用HPLC測(cè)定透析液中芍藥苷濃度。通過減量法（公式3）計(jì)算芍藥苷的相對(duì)損失率，同時(shí)計(jì)算平均回收率為（51.71±0.75）%。結(jié)果見表3。

2.4.2 探針回收率日內(nèi)穩(wěn)定性 線性探針植入皮下平衡后，用濃度21.876 μg/mL的芍藥苷溶液為灌流液，以灌流速度為0.8μL/min，平衡1 h之后收集樣品，每間隔40 min之后收集1次透析液，利用HPLC測(cè)定透析液中芍藥苷濃度，結(jié)果如圖2。由圖2可知，芍藥苷的體內(nèi)相對(duì)回收率約為（51.71±0.75）%，在12 h內(nèi)探針回收率穩(wěn)定，可用于經(jīng)皮微透析試驗(yàn)中的藥物分析測(cè)定。

2.5 在體經(jīng)皮微透析 實(shí)驗(yàn)釆用80%丙二醇溶液，配制含20 mg/mL芍藥苷的5%氮酮溶液，只由溶劑系統(tǒng)配制的芍藥苷溶液組作為空白對(duì)照組，含5%氮酮處理的芍藥苷溶液作為陽(yáng)性對(duì)照組，以3號(hào)罐留罐法產(chǎn)生負(fù)壓-0.30MPa處理10 min作為FCT促滲處理組。如圖3。取健康雄性SD大鼠，用烏拉坦按體重麻醉后固定在鼠板上，剃毛機(jī)去除腹部毛發(fā)，再用8%的硫化鈉溶液清除剩余毛發(fā)，采用引導(dǎo)針將微透析線性探針植入大鼠皮下組織中，然后用502膠水將Franz擴(kuò)散池的供給池貼于大鼠皮膚上，并保證微透析半透膜區(qū)域位于供給池正中央。用PBS緩沖液（pH7.3）灌注10min排除微透析探針內(nèi)的氣泡，再切換為0.8μL/min的流速灌注平衡微透析系統(tǒng)1 h，隨后加入2 mL不同組別的藥物溶液（為防止藥物溶液中水分揮發(fā)供給池用封口膠封口），每40 min收集滲析液樣品1次，共收集720 min，每組重復(fù)4次。

將各組滲析液樣品利用已建立的HPLC進(jìn)行含量測(cè)定，按芍藥苷的線性回歸方程求算對(duì)應(yīng)的濃度值，根據(jù)探針對(duì)芍藥苷的體內(nèi)相對(duì)回收率Re為51.71%，求算得皮膚組織下芍藥苷的真實(shí)濃度：C0=Cdialysis/RR。根據(jù)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)內(nèi)皮膚組織下的芍藥苷濃度值和流經(jīng)探針的滲析體積（即32 μL），計(jì)算該時(shí)間點(diǎn)內(nèi)皮膚組織下的芍藥苷質(zhì)量，按公式計(jì)算720 min內(nèi)藥物累積透過量：Q=∑ni=1Ci×Vi（其中，Q為累積透過量，Ci為第i個(gè)時(shí)間點(diǎn)的透析液的藥物濃度，Vi為每次取樣體積）。以累積透過量Q對(duì)時(shí)間t作圖，所得直線部分的斜率即為穩(wěn)態(tài)透皮速率（Js），直線部分反向延長(zhǎng)線與X軸的交點(diǎn)即為滯后時(shí)間（Tlag）。促滲方法的促滲倍數(shù)（ER）按公式（4）計(jì)算：ER=Js/J0，其中Js、J0分別為促滲組和空白組藥物的穩(wěn)態(tài)滲透速率。

FCT促滲處理組、5%氮酮陽(yáng)性對(duì)照組及空白組對(duì)芍藥苷透過大鼠皮膚的在體滲透藥時(shí)曲線如圖4。不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)應(yīng)藥物累積透過量如圖5，不同促滲組作用下芍藥苷在體透皮吸收參數(shù)見表4。由圖表可知，在FCT、5%氮酮作用下對(duì)芍藥苷的在體透皮吸收均具顯著促進(jìn)作用，但FCT對(duì)芍藥苷的促滲倍數(shù)（18.26）比氮酮（17.69）高，表明其促滲效果最佳。

3 討論

由于經(jīng)皮微透析技術(shù)不適合于大量且較大極性范圍藥物的經(jīng)皮吸收實(shí)驗(yàn)研究，因此該實(shí)驗(yàn)根據(jù)課題組前期不同極性模型藥物的體外透皮試驗(yàn)選擇了極性適宜的芍藥苷為代表［10］，研究FCT對(duì)芍藥苷的在體透皮吸收情況；同時(shí)選擇外用透皮制劑中常用的促滲劑氮酮作為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)一步對(duì)比評(píng)價(jià)FCT在體經(jīng)皮促透效果。

在微透析試驗(yàn)中，探針的回收率受到探針種類、灌流液流速、灌流液的成分、溫度、pH、藥物自身的理化性質(zhì)及采樣間隔等因素的影響［18］。因此，灌流液不同流速、不同濃度等因素對(duì)探針回收率的影響本實(shí)驗(yàn)采用增量法、減量法對(duì)其進(jìn)行考察。研究結(jié)果顯示，探針回收率隨灌注速率增加而減低，當(dāng)灌流液流速較小時(shí)，通過探針半透膜時(shí)藥物與半透膜內(nèi)外組織形成一個(gè)微小的平衡，流速越大平衡易被破壞，回收率越低。當(dāng)灌流速度為0.8μL/min時(shí)增量法和減量法測(cè)得的回收率近似相等且最高，也充分驗(yàn)證了反向滲析法可用于芍藥苷的體內(nèi)回收率的校正，故選擇0.8μL/min為灌流液流速；不同濃度的藥物溶液對(duì)探針的體外回收率影響不大。由于動(dòng)物體內(nèi)的藥物濃度是一個(gè)動(dòng)態(tài)的變化過程，為準(zhǔn)確求算皮膚組織中藥物含量，必須要保證探針回收率測(cè)定的穩(wěn)定性，該實(shí)驗(yàn)釆用反向滲析法測(cè)定了芍藥苷的在體探針回收率，研究結(jié)果顯示，芍藥苷的體內(nèi)相對(duì)回收率在12 h內(nèi)穩(wěn)定，因此選用測(cè)定的平均值（51.71±0.75）%來計(jì)算體內(nèi)藥物濃度。

基于本課題組的前期研究，在FCT罐法的選擇上選擇留罐法，是由于動(dòng)物皮膚面積的大小有限，不宜使用顫罐或者走罐。付罐療法（FCT）對(duì)皮膚的促滲效果機(jī)理主要通過在皮膚和杯壁之間封閉并創(chuàng)造一個(gè)負(fù)壓空間，利用負(fù)壓吸引、熨燙皮膚，拉動(dòng)淺層肌肉、刺激經(jīng)絡(luò)、穴位，從而調(diào)節(jié)血液和陰陽(yáng)、疏通經(jīng)絡(luò)，對(duì)皮膚和皮下結(jié)構(gòu)產(chǎn)生各種刺激作用［14，19］，使皮膚角質(zhì)層遭到破壞，使藥物很好地透過皮膚角質(zhì)層阻礙到達(dá)真皮層從而發(fā)揮藥效。在罐法、罐體、FCT產(chǎn)生的負(fù)壓、動(dòng)物皮膚相同的條件下，不同的處理時(shí)間也會(huì)影響藥物的滲透效果，F(xiàn)CT對(duì)皮膚處理的時(shí)間越長(zhǎng)其對(duì)角質(zhì)層破壞的程度越高，滲透效果越好，但是如果負(fù)壓過大或時(shí)間過長(zhǎng)則會(huì)破壞到皮膚的真皮層影響皮膚的可恢復(fù)性，對(duì)3個(gè)不同處理時(shí)間來說，15 min的效果最佳，但是個(gè)別皮膚會(huì)出現(xiàn)皸裂，所以最終選擇10 min作為FCT處理的最佳時(shí)間。

研究表明，付罐療法能顯著提高鹽酸川芎嗪［10］、鹽酸維拉帕米［11］和延胡索乙素［13］等藥物的經(jīng)皮滲透，但這些付罐療法經(jīng)皮促透效果的評(píng)價(jià)主要基于離體動(dòng)物皮膚進(jìn)行研究，對(duì)藥物經(jīng)皮促滲活體研究較少，為了進(jìn)一步評(píng)價(jià)FCT對(duì)藥物的在體促透作用，實(shí)驗(yàn)以芍藥苷為模型藥物進(jìn)行了體內(nèi)透皮試驗(yàn)。結(jié)果表明，與空白對(duì)照組相比，F(xiàn)CT促滲處理組和5%氮酮陽(yáng)性對(duì)照組均能使芍藥苷的在體透過量顯著增加，但相較之下FCT對(duì)芍藥苷的促滲倍數(shù)更高；FCT促滲處理組的透皮率和皮膚滲透系數(shù)高于其他組，說明FCT對(duì)芍藥苷具良好的促透效果。同時(shí)，與前期體外透皮試驗(yàn)的經(jīng)皮促透倍數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析［15］，比較發(fā)現(xiàn)FCT對(duì)芍藥苷的體內(nèi)外促滲效果（ER）呈直線線性相關(guān)，表明FCT對(duì)藥物促透評(píng)價(jià)的離體實(shí)驗(yàn)可以大致反映動(dòng)物體內(nèi)促透效果?？梢?，拔罐治療與經(jīng)皮給藥相結(jié)合可以提高藥物的透皮速率，為經(jīng)皮滲透提供了一種新的方法和途徑，F(xiàn)CT可作為一種具有中醫(yī)藥特色的經(jīng)皮給藥物理促滲新技術(shù)應(yīng)用，具有顯著的促透作用及較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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（收稿日期：2023-08-18 編輯：陶希睿）

基金項(xiàng)目：國(guó)家苗藥工程技術(shù)研究中心能力提升（黔科合中引地［2023］006）；貴州省高等學(xué)校中藥民族藥（苗藥）新劑型新制劑工程研究中心（黔教技［2022］022）。

作者簡(jiǎn)介：劉錦萍（1998—），女，漢族，碩士研究生在讀，研究方向?yàn)橹兴幖懊褡逅幩幬镄轮苿┡c新劑型研究。E-mail： 960778533@qq.com

作者簡(jiǎn)介：徐劍（1977—），男，漢族，碩士，教授、碩士研究生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幹苿┬录夹g(shù)與新劑型。E-mail： 10423108@qq.com