郭冰娟 高杰

摘要：為研究柳樹(shù)花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度下的表現(xiàn)，試驗(yàn)以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹(shù)花粉作為研究對(duì)象，將蔗糖、瓊脂、硼酸組成不同比例的9個(gè)培養(yǎng)基，設(shè)4、15、25、35 ℃ 4個(gè)貯藏溫度，分析不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度對(duì)柳樹(shù)花粉萌發(fā)率與花粉活力的影響。結(jié)果顯示，10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基對(duì)速生柳花粉萌發(fā)率具有促進(jìn)作用。在25 ℃溫度條件下貯藏30 d時(shí)，3種柳樹(shù)花粉活力仍能保持較高水平，說(shuō)明25 ℃溫度條件有利于柳樹(shù)花粉的萌發(fā)與貯藏。試驗(yàn)結(jié)果為：速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養(yǎng)基，在25 ℃溫度條件下培養(yǎng)和貯藏，可促進(jìn)柳樹(shù)花粉萌發(fā)，保持和提高花粉活力。

關(guān)鍵詞：柳樹(shù)；培養(yǎng)基；貯藏溫度；花粉萌發(fā)

中圖分類(lèi)號(hào)：S792.12

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

柳樹(shù)為楊柳科柳屬植物，喬木或直立灌木。柳樹(shù)枝呈圓柱形，無(wú)頂芽，葉多為披針形，狹而長(zhǎng)，葉柄短；花序直立，與葉同時(shí)開(kāi)放，或早于葉開(kāi)放；苞片有毛或無(wú)毛，稀早落；種子多為暗褐色，規(guī)格較小。柳樹(shù)喜光、喜濕、耐寒，可以在惡劣的生態(tài)環(huán)境下生長(zhǎng)，壽命為20～30年。柳樹(shù)在我國(guó)廣泛種植，品種較多，因此不同柳樹(shù)品種對(duì)花粉采集、種子貯藏的要求不同。研究不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度對(duì)促進(jìn)柳樹(shù)花粉萌發(fā)具有一定的參考價(jià)值。

1? 材料和方法

1.1? ?試驗(yàn)地點(diǎn)

試驗(yàn)在河南省封丘縣林木種植基地進(jìn)行，試驗(yàn)地位于河南省東北部，地處黃河沖積扇形平原的北半部，位于北緯34°53′～35°14′、東經(jīng)114°14′～114°46′之間，屬暖溫帶大陸性季風(fēng)氣候，夏季高溫多雨，冬季寒冷干燥，年平均氣溫13.9 ℃，年平均降水量615.1 mm，年平均日照時(shí)數(shù)2 117 h，全年無(wú)霜期214 d[1]。

1.2? ?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)于2020年3月21日上午采集花粉，以速生柳、絳柳、金絲垂柳3種柳樹(shù)花粉作為試驗(yàn)對(duì)象，選擇不同柳樹(shù)品種比較健壯的花枝，每個(gè)品種選擇10株花枝，剪下后插入玻璃瓶中，加入清水進(jìn)行培養(yǎng)，等待花枝開(kāi)花?；ㄖ﹂_(kāi)花后，將花序剪下放置硫酸紙上，在室溫條件下自然晾干，次日通過(guò)花粉篩篩取花粉，將其放入瓶中，標(biāo)注好采集品種與采集時(shí)間。將采集的花粉分成4份，分別放在4、15、25、35 ℃溫度條件下避光貯藏，并記錄貯藏1、2、5、10、15、20、25、30 d的花粉情況，再將花粉放到不同比例的培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h，對(duì)花粉萌發(fā)情況進(jìn)行觀察后記錄數(shù)據(jù)，每個(gè)處理重復(fù)3次。

花粉培養(yǎng)基由不同比例的蔗糖、瓊脂、硼酸組成，共設(shè)9個(gè)處理（D1、D2、D3、D4、D5、D6、D7、D8、D9，表1）。按設(shè)計(jì)配制好花粉培養(yǎng)基，用玻璃棒蘸取培養(yǎng)基溶液，之后滴入凹載玻片中間，用毛筆蘸取花粉，將花粉彈在載玻片上，通過(guò)顯微鏡觀察花粉是否分布均勻，再將雙凹載玻片放到鋪設(shè)2層濕潤(rùn)濾紙的培養(yǎng)皿中，后放到25 ℃光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，將光照強(qiáng)度設(shè)置為2 000 Lx。

1.3? ?測(cè)定項(xiàng)目

1.3.1 花粉萌發(fā)率 測(cè)定不同培養(yǎng)基下的花粉萌發(fā)率。從每個(gè)培養(yǎng)基處理中隨機(jī)選取3個(gè)樣品進(jìn)行觀察，每個(gè)樣品的花粉粒數(shù)量應(yīng)在100粒以上，根據(jù)花粉管長(zhǎng)度≥花粉粒直徑，可以判斷花粉是否萌發(fā)。花粉萌發(fā)率計(jì)算公式：

花粉萌發(fā)率（%）[2]= 萌發(fā)的花粉數(shù) ×100花粉總數(shù)

1.3.2 花粉活力 測(cè)定不同培養(yǎng)基下的花粉活力。

從每個(gè)培養(yǎng)基處理中隨機(jī)選取3個(gè)樣品進(jìn)行觀察，采用TTC染色法測(cè)定花粉活力。先準(zhǔn)備好載玻片，用毛筆輕蘸少量花粉，將其均勻彈在載玻片上，滴入不同比例的營(yíng)養(yǎng)液，再將載玻片放到恒溫箱中，恒溫箱溫度設(shè)置為25 ℃，持續(xù)15 min，

通過(guò)顯微鏡觀察載玻片上花粉的顏色，花粉顯示紅色表示有活力，花粉顯示無(wú)色表示無(wú)活力?；ǚ刍盍τ?jì)算公式：

花粉活力（%）= 有活力的花粉數(shù)量 ×100總花粉數(shù)量

1.4? ?數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與處理

通過(guò)EXCEL 2010軟件整理相關(guān)資料和數(shù)據(jù)，采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析[3]。

2? 結(jié)果與分析

2.1? ?不同培養(yǎng)基對(duì)柳樹(shù)花粉萌發(fā)率的影響

由表2可知，不同柳樹(shù)花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)基下存在顯著差異（P＜0.05）。在瓊脂比例一定的條件下，不同柳樹(shù)花粉萌發(fā)率受蔗糖的影響最大，其次是硼酸。蔗糖比例（15%）相同時(shí)，相同柳樹(shù)花粉平均萌發(fā)率差異不顯著（P＞0.05），

其中速生柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D6處理，絳柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D5處理，金絲垂柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在D6處理。培養(yǎng)基中，添加10%～15%蔗糖處理的不同柳樹(shù)花粉平均萌發(fā)率顯著高于添加20%蔗糖處理。

2.2? ?不同培養(yǎng)溫度對(duì)柳樹(shù)花粉萌發(fā)率的影響

由表3可知，不同柳樹(shù)花粉萌發(fā)率在不同培養(yǎng)溫度下表現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。速生柳、絳柳、金絲垂柳花粉最高萌發(fā)率出現(xiàn)在25 ℃培養(yǎng)溫度下，花粉萌發(fā)率分別為（57.3±5.7）%、

（68.7±12.2）%、（75.9±7.4）%，其次是在15 ℃培養(yǎng)溫度下，花粉萌發(fā)率分別為（52.5±6.0）%、（58.3±12.9）%、（67.7±3.2）%，均顯著高于35 ℃培養(yǎng)溫度下的花粉平均萌發(fā)率（P＜0.05）。不同柳樹(shù)花粉最低萌發(fā)率出現(xiàn)在4 ℃培養(yǎng)溫度下，其中速生柳花粉平均萌發(fā)率為（10.7±1.0）%，絳柳、金絲垂柳花粉基本不萌發(fā)，說(shuō)明低溫條件下，3種柳樹(shù)的花粉萌發(fā)效果較差。

2.3? ?不同貯藏溫度對(duì)柳樹(shù)花粉活力的影響

從圖1～圖3可以看出，不同柳樹(shù)花粉活力在不同貯藏溫度下表現(xiàn)顯著差異（P＜0.05）。隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，不同柳樹(shù)花粉活力隨之下

降，在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)花粉活力下降較為平緩；貯藏30 d時(shí)，3種柳樹(shù)花粉活力仍能保持在較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力，說(shuō)明25 ℃貯藏溫度較適于保持和提高柳樹(shù)花粉活力[4]。

3? 結(jié)論與討論

試驗(yàn)表明，不同培養(yǎng)基和貯藏溫度對(duì)柳樹(shù)花粉萌發(fā)率具有不同的影響。在不同培養(yǎng)基和不同貯藏溫度下，柳樹(shù)花粉萌發(fā)率表現(xiàn)顯著差異（P＜

0.05）。蔗糖不僅是花粉萌發(fā)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)源，同時(shí)也是花粉萌發(fā)的能量來(lái)源[5]。在花粉離體培養(yǎng)過(guò)程中，不同柳樹(shù)品種對(duì)培養(yǎng)基中添加的蔗糖濃度要求也不同。試驗(yàn)表明，花粉萌發(fā)和生長(zhǎng)也需要在培養(yǎng)基中添加適量的硼酸，這與一些學(xué)者的研究結(jié)論一致。

試驗(yàn)顯示，在培養(yǎng)基中添加10%～15%蔗糖處理的3種柳樹(shù)花粉平均萌發(fā)率顯著高于添加20%蔗糖處理，由于柳樹(shù)品種不同，因此適宜的培養(yǎng)基也不同。在不同培養(yǎng)溫度條件下，25 ℃培養(yǎng)溫度的3種柳樹(shù)花粉平均萌發(fā)率顯著高于其他培養(yǎng)溫度的處理。在25 ℃貯藏溫度條件下，速生柳、絳柳、金絲垂柳隨著貯藏時(shí)間的延長(zhǎng)，其花粉活力下降速度較為平緩；貯藏30 d時(shí)，3種柳樹(shù)花粉活力仍能保持較高水平，明顯高于4、15、35 ℃貯藏溫度條件下的花粉活力。試驗(yàn)結(jié)果表明，在柳樹(shù)花粉萌發(fā)過(guò)程中，速生柳采用10%蔗糖+1%瓊脂+0.10%硼酸的培養(yǎng)基，絳柳、金絲柳采用15%蔗糖+1%瓊脂+0.15%硼酸的培養(yǎng)基，在25 ℃溫度條件下培養(yǎng)和貯藏，均可提高柳樹(shù)花粉萌發(fā)率，有利于柳樹(shù)花粉活力的保持和提高。

柳樹(shù)花粉在低溫干燥的條件下，長(zhǎng)期貯藏（30 d）后仍能保持較高的活力，這說(shuō)明低溫干燥條件對(duì)花粉貯藏十分有利。此外，溫度、光照、濕度也是影響柳樹(shù)花粉萌發(fā)率和花粉活力的重要因素。

參考文獻(xiàn)

[1] 李婷，喬琦，李劍峰，等．牡丹花粉生活力測(cè)定方法

及其貯藏研究進(jìn)展[J]．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2020，48（9）：123-126.

[2] 郭娟，邱帥，劉華紅，等．4種冬青屬植物花粉離體

培養(yǎng)基篩選和貯藏條件的研究[J]．西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2018，33（6）：118-126.

[3] 王偉偉，姚玲，何開(kāi)躍，等．不同柳樹(shù)花粉離體培養(yǎng)

及活力測(cè)定方法比較研究[J]．江蘇林業(yè)科技，2018，45（4）：1-7.

[4] 王源秀，江聰，徐立安．柳樹(shù)花粉生活力分析[J]．林

業(yè)科技開(kāi)發(fā)，2007，21（1）：28-30.

[5] 劉巍，茼勝軍．柳樹(shù)遺傳改良研究進(jìn)展[J]．遼寧林業(yè)

科技，2012（1）：45-48.