張智勇，陳南穎，陳文承

（郴州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南郴州 423000）

規(guī)模豬場(chǎng)是指采用現(xiàn)代養(yǎng)豬技術(shù)與設(shè)施設(shè)備，實(shí)行批次化、全進(jìn)全出生產(chǎn)工藝，存欄基礎(chǔ)母豬100 頭以上或年出欄商品豬500 頭以上的自繁自養(yǎng)豬場(chǎng)、專業(yè)母豬場(chǎng)及專業(yè)育肥豬場(chǎng)[1]。自2011 年農(nóng)業(yè)部啟動(dòng)全國(guó)畜禽養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化示范創(chuàng)建活動(dòng)以來(lái)，湖南省共有279 個(gè)登記在冊(cè)、有效的畜禽養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)，其中省級(jí)240 個(gè)、國(guó)家級(jí)39 個(gè)[2-3]。郴州市自2020 年以來(lái)，共創(chuàng)建了18 個(gè)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)，其中省級(jí)17 個(gè)、國(guó)家級(jí)1 個(gè)，目前有效場(chǎng)數(shù)為17 個(gè)（1 場(chǎng)退養(yǎng)），這17 個(gè)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)分布于郴州市東部（桂東縣、汝城縣）、南部（宜章縣、臨武縣）、西部（嘉禾縣）、北部（永興縣、安仁縣）和中部（資興市、蘇仙區(qū)）。

為評(píng)估郴州市17 個(gè)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群主要疫病血清學(xué)抗體水平，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）對(duì)采集的431 份豬血清樣品進(jìn)行了O 型口蹄疫（FMD-O）、A 型口蹄疫（FMD-A）、豬瘟（CSF）、豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）、豬偽狂犬?。≒R-gB、PR-gE）血清學(xué)抗體檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了多因素分析，以期為生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)創(chuàng)建，尤其是生產(chǎn)操作標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范制定和科學(xué)防疫提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 采樣策略與樣本來(lái)源

根據(jù)《2023 年湖南省動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)與流行病學(xué)調(diào)查計(jì)劃》、國(guó)家級(jí)（省級(jí)）生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)復(fù)核驗(yàn)收要求，基于分層抽樣原則，對(duì)郴州市轄區(qū)內(nèi)的17個(gè)生豬養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)進(jìn)行豬全血采樣，涵蓋保育仔豬、育肥豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、種公豬5 個(gè)群體。每場(chǎng)采集25 頭份豬全血樣品，包括保育仔豬10 頭、經(jīng)產(chǎn)母豬10 頭、育肥豬、后備母豬或種公豬5 頭，采樣場(chǎng)若缺少其中1 種群體，則按種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、保育仔豬、育肥豬的次序更換，補(bǔ)齊所需采集樣品數(shù)。所有樣品新鮮，無(wú)溶血、變質(zhì)現(xiàn)象，共采集樣品431 份。

1.2 樣本采集與處理

用5 mL 一次性無(wú)菌真空采血管（不含抗凝劑、促凝劑）抽取豬前腔靜脈血液，室溫（22～25 ℃）放置30～60 min 或4 000g離心10 min 后得到血清。將血清轉(zhuǎn)入新的2 mL無(wú)菌離心管，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 主要試劑

改進(jìn)型FMD-A 抗體液相阻斷ELISA 試劑盒（批號(hào)20221116134-4）、改進(jìn)型FMD-O 抗體液相阻斷ELISA 試劑盒（批號(hào)20220830133-1），均購(gòu)自蘭州獸研生物科技有限公司；CSF 抗體阻斷ELISA 試劑盒（批號(hào)lot20220620）、PRRS 抗體間接ELISA 試劑盒（批號(hào)lot20221004）、PR-gB抗體ELISA 試劑盒（批號(hào)lot20221101）、PR-gE抗體ELISA 試劑盒（批號(hào)lot20221101），均購(gòu)自美國(guó)Kernel 公司。

1.4 血清學(xué)檢測(cè)

參照商品化試劑盒說(shuō)明書(shū)，對(duì)采集的431 份豬血清樣品分別進(jìn)行CSF、PRRS、FMD-O、FMD-A、PR-gB、PR-gE 血清學(xué)抗體檢測(cè)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

利用Excel 軟件整理收集到的數(shù)據(jù)，采用R軟件（V4.3.1）進(jìn)行計(jì)算。對(duì)FMD-O/FMD-A 二價(jià)疫苗抗體陽(yáng)性率差異性進(jìn)行分析，適用McNemar卡方檢驗(yàn)（不加校正），建立檢驗(yàn)假設(shè)：H0：FMD-O 與FMD-A 抗體陽(yáng)性率相同；H1：FMD-O與FMD-A 抗體陽(yáng)性率不同，P＜0.05 認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)FMD-O/FMD-A 二價(jià)疫苗抗體檢測(cè)方法關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，適用Pearson 卡方檢驗(yàn)（Yates 連續(xù)性修正），建立檢驗(yàn)假設(shè)：H0：FMD-O 與FMD-A 抗體檢測(cè)方法獨(dú)立；H1：FMD-O 與FMD-A 抗體檢測(cè)方法關(guān)聯(lián)，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)FMD-O/FMD-A 抗體水平的影響因素進(jìn)行Logistic 回歸分析，P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)回歸模型中的優(yōu)勢(shì)比（OR）及95%CI 進(jìn)行計(jì)算[4]。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

結(jié)果（表1）顯示：郴州市生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群的CSF、PRRS、FMD-A、FMD-O、PR-gB 抗體個(gè)體陽(yáng)性率分別為86.54%、65.89%、79.81%、85.85%、85.38%，部分地區(qū)豬場(chǎng)抗體個(gè)體陽(yáng)性率低于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部70%標(biāo)準(zhǔn)，提示存在感染或發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。部分場(chǎng)還檢出PR-gE 抗體，說(shuō)明存在PR 野毒感染。

表1 2023 年郴州市生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群6 種指標(biāo)血清抗體個(gè)體陽(yáng)性率 單位：%

2.2 口蹄疫（FMD）免疫水平影響因素

2.2.1 地區(qū)分布 結(jié)果（表2～3）顯示：FMD-O抗體個(gè)體陽(yáng)性率從高到低依次為西部（100%）、東部（96.08%）、南部（86.58%）、中部（81.33%）、北部（80.92%），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；FMD-A 抗體個(gè)體陽(yáng)性率從高到低依次為西部（100%）、東部（88.24%）、中部（81.33%）、南部（76.34%）、北部（75.84%），同樣差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 2023 年郴州市生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群FMD-O 抗體個(gè)體陽(yáng)性率相關(guān)變量分析結(jié)果

2.2.2 養(yǎng)殖規(guī)模 結(jié)果（表2～3）顯示：存欄數(shù)1 000～＜3 000 頭、3 000～＜5 000 頭、5 000～＜10 000 頭、≥10 000 頭豬群的FMD-O 抗體個(gè)體陽(yáng)性率分別為86.89%、84.00%、83.33%、96.00%，F(xiàn)MD-A 抗體個(gè)體陽(yáng)性率分別為83.50%、76.00%、76.00%、80.00%，陽(yáng)性率差異均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.2.3 生長(zhǎng)階段 結(jié)果（表2～3）顯示：種公豬、保育仔豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、育肥豬的FMD-O 抗體個(gè)體陽(yáng)性率分別為75.00%、69.77%、85.71%、85.71%、93.18%（χ2= 29.98，P＜0.05），F(xiàn)MD-A 抗體個(gè)體陽(yáng)性率分別為75.00%、52.33%、78.57%、85.71%、90.45%（χ2= 56.91，P＜0.05）。

2.3 FMD 暴露風(fēng)險(xiǎn)分析

FMD-O 抗體分析結(jié)果（表2）顯示：郴州市南部與北部豬場(chǎng)OR 值為4.299，中部與北部為4.939，東部與北部為11.730；豬群規(guī)?！?0 000 頭與5 000～＜10 000 頭（參照組）OR 值為2.739，3 000～＜5 000 頭與參照組為1.831，1 000～＜3 000頭與參照組為2.758；保育仔豬與種公豬OR 值為1.984，經(jīng)產(chǎn)母豬與種公豬為4.323，后備母豬與種公豬為5.000，育肥豬與種公豬為16.480。

FMD-A 抗體分析結(jié)果（表3）顯示：郴州市南部與北部豬場(chǎng)OR 值為3.424，中部與北部為12.460，東部與北部為19.280；豬群規(guī)模1 000～＜3 000 頭與≥10 000 頭OR 值為1.831，3 000～＜5 000 頭與≥10 000 頭為2.739，5 000～＜10 000頭與≥10 000 頭為2.758；種公豬與保育仔豬OR值為1.196，經(jīng)產(chǎn)母豬與保育仔豬為2.250，后備母豬與保育仔豬為4.409，育肥豬與保育仔豬為11.010。

表3 2023 年郴州市生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群FMD-A 抗體個(gè)體陽(yáng)性率相關(guān)變量分析結(jié)果

2.4 抗體陽(yáng)性率差異性和檢測(cè)方法獨(dú)立性分析

結(jié)果（表4）顯示，免疫FMD-O/FMD-A 二價(jià)疫苗后，豬群FMD-O、FMD-A 抗體陽(yáng)性率分別為85.85%、79.81%。應(yīng)用McNemar 卡方檢驗(yàn)對(duì)2 種抗體陽(yáng)性率差異性進(jìn)行分析，P＜0.05，說(shuō)明2 種抗體陽(yáng)性率之間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。應(yīng)用Pearson 卡方檢驗(yàn)對(duì)這2 種抗體檢測(cè)方法的關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，P＜0.05，無(wú)法證明2 種檢測(cè)方法相互獨(dú)立。

表4 2023 年郴州市生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)FMD-O/A 抗體陽(yáng)性率差異性和檢測(cè)方法獨(dú)立性比較結(jié)果

3 討論

3.1 總體情況

2023 年郴州市轄區(qū)內(nèi)的17 家生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)豬群主要疫病血清學(xué)抗體水平整體良好，口蹄疫等強(qiáng)制免疫指標(biāo)基本合格，與許心婷等[5]、甘葉青等[6]對(duì)規(guī)模豬場(chǎng)血清學(xué)抗體水平摸排結(jié)論基本一致。但部分縣（市區(qū)）、部分病種豬群抗體水平不理想，沒(méi)有達(dá)到農(nóng)業(yè)農(nóng)村部明確的免疫合格率≥70%的要求。

3.2 口蹄疫免疫水平影響因素

3.2.1 地區(qū)分布 郴州市不同區(qū)域豬群血清抗體水平存在一定差異，F(xiàn)MD-O 抗體個(gè)體合格率為80.92%～100%，F(xiàn)MD-A 為75.84%～100%。不同區(qū)域存在差異可能與采取的免疫措施不同以及地理環(huán)境有關(guān)，比如在近兩年春季和秋季重大動(dòng)物疫病免疫效果評(píng)估中，郴州市北部地區(qū)評(píng)分最低，而東部地區(qū)評(píng)分最高，與本研究結(jié)果一致。郴州市地理版圖呈大致規(guī)則的正方形，地勢(shì)東南高而西北低，東部有羅霄山脈、南部有五嶺山脈為天然屏障，中部的東江湖區(qū)域分布著大量水系，發(fā)揮著阻隔疫病傳播的重要作用。北部和西部地區(qū)均為平原，分別是水稻、“煙葉+晚稻”的大規(guī)模種植區(qū)域，平坦開(kāi)闊的地勢(shì)給疫病防控工作帶來(lái)不利影響。除永興縣外，其他地區(qū)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)FMD-O、FMD-A抗體合格率均≥70%，說(shuō)明郴州市豬群口蹄疫免疫工作基本合格，堅(jiān)持定期開(kāi)展免疫效果抽查評(píng)估即可。

3.2.2 養(yǎng)殖規(guī)模 郴州市不同規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)豬群的FMD-O 抗體個(gè)體合格率為83.33%～96.00%，F(xiàn)MD-A 為76.00%～83.50%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。這可能是由于湖南省對(duì)生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)的審查、監(jiān)管、撤銷等實(shí)行統(tǒng)一管理，各示范場(chǎng)的養(yǎng)殖模式相差不大。

3.2.3 生長(zhǎng)階段 郴州市不同生長(zhǎng)階段豬群FMD-O 抗體個(gè)體合格率為69.77%～93.18%，F(xiàn)MD-A 為52.33%～90.45%，除保育仔豬外，其余階段豬群均高于75%。FMD-O/A 抗體個(gè)體合格率由低到高為保育仔豬、種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、育肥豬。原因可能為示范場(chǎng)定期對(duì)母豬和育肥豬開(kāi)展免疫和檢測(cè)，而保育仔豬的抗體均來(lái)自母畜，因此抗體數(shù)量無(wú)法與其他生長(zhǎng)階段豬相比。種公豬在這方面可能會(huì)被忽略。經(jīng)產(chǎn)母豬為仔豬抗體的供體，因此抗體水平不如后備母豬。育肥豬在一個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)至少免疫2 次，加強(qiáng)免疫之后抗體水平短時(shí)間內(nèi)可維持在較高水平，因此高于其他生長(zhǎng)階段豬。

3.3 其他病種未做分析原因

因部分標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)明確不免疫PRRS 疫苗，比如汝城縣某示范場(chǎng)為PRRS 非免疫凈化場(chǎng)而全群未免疫PRRS 疫苗，因此未做PRRS 抗體分析。有近一半場(chǎng)點(diǎn)PR-gB 抗體陽(yáng)性率為100%，大部分場(chǎng)點(diǎn)PR-gE 抗體陽(yáng)性率為0，地區(qū)分布和養(yǎng)殖規(guī)模等自變量P值趨近于1，不適合做回歸分析。另外，由于陽(yáng)性頻數(shù)或陰性頻數(shù)小于20%，所得卡方獨(dú)立性檢驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，而Yates 連續(xù)性修正后的P值與Fisher 確切概率法無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不符合專業(yè)常識(shí)，因而未做獨(dú)立性檢驗(yàn)。

4 結(jié)論

2023 年郴州市17 個(gè)生豬養(yǎng)殖標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)CSF、PRRS、FMD、PR 等4 個(gè)病種6 項(xiàng)指標(biāo)免疫抗體水平整體較高，但部分地區(qū)豬場(chǎng)個(gè)體陽(yáng)性率偏低，且豬群中存在PR 野毒感染，提示存在發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；地區(qū)分布和生長(zhǎng)階段是影響口蹄疫免疫效果的重要因素。建議生豬標(biāo)準(zhǔn)化示范場(chǎng)定期開(kāi)展并加強(qiáng)免疫及效果評(píng)估工作，用評(píng)估結(jié)果指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，靈活調(diào)整或加強(qiáng)針對(duì)性免疫病種，以保障豬群生產(chǎn)安全。