陳平 何振富 謝建鵬 王斐 龐寶梅 杜海科 馬學軍

摘要：研究探討了麻杏石甘散灌服對犢牦牛呼吸道疾?。╞ovine respiratory disease，BRD）的治療效果及血清中氧化應(yīng)激指標和炎性指標的影響，為其在臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。選擇12頭表現(xiàn)BRD癥狀的犢牦牛，以0.75 g/kg劑量溫熱水沖調(diào)灌服麻杏石甘散，每天1次，連用6 d，以5頭健康犢牛正常飼喂作為空白對照，用藥前（第0天），藥后第3、6天記錄犢牦牛臨床癥狀并根據(jù)WI評分表進行打分評價，頸靜脈采血測定血清中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、溶菌酶（LYZ）、白細胞介素-6（IL-6）、乳鐵蛋白（LTF）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）等5種抗炎及抗氧化應(yīng)激指標水平。結(jié)果表明，用藥后第6天，WI評分較第3天顯著性降低（P ＜ 0.05），治愈率為83.3%。通過6 d治療，患病組犢牛血清中TNF-α、LZM、IL-6、LTF、SAA等抗炎及抗氧化指標濃度與健康組差異不顯著（P ＞ 0.05）?？梢?，在本試驗條件下，麻杏石甘散能有效改善犢牦牛BRD癥狀，緩解炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激癥狀，對治療牦牛BRD具有一定的價值，可用于高寒地區(qū)牦牛及相關(guān)草食動物呼吸道疾病治療。

關(guān)鍵詞：BRD；犢牦牛；麻杏石甘散；氧化應(yīng)激指標

中圖分類號：S858.23? ? ? ? ? ? ? 文獻標志碼：A? ? ? ? ? ? ? 文章編號：2097-2172（2024）05-0457-06

doi：10.3969/j.issn.2097-2172.2024.05.013

Effects of Oral Administration Maxingshigan Powder on

Serum Indexes of BRD Yak Calves

CHEN Ping 1， HE Zhenfu 1， XIE Jianpeng 1， WANG Fei 1， PANG Baomei 2， DU Haike 3， MA Xuejun 1

（1. Institute of Animal Husbandry， Pasture and Green Agricultural， Gansu Academy of Agricultural Sciences， Lanzhou Gansu 730070， China; 2. Animal Husbandry and Veterinary Workstation of Tanggaang Township， Xiahe County， Xiahe Gansu 747100， China;

3. Animal Disease Prevention and Control Centre of Xiahe County， Xiahe Gansu 747100， China）

Abstract： This study investigated the therapeutic effects of Maxingshigan powder on bovine respiratory disease （BRD） and its effects on serum oxidative stress indexes and inflammatory indexes， so as to provide a theoretical basis for clinical application. 12 yak calves with BRD symptoms were selected and given Maxingshigan powder at 0.75 g/kg dose in warm water once a day for 6 days， and 5 healthy calves were fed normally as the control. On the 0， 3 and 6 days of medication， the clinical symptoms of yak calves were recorded and scored according to WI scoring table， and blood was collected from jugular vein. The serum levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α）， lysozyme （LYZ）， interleukin-6 （IL-6）， lactoferrin （LTF） and serum amyloid A （SAA） were determined after centrifugation. Results showed that WI score on the 6th day after medication was significantly lower than that on the 3rd day（P < 0.05）， the cure rate was 83.3% on the 6th day after medication. After 6 days of treatment， the serum concentrations about anti-inflammatory and antioxidant indexes of TNF-α， LZM， IL-6， LTF， SAA in sick group were not significantly different from those in healthy group（P > 0.05）. In conclusion， Maxingshigan powder can effectively improve the BRD symptoms of yak calves， relieve the inflammatory response and oxidative stress symptoms， and has certain reference value for the treatment of BRD in yaks. This method is suitable for the treatment of respiratory diseases in yaks and related herbivores in alpine area.

Key words： BRD; Yak calf; Maxingshigan powder; Oxidative stress index

牛呼吸道疾?。╞ovine respiratory disease，BRD）是由細菌、病毒、支原體等多病原體混合感染引起的牛呼吸系統(tǒng)疾病，其發(fā)病率高，給肉牛養(yǎng)殖業(yè)造成了重大經(jīng)濟損失［1 ］。目前關(guān)于甘南牦牛血液原蟲與消化道線蟲感染方面有較為系統(tǒng)的調(diào)? ? 研［2 - 3 ］，但在呼吸道疾病，特別是犢牦牛在低氧環(huán)境下患呼吸道疾病方面研究較少。甘南藏族自治州地處青藏高原東部邊緣，屬高寒低氧地區(qū)，犢牦牛生長容易產(chǎn)生BRD癥狀［4 ］，如何盡快發(fā)現(xiàn)并治療高寒地區(qū)犢牦牛BRD癥狀是當前急需解決的問題。

通過中獸藥逐步替代抗生素治療、減少家畜體內(nèi)及自然環(huán)境中抗生素殘留，是目前畜牧獸醫(yī)行業(yè)中的重點工作。我們采用中獸藥替代抗生素治療犢牦牛BRD，通過觀察BRD癥狀、WI評分系統(tǒng)進行打分，分析犢牦牛血清中抗炎抗氧化相關(guān)因子含量，以期為中獸藥逐步替代抗生素治療提供一定的依據(jù)。

1? ?材料與方法

1.1? ?供試藥物與試劑

麻杏石甘散（主要成分為麻黃、苦杏仁、石膏、甘草）購自齊魯動物保健品有限公司。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、溶菌酶（LYZ）、白細胞介素-6（IL-6）、乳鐵蛋白（LTF）、血清淀粉樣蛋白A（SAA）ELISA試劑盒，均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.2? ?供試儀器設(shè)備

雷杜酶標儀分析儀（RT6100，美國），高速冷凍離心機（上海盧湘儀離心機有限公司，中國），恒溫水浴箱（上海一恒科學儀器有限公司，中國）。

1.3? ?試驗動物分組及處理

試驗于2022年8月在甘肅省甘南藏族自治州夏河縣一規(guī)?；B(yǎng)殖場進行。篩選30～90日齡12頭自然BRD癥狀（如眼角分泌物增多、流鼻液、偶爾自發(fā)咳嗽、精神沉郁）牦犢?？诜樾邮噬ⅲ? L溫熱水沖調(diào)灌服0.75 g/kg，每天1次，連用6 d。選擇5頭健康犢牛正常飼喂作為對照（CK）。

病牛入選標準：30～90日齡犢牦牛，表現(xiàn)出BRD癥狀，參照威斯康星大學研發(fā)的犢牦牛BRD評分系統(tǒng)（WI評分表見圖1）［5 ］，病牛WI評分均≥5分，未使用過其他治療藥物。健康牛入選標準：30～90日齡犢牦牛，無BRD及其他病史，且未使用過任何其他治療藥物。試驗用牛圍欄飼養(yǎng)，統(tǒng)一飼喂，自由飲水，飼養(yǎng)管理條件相同。

1.4? ?血清采集與保存

在用藥前（第0天）和用藥后第3、6天，對試驗用犢牦牛頸靜脈采血分離血清，-20 ℃保存，用于相關(guān)指標的測定。

1.5? ?測定指標

1.5.1? ? 臨床癥狀觀察評分? ? 根據(jù)《中藥新藥臨床研究指導原則》《獸用中藥、天然藥物臨床試驗技術(shù)指導原則》以及WI評分表定義和BRD犢牦牛標準并結(jié)合臨床實際情況，參考陳久兵等［6 ］的方法制定了如下療效評定標準：

治愈，WI評分 ＜ 5分；臨床顯效，WI評分≥5分，30%≤積分減少率 ＜ 95%；臨床無效，WI評分≥5分，積分減少率 ＜ 30%。

觀察患病犢牦牛，記錄試驗期間試驗牛一般臨床癥狀表現(xiàn)及癥狀的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸情況。根據(jù)WI評分表，對各個時間點試驗犢牦牛臨床癥狀進行評分。

1.5.2? ? 臨床效果判定? ? 統(tǒng)計用藥前（第0天）和用藥后第3、6天各組BRD犢牦牛治愈率、臨床顯效率、臨床無效率。

1.5.3? ? 氧化應(yīng)激指標檢測? ? 按照ELISA試劑盒說明書進行操作，檢測供試犢牦牛的血清TNF-α、LYZ、IL-6、LTF、SAA含量。

1.6? ?數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)采用 Excel 軟件進行初步整理，采用DPS 數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)（V18.10） 進行單因素方差分析，用LSD 法進行多重比較分析。試驗結(jié)果以“平均值±標準誤”表示，P ＜ 0.05表示差異顯著，P ＜ 0.01表示差異極顯著。

2? ?結(jié)果與分析

2.1? ?用藥后犢牦牛臨床癥狀

從用藥前后犢牦牛臨床癥狀評分結(jié)果（表1）可以看出，試驗前用藥組犢牛WI評分均＞5分，符合此次試驗要求。隨著用藥天數(shù)的增加麻杏石甘散組WI評分呈逐漸降低趨勢，用藥后第3天WI評分較第0天顯著降低（P ＜ 0.05），用藥第6天WI評分較第0天極顯著降低（P ＜ 0.01）。

2.2? ?用藥后犢牦牛臨床療效

由表2可得，使用麻杏石甘散后第3天，BRD犢牦牛的治愈率為25.0%；用藥后第6天BRD犢牦牛的治愈率為83.3%。

2.3? ?麻杏石甘散對 BRD犢牛血清抗炎和抗氧化指標的影響

由表3可見，用藥第0天犢牛血清中TNF-α、SAA濃度極顯著高于健康對照組（P ＜ 0.01），血清中IL-6濃度顯著高于健康對照組（P ＜ 0.05），血清中LYZ、LTF濃度極顯著低于健康對照組（P ＜ 0.01）。通過3 d治療，犢牦牛血清中TNF-α濃度較用藥第0天極顯著下降（P ＜ 0.01），IL-6、SAA濃度也較用藥第0天顯著下降（P ＜ 0.05），LYZ濃度較用藥第0天極顯著上升（P ＜ 0.01），LTF濃度與用藥第0天差異不顯著；通過6 d治療，患病組犢牦牛血清中TNF-α、LYZ、IL-6、LTF、SAA等抗炎及抗氧化指標濃度與健康對照組差異均不顯著（P > 0.05）。

3? ?討論與結(jié)論

WI評分是犢牦牛呼吸道疾病參考的重要依據(jù)。陳婭婷［5 ］對患有BRD荷斯坦奶犢牛不同用藥、不同時間段分別進行了體溫評分、咳嗽情況評分、鼻腔分泌物評分、眼部分泌物評分、耳及頭部狀態(tài)評分，隨后對各試驗組用藥前后癥狀分別比較，結(jié)果表明，麻杏石甘散處理組在用藥后第5、7天平均WI評分均為3.80分，與本試驗治療第6天后WI評分3.92分的結(jié)果接近，說明WI評分系統(tǒng)同樣適用于高寒環(huán)境犢牦牛呼吸道疾病初篩。

現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，中藥作為微生態(tài)調(diào)節(jié)劑能在一定程度上調(diào)整呼吸道菌群失調(diào)，其含有的多種藥用成分以及蛋白質(zhì)、多糖等有提高機體免疫力、抑制有害菌的作用［7 ］。麻黃、杏仁、石膏、甘草等藥物功效主要為芳香化濕、清熱解毒、清熱瀉火、宣肺平喘、發(fā)散風寒等，藥性以溫性為主［8 ］。李艷等［9 - 10 ］通過研究麻黃對尋常型銀屑病小鼠STAT3信號通路及血清干擾素-γ（IFN-γ）、白細胞介素-17（IL-17）的影響發(fā)揮其對尋常型銀屑病小鼠的治療作用。而方克勇［11 ］研究發(fā)現(xiàn)，苦杏仁苷可使小鼠肺功能增加、炎癥細胞浸潤減少、肺部病變減輕、平滑肌層明顯變薄，可有效改善肺纖維化?；诰W(wǎng)絡(luò)藥理學研究，麻黃甘草湯可通過多成分、多靶點、多通路發(fā)揮治療肺水腫的作用，其中的活性成分槲皮素、山奈酚、柚皮素、木犀草素等可能通過作用于IL6等靶點，進而對TNF、IL17等信號通路產(chǎn)生炎癥控制及免疫調(diào)節(jié)作用［12 ］。本研究發(fā)現(xiàn)，使用麻杏石甘散處理后第3天BRD犢牦牛治愈率為25.0%，用藥后第6天治愈率為83.3%，可見口服麻杏石甘散可有效治愈患BRD犢牦牛。

IL-6作為肝細胞刺激因子，在感染或外傷引起的急性炎癥反應(yīng)中誘導急性期反應(yīng)中誘導急性期反應(yīng)蛋白的合成［13 ］，IL-6、TNF-α可作為中藥治療呼吸道疾病的重要臨床指標。通過潤肺止嗽丸聯(lián)合布地奈德福莫特羅治療慢性阻塞性肺疾病緩解期，治療后IL-6、TNF-α水平均較治療前顯著降低［14 ］。武志勇等［15 ］發(fā)現(xiàn)，臨床使用清瘟解毒口服液可防止肉雞呼吸道癥狀的擴散及反復出現(xiàn)，使用后肉雞血清和肺組織中IL-6、TNF-α含量在治療不同階段都顯著低于對照組，肺組織中IL-6、TNF-α的mRNA表達量顯著降低（P ＜ 0.05）。IL-6與慢性阻塞性肺疾病患者嚴重程度及肺功能的相關(guān)性，Spearman相關(guān)性分析結(jié)果提示：IL-6與患者病情嚴重程度呈正相關(guān)性（P ＜0.05）［16 ］。本研究中，BRD犢牦牛經(jīng)過6 d治療，犢牦牛血清中IL-6含量顯著下降、TNF-α含量極顯著下降，降至健康水平，均與以上研究結(jié)果相符，表明麻杏石甘散對于犢牦牛呼吸道疾病具有良好療效。

Jang等［17 ］通過構(gòu)建草藥-化合物-靶點網(wǎng)絡(luò)，確定了草藥和組織（如支氣管上皮細胞和肺）和通路（如TNF、NF-κ B信號通路等）之間的關(guān)聯(lián)，通過抑制一氧化氮和TNF-α、IL-6等炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生發(fā)揮抗炎作用。Liang等［18 ］的研究表明，中草藥丹參中的丹參多糖通過抑制肺內(nèi)Toll樣受體3（TLR-3）和Toll樣受體4（TLR-4）、上調(diào)γ干擾素（IFN-γ）和白細胞介素2（IL-2）、下調(diào)血清TNF-α對呼吸道合胞病毒起到抑制作用。本研究證明，在用藥6 d后血清中TNF-α含量顯著下降，與健康組差異不顯著，達到85.63 pg/mL，表明麻杏石甘散具有較好的抗炎作用。

李云龍等［19 ］的研究表明，奶牛溶菌酶對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的生長均有不同程度的抑制作用，且隨著劑量的增加，抑菌效果也顯著增加，提示奶牛溶菌酶可以作為一種新型的藥物來預防和治療奶牛乳房炎。Masuda等［20 ］采用免疫組織化學方法研究了健康狀態(tài)下大鼠呼吸道LYZ的宿主防御系統(tǒng)，表明LYZ的分泌源幾乎分布于所有的呼吸道，它們的分泌產(chǎn)物很可能被轉(zhuǎn)運到咽部，并在整個呼吸道形成抵御吸入細菌的第一道防線。本研究表明，在用藥后6 d LYZ含量上升至正常水平，達到15.24 ug/mL。

LTF是一種關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)，是存在于人和牛乳中的一種糖蛋白，具有抗菌和免疫調(diào)節(jié)特性，其天然存在于各種體液中，如唾液、眼淚和母乳等［21 ］。補充LTF對炎癥、免疫功能和預防呼吸道感染具有一定作用，是抵御入侵病原體的先天防御的重要組成部分［22 ］。目前關(guān)于LTF的相關(guān)研究主要集中于外用添加LTF對機體的影響，趙天蘭等［23 ］研究發(fā)現(xiàn)，乳鐵蛋白膠囊與孟魯司特鈉聯(lián)用治療反復下呼吸道感染患兒療效確切，可有效緩解其臨床癥狀體征，減輕氣道炎癥反應(yīng)，改善細胞免疫及體液免疫狀態(tài)，安全可靠。添加LTF對重癥獲得性肺炎治療過程中效果的影響，主要表現(xiàn)為LTF可以使重癥社區(qū)獲得性肺炎患者外周血中白細胞（WBC）、中性粒細胞（NEUT）、降鈣素原（PCT）、C-反應(yīng)蛋白（CRP）單位時間內(nèi)下降速率更快，LYM及比例升高速率更快，同時血紅蛋白（Hb）、白蛋白（ALB）、PA改善更明顯，這與LTF存在一定程度抗炎、免疫調(diào)節(jié)、參與鐵代謝有關(guān)［24 ］。本試驗條件下，在使用麻杏石甘散后供試犢牦牛機體內(nèi)LTF的含量顯著提升，恢復至健康水平。通過對治療前后犢牦牛中血清抗炎、抗氧化指標檢測結(jié)果的分析認為，口服麻杏石甘散均可有效改善犢牦?？寡住⒖寡趸芰?。

綜上認為，口服麻杏石甘散能有效改善犢牦牛BRD癥狀，緩解炎性反應(yīng)及氧化應(yīng)激癥狀，對治療牦牛BRD具有一定的價值。

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收稿日期：2023 - 11 - 02；修訂日期：2024 - 01 - 18

基金項目：甘肅省科協(xié)2020年甘肅省青年科技人才托舉工程（2020-05）；甘肅省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新專項博士基金項目（2021GAAS51）；甘肅省科協(xié)2023年創(chuàng)新驅(qū)動助力工程項目（GXH20230817-9）；甘肅省科技廳2021年度“三區(qū)”人才支持計劃科技人員專項計劃。

作者簡介：陳? ?平（1988 — ），男，甘肅蘭州人，副研究員，博士，研究方向為畜牧獸醫(yī)。Email： gaaschenping@163.com。

通信作者：馬學軍（1971 — ），男，甘肅平?jīng)鋈?，副研究員，研究方向為動物營養(yǎng)健康調(diào)控。Email： 413247345@qq.com。