夏青 臧曉涵 王勇澄 張云 李培海 張軒銘 劉可春

摘要：斑馬魚模型在藥物篩選、藥理和毒理等研究領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。近年來，隨著《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》等文件的實施，化妝品功效宣稱進(jìn)入強監(jiān)管時代，對功效評價模型和方法的科學(xué)性提出了更高的要求。斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)與人類高度相似，胚胎透明，易觀察，且斑馬魚功效評價實驗具有樣品用量少、周期短、高通量的優(yōu)勢，目前已成為化妝品功效評價領(lǐng)域的研究熱點。本文基于文獻(xiàn)計量學(xué)方法，統(tǒng)計了近十年斑馬魚用于化妝品功效評價的相關(guān)文獻(xiàn)，綜述了斑馬魚在化妝品功效評價中的應(yīng)用進(jìn)展，并分析了其發(fā)展動態(tài)和趨勢，為促進(jìn)斑馬魚模型在化妝品領(lǐng)域中的應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：斑馬魚；化妝品；功效評價

中圖分類號：R1?? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A?? 文章編號：1002-4026（2024）02-0036-11

Progress and development trends in the use of zebrafish as a model

organism for evaluating cosmetic efficacy

Abstract∶Zebrafish models have been widely used in various fields such as drug screening， pharmacology， and toxicology research. In recent years， with the implementation of regulations such as the standard for the Evaluation of Cosmetic Efficacy Claims， cosmetic efficacy claims have entered into an era of strict supervision， which has led to higher standards for the scientific nature of the efficacy evaluation models and methods. The skin structure of zebrafish is highly similar to that of humans， with zebrafish also having transparent embryos that are easy to observe. Moreover， efficacy evaluation experiments using zebrafish offer advantages such as minimal sample dosage， shortened experimental cycles， and high-throughput capacity. Consequently， zebrafish have become a popular research topic in the field of cosmetic efficacy evaluation. Based on bibliometric methods， this study analyzes the relevant literature on the use of zebrafish to evaluate cosmetic efficacy over the past decade. The study provides an overview of the progress of the application of zebrafish in cosmetic efficacy evaluation， and examines the development dynamics and trends through comprehensive analysis. This is so as to provide a reference for the application of zebrafish models in the cosmetics industry.

Key words∶zebrafish; cosmetics; efficacy evaluation

隨著人們生活質(zhì)量不斷提高及對于美的追求日益提升，化妝品已經(jīng)成為日常生活的必需品。我國是全球最大的化妝品市場之一，2020年護(hù)膚品市場規(guī)模達(dá)到2 630億元。功效宣稱是化妝品功效的描述性說明，也是消費者選擇化妝品的重要依據(jù)?！痘瘖y品監(jiān)督管理條例》［1］《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》等文件指出，化妝品的功效宣稱應(yīng)當(dāng)有充分的科學(xué)證據(jù)，注冊人或者備案人應(yīng)當(dāng)在國家藥品監(jiān)督管理局指定的網(wǎng)站上公布證據(jù)摘要，并接受社會監(jiān)督。

斑馬魚是化妝品功效評價的新興模型。斑馬魚與人類基因同源性高達(dá)87%，胚胎透明，易觀察[3]。利用斑馬魚開展功效評價具有樣品用量少、實驗周期短、高通量等優(yōu)勢。更重要的是，斑馬魚皮膚結(jié)構(gòu)和功能與人類高度相似，由表皮、真皮和皮下組織構(gòu)成，包含基底層、棘層、顆粒層、透明層等（見圖1、表1）[4]。斑馬魚與人類具有類似的創(chuàng)傷愈合和疤痕增生過程[5]，參與皮膚發(fā)育和膠原蛋白合成的相關(guān)基因與人類具有高度的同源性[4，6]。近年來，隨著化妝品功效宣稱監(jiān)管體系的不斷完善，斑馬魚廣泛應(yīng)用于化妝品功效評價，認(rèn)可度與接受度不斷提高，截至目前已有32項現(xiàn)行的相關(guān)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)，相關(guān)功效評價方法已應(yīng)用于化妝品配方篩選、工藝優(yōu)化、功效驗證、機制研究等各個方面。

本文查閱了近十年斑馬魚用于化妝品功效評價的相關(guān)文獻(xiàn)，利用文獻(xiàn)計量學(xué)方法對文獻(xiàn)發(fā)表時間分布、研究主體、研究內(nèi)容及熱點等進(jìn)行分析，并對斑馬魚模型在化妝品功效評價中的應(yīng)用進(jìn)展進(jìn)行綜述，梳理該領(lǐng)域的發(fā)展脈絡(luò)和研究趨勢，為斑馬魚模型在化妝品功效評價領(lǐng)域更科學(xué)、合理的應(yīng)用和發(fā)展提供參考。

1 斑馬魚模型應(yīng)用于化妝品功效評價的發(fā)展趨勢分析

1.1 數(shù)據(jù)來源與分析方法

以中國知網(wǎng)（CNKI）、萬方數(shù)據(jù)知識服務(wù)平臺為中文來源數(shù)據(jù)庫，中國知網(wǎng)檢索式為“主題：（斑馬魚 化妝品）”，檢索時間設(shè)定為2013—2023；萬方數(shù)據(jù)知識服務(wù)平臺檢索式為“全部：（斑馬魚 化妝品）”，檢索時間設(shè)定為2013—2023。以Web of Science核心集數(shù)據(jù)庫為英文文獻(xiàn)檢索平臺，檢索式為“Topic： （zebrafish cosmetics）”，檢索時間設(shè)定為2013-01-01至2024-01-01。

利用GraphPad Prism （v8.0.2.263）和VOSviewer （Version 1.6.20）軟件對文獻(xiàn)進(jìn)行可視化分析。其中，文獻(xiàn)產(chǎn)出時間分布圖由GraphPad Prism （v8.0.2.263）軟件繪制，關(guān)鍵詞共現(xiàn)圖譜和國家合作網(wǎng)絡(luò)關(guān)系圖譜由VOSviewer （Version 1.6.20）軟件獲得。

1.2 結(jié)果與分析

1.2.1 發(fā)文量分析

從中國知網(wǎng)中共獲得中文文獻(xiàn)44篇，萬方數(shù)據(jù)知識服務(wù)平臺共獲得中文文獻(xiàn)151篇，Web of Science核心集數(shù)據(jù)庫共獲得英文文獻(xiàn)214篇，排除非斑馬魚模型研究的文獻(xiàn)、與化妝品功效評價無關(guān)的文獻(xiàn)、重復(fù)文獻(xiàn)以及無法進(jìn)行評估的文獻(xiàn)，最終計入分析統(tǒng)計的文獻(xiàn)中，共計中文文獻(xiàn)163篇，英文文獻(xiàn)190篇，所有計入分析統(tǒng)計的文獻(xiàn)全文可查。

如圖2所示，近十年來基于斑馬魚模型的化妝品研究發(fā)文量逐年上升，2013—2017年間，中英文文獻(xiàn)產(chǎn)出總量較少，均少于20篇，說明以斑馬魚為模型的化妝品功效研究處于初期探索階段，關(guān)注度較低。自2018年起，每年發(fā)文總量均不低于30篇，整體呈現(xiàn)快速上升趨勢，斑馬魚在化妝品功效研究方面的研究價值已引起重視，在2022年研究熱度達(dá)到頂峰，中英文發(fā)文量達(dá)到79篇。雖然2023年研究熱度稍有降低，但中英文發(fā)文總數(shù)也達(dá)到65篇。隨著2021年5月1日《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》［2］的正式實施，預(yù)計以斑馬魚為模型進(jìn)行化妝品的功效評價在未來幾年將繼續(xù)保持高水平研究。

1.2.2 國家合作分析

對所獲得的英文文獻(xiàn)進(jìn)行國家合作分析，將發(fā)文量在4篇以上的國家計入統(tǒng)計分析，共納入15個國家，在計入統(tǒng)計的全部的文獻(xiàn)中，我國英文文獻(xiàn)發(fā)文量共計79篇，占比高達(dá)34.0%，與其他國家對比占據(jù)顯著優(yōu)勢。排在第二位的是韓國，發(fā)文量共計40篇，占比17.2%。印度、美國、土耳其、意大利和沙特阿拉伯，發(fā)文量均多于10篇，英文發(fā)文量占比分別為7.8%、6.9%、5.6%、5.6%和4.3%。此外，英國、巴西等國家英文發(fā)文量均不足10篇。如圖3所示，利用VOSviewer繪制國家合作分析圖，展示各國家之間的合作關(guān)系，每個節(jié)點代表1個國家，節(jié)點大小代表出現(xiàn)的相對頻率高低，節(jié)點間的連線粗細(xì)對應(yīng)國家之間合作關(guān)系的強弱，節(jié)點顏色對應(yīng)發(fā)文時間。從圖中可以看出，近幾年我國化妝品領(lǐng)域英文文獻(xiàn)發(fā)文量在幾個國家中居于首位，與印度、美國和巴基斯坦等多個國家都建立了合作關(guān)系，但各國之間聯(lián)系不夠密切，說明國家間需要加強合作交流，為化妝品原料發(fā)掘與功效評價提供新動力。

1.2.3 關(guān)鍵詞共現(xiàn)分析

關(guān)鍵詞是一篇文章核心和主題的集中體現(xiàn)。以共現(xiàn)頻次表示關(guān)鍵詞之間的關(guān)聯(lián)性，統(tǒng)計該領(lǐng)域的高頻關(guān)鍵詞，揭示當(dāng)前的熱點研究方向。在本文中，以關(guān)鍵詞出現(xiàn)3次為統(tǒng)計分析標(biāo)準(zhǔn)，每個節(jié)點代表一個關(guān)鍵詞，節(jié)點間連線代表關(guān)鍵詞之間的共現(xiàn)關(guān)系，連線越粗，代表關(guān)鍵詞共同出現(xiàn)的頻率越高。中文文獻(xiàn)共納入14個關(guān)鍵詞，英文文獻(xiàn)納入42個關(guān)鍵詞，中文文獻(xiàn)分析結(jié)果（圖4（a））顯示主要熱點方向為美白、保濕、抗氧化，熱點活性物質(zhì)為大麻葉提取物和庫拉索蘆薈花。由中文關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)圖可知，目前的化妝品市場中，人們更愿意相信植物提取物的護(hù)膚美妝功能，對美白和保濕等功效的化妝品需求量正在提高。英文文獻(xiàn)中主要發(fā)文方向為抗氧化、抗炎與抑制黑色素生成。由英文關(guān)鍵詞共現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)圖（圖4（b））可知，氧化應(yīng)激相關(guān)研究是斑馬魚模型在化妝品功效評價中的研究熱點之一，與氧化應(yīng)激相關(guān)的高頻關(guān)鍵詞有抗氧化劑、抗氧化活性、抗凋亡等。關(guān)鍵詞節(jié)點最多的為化妝品美白功效評價，可以發(fā)現(xiàn)該部分的高頻關(guān)鍵詞為黑色素生成、黑色素瘤和抑制酪氨酸酶活性等。

2 斑馬魚模型在化妝品功效評價中的發(fā)展動態(tài)

2.1 斑馬魚模型在美白功效評價中的應(yīng)用

當(dāng)皮膚受到過度的紫外線照射等外源刺激時，黑色素生成穩(wěn)態(tài)遭到破壞，導(dǎo)致黑色素積累，膚色變黑[7]。斑馬魚皮膚真皮層含有與人類相似的黑色素細(xì)胞，黑色素形成機理與人類高度一致，主要由苯丙氨基酸和酪氨酸在酪氨酸酶（TYR）的催化作用下氧化生成多巴醌，并在二羥基吲哚羧酸氧化酶（TRP-1）、多巴色素異構(gòu)酶（TRP-2）等作用下形成黑色素[8-9]（圖5（a））?；诎唏R魚模型的美白功效評價方法已得到廣泛應(yīng)用，主要檢測指標(biāo)包括黑色素生成面積、黑色素含量、酪氨酸酶活力、黑色素合成相關(guān)基因表達(dá)水平等（圖5（b））。

由廣州開發(fā)區(qū)黃埔化妝品產(chǎn)業(yè)協(xié)會起草的T/HPCIA 005—2022團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)[10]，提到了一種以黑色素生成和酪氨酸酶活性評價受試物美白功效的方法，實驗方法是破碎魚胚，提取黑色素沉淀，通過黑色素含量和酪氨酸酶在745 nm處的吸光度變化來評價化妝品美白功效。Ha等[11]以受精后35 h的黑色素生成水平為指標(biāo)，評價了多種1，3-噻嗪衍生物的抗黑色素生成作用，同時通過光譜法測定受精后48 h斑馬魚勻漿蛋白提取物的酪氨酸酶活性和黑色素含量，發(fā)現(xiàn)化合物TZ-6（4-羥基-2，6-二甲基-5，6-二氫-4H-1，3-噻嗪）能夠顯著降低斑馬魚胚胎眼睛和背部的黑色素生成，以劑量依賴性的方式降低總黑色素含量和酪氨酸酶活性，當(dāng)TZ-6濃度達(dá)到600 μmol/L時，對黑色素的抑制作用甚至高于0.2 mmol/L的苯硫脲（目前實驗室公認(rèn)的斑馬魚黑色素抑制劑）。金蒙等[12]通過拍攝斑馬魚側(cè)視圖，檢測斑馬魚體內(nèi)黑色素顆粒的分布與含量，采用斑馬魚胚胎NaOH裂解法測定黑色素相對含量，多巴氧化法測定酪氨酸酶活性，在油茶花、油茶葉、油茶蒲和油茶粕四種油茶副產(chǎn)品提取物中，篩選到最具美白潛力的油茶花提取物。此外，基于此方法還評價了庫拉索蘆薈花[13]、蘆筍[14]、馬齒莧多糖[15]和超分子壬二酸[16]等的美白功效。

Mahendra等[17]發(fā)現(xiàn)大葉桃花心木種子的乙醇粗提物（SMCE）和己烷餾分（SMHF）能夠影響組織蛋白酶表達(dá)，進(jìn)而影響斑馬魚的色素系統(tǒng)，研究發(fā)現(xiàn)SMHF會抑制肌動蛋白表達(dá)，SMCE會降低角蛋白4和延伸因子EF-1α的含量，表明SMHF和SMCE通過干擾正常的視網(wǎng)膜發(fā)育影響眼部色素沉積。短期的紫外線暴露會引起皮膚角質(zhì)層中黑色素的氧化與重新分布。Hu等[18]用紫外線照射處理斑馬魚幼魚引起黑色素沉積，結(jié)果證實靈芝多糖可以通過抑制cAMP/PKA和ROS/MAPK信號通路來拮抗紫外線照射誘導(dǎo)的黑色素積累。Jeon等[19]以斑馬魚為模型，結(jié)合細(xì)胞實驗，發(fā)現(xiàn)姜黃素能夠下調(diào)黑色素生成相關(guān)基因tyr、mitf、trp-1和trp-2的表達(dá)，通過MC1R信號通路調(diào)節(jié)黑色素生成。

2.2 斑馬魚模型在保濕功效評價中的應(yīng)用

真皮在表皮下面，主要由纖維組織、基質(zhì)和細(xì)胞組成。若真皮含水量下降，皮膚會出現(xiàn)干燥、彈性下降、皺紋增多等現(xiàn)象。補水保濕，不僅是為了補充皮膚表層的水分，更為重要的是調(diào)節(jié)滲透壓平衡，維持表皮細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定狀態(tài)，使皮膚保持水潤光澤[20]。目前常用于研究化妝品保濕功效的斑馬魚模型為2% NaCl誘導(dǎo)的斑馬魚尾部滲透壓失衡模型（圖6）。

何林燕等[21]用2%的NaCl誘導(dǎo)72 h的斑馬魚尾部脫水皺縮，側(cè)體位拍照后用Image J統(tǒng)計，以尾部長度收縮率為評價指標(biāo)，發(fā)現(xiàn)25%、50%、75%和100%的庫拉索蘆薈葉樣品能夠顯著緩解高滲環(huán)境下斑馬魚尾部皺縮，具有良好的保濕作用。陳丹丹等[22]發(fā)現(xiàn)山茶花提取物能夠改善斑馬魚脫水后尾部長度的收縮率，說明0.005%山茶花提取物對NaCl誘導(dǎo)的脫水反應(yīng)有一定的抑制作用。目前關(guān)于斑馬魚在化妝品保濕功效評價中應(yīng)用的文獻(xiàn)較少，但目前已有相關(guān)的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布。由山東省科學(xué)院生物研究所牽頭起草的《基于斑馬魚模型的化妝品保濕功效評價方法》團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)[23]中，提出檢測樣品處理后斑馬魚尾鰭面積變化，以及水通道蛋白相關(guān)基因aqp1a和aqp3a的表達(dá)量變化，可以作為評價樣品保濕功效的方法。

2.3 斑馬魚模型在抗氧化活性評價中的應(yīng)用

皮膚的紫外線損傷以及氧化代謝失衡，會導(dǎo)致皮膚組織和細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷，細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量超過基礎(chǔ)水平時，細(xì)胞對氧化應(yīng)激的防御能力減弱，造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)破壞，DNA損傷，增加基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）降解真皮層中的膠原蛋白和彈性蛋白[24]，具體表現(xiàn)為皮膚出現(xiàn)皺紋、干燥角質(zhì)化、衰老等癥狀。目前化妝品抗氧化功效評價的常用模型有紫外光照射模型、O3氧化損傷模型、柴油顆粒物模擬的污染損傷模型[25]。但目前評價模型多為細(xì)胞模型或人體模型，細(xì)胞模型結(jié)構(gòu)簡單造成假陽性多，人體試驗成本高、志愿者少。斑馬魚具有完善的ROS穩(wěn)態(tài)調(diào)控系統(tǒng)，是適用于抗氧化研究的生物模型[26]，常用的檢測指標(biāo)如圖7所示。現(xiàn)行的10項化妝品抗皺、緊致團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)中指出，以斑馬魚為模型評價化妝品的抗氧化功效，主要檢測方法包括SA-β-半乳糖苷酶活性檢測、I型膠原蛋白基因與彈性蛋白基因表達(dá)量檢測、總自由基清除能力檢測等。

孫晨等[27]利用0.5 mmol/L H2O2溶液誘導(dǎo)受精后8 h的 Tg（krt4：NTR-h KikGR）皮膚熒光斑馬魚氧化損傷模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)H2O2溶液作用于斑馬魚后，魚體抗氧化能力減弱，角質(zhì)細(xì)胞凋亡，表現(xiàn)為皮膚表面綠色熒光點數(shù)量減少，紫河車凍干粉（PHFAE）能夠緩解角質(zhì)細(xì)胞的凋亡，ROS探針檢測發(fā)現(xiàn)PHFAE會降低活性氧（ROS）含量，提高斑馬魚抗氧化能力。張淼等[28]采用H2O2誘導(dǎo)建立斑馬魚衰老模型，發(fā)現(xiàn)巖藻黃素能抑制H2O2誘導(dǎo)的斑馬魚胚胎SA-β-半乳糖苷酶活性的增高，降低丙二醛（MDA）含量，提高超氧化歧化酶（SOD）活性，抑制ROS過量增多。多次傳代或誘導(dǎo)衰老的細(xì)胞中SA-β-半乳糖苷酶活性很高，可作為衰老的一種標(biāo)志物[29]，MDA是一種被廣泛接受的氧化應(yīng)激生物標(biāo)志物[30]，SOD具有抗氧化功效，能夠清除ROS和氧陰離子自由基（O2-），減少體內(nèi)氧化組織損傷[31]。Wang等[32]利用5天、1個月、4個月、19個月的斑馬魚研究白藜蘆醇的抗衰老作用，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇能夠增加衰老斑馬魚的線粒體自噬，上調(diào)衰老斑馬魚中[STBX]mfn2和fis1以及pink1的表達(dá)，下調(diào)Akt/mTOR通路，上調(diào)ampk、sirt1 和 pgc1α 的表達(dá)，[STBZ]激活A(yù)mpk/Sirt1/Pgc1α通路。

2.4 斑馬魚模型在抗炎活性評價中的應(yīng)用

皮膚敏感可由外部刺激以及內(nèi)在因素誘發(fā)，是一種涉及皮膚屏障、皮膚神經(jīng)系統(tǒng)、皮膚免疫細(xì)胞的復(fù)雜過程[33]。皮膚在抵御內(nèi)外刺激時，免疫細(xì)胞釋放炎癥因子，可能導(dǎo)致色素沉著、衰老、敏感、痤瘡等皮膚問題[34]。具有舒緩、祛痘等功效的化妝品可通過緩解皮膚炎癥發(fā)揮作用。斑馬魚的免疫系統(tǒng)與人類高度相似，對感染和組織損傷的天然免疫反應(yīng)迅速，且容易誘發(fā)炎癥，是評價化妝品原料、配方或產(chǎn)品舒緩和祛痘功效的一種有效手段。常用的斑馬魚炎癥模型的誘導(dǎo)方法包括CuSO4誘導(dǎo)、脂多糖（LPS）誘導(dǎo)以及斷尾（機械損傷）誘導(dǎo)等[35]（圖8）。CuSO4誘導(dǎo)模型是通過銅離子誘導(dǎo)免疫細(xì)胞遷移到神經(jīng)丘，引起神經(jīng)炎癥；LPS誘導(dǎo)模型主要是通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞過度分泌促炎因子，引起全身炎癥；斷尾炎癥模型是通過物理方式造成局部損傷，引發(fā)免疫細(xì)胞的免疫應(yīng)答，促使炎癥細(xì)胞聚集。

Sun等[36]利用斑馬魚CuSO4誘導(dǎo)模型和斷尾模型研究了枯芩和子芩的抗炎活性，利用Tg（Lyz：EGFP）斑馬魚轉(zhuǎn)基因系可視化中性粒細(xì)胞聚集情況，以斑馬魚體內(nèi)炎癥細(xì)胞遷移數(shù)來量化中性粒細(xì)胞的遷移程度，結(jié)果表明40 μmol/L的CuSO4會誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞向側(cè)線遷移，尾部橫切會使中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞向損傷區(qū)遷移，枯芩和子芩樣品能夠明顯改善CuSO4誘導(dǎo)的炎癥遷移以及創(chuàng)傷引起的傷口剖面炎癥，具有良好的抗炎活性。Zheng等[37]利用三種斑馬魚炎癥模型研究了中藥組方生脈飲的體內(nèi)抗炎作用及潛在機制，利用Tg（MPO：GFP）斑馬魚可視化中性粒細(xì)胞聚集情況，結(jié)果顯示生脈飲醇提物能夠顯著調(diào)節(jié)CuSO4和LPS引起的炎癥反應(yīng)，改善創(chuàng)傷引起的傷口剖面炎癥，通過q-PCR分析NF-κB和STAT3信號傳導(dǎo)通路的[STBX]p65、IκBα和stat3[STBZ]等相關(guān)基因，表明生脈飲是通過抑制NF-κB和STAT3信號通路的激活發(fā)揮抗炎作用。基于斑馬魚炎癥模型已發(fā)現(xiàn)了如青蒿黃酮類化合物[38]、米糠油提取物[39]、南極地衣甲醇提取物[40]、穿心蓮二萜內(nèi)酯[41]和佛手柑素[42]等許多具備抗炎潛在開發(fā)利用價值的活性物質(zhì)。已發(fā)表的文獻(xiàn)中，斑馬魚炎癥模型主要用于抗炎活性篩選與機制研究，用于化妝品功效評價的研究較少。但目前基于斑馬魚模型抗炎機理評價化妝品舒緩、祛痘、溫和（無刺激）功效的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)已有13項，標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)用的模型除了常用的三種抗炎模型外，還有痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)斑馬魚炎癥模型、十二烷基磺酸鈉（SDS）誘發(fā)表皮炎癥細(xì)胞浸潤模型等。

2.5 斑馬魚模型在其他化妝品功效評價中的應(yīng)用

膠原蛋白作為皮膚內(nèi)的一種組織結(jié)構(gòu)蛋白，含有大量親水性保濕因子，能夠保持皮膚緊致與彈性，促進(jìn)皮膚的重建與修復(fù)，但膠原蛋白往往會隨著年齡的增長以及過度的紫外線暴露而流失，從而產(chǎn)生皺紋[43]。葉琳琳等[44]制備了一款含三葉鬼針草提取物的眼膜，用0.5%的三葉鬼針草提取物處理斑馬魚胚胎24 h，發(fā)現(xiàn)斑馬魚中與膠原蛋白和彈性蛋白合成相關(guān)的基因[STBX]col1a1a和eln1[STBZ]相對表達(dá)量均顯著上調(diào)，說明含三葉鬼針草提取物的眼膜具備抗皺、緊致功效。斑馬魚再生能力極強，傷口愈合機制與人類相似[45]，是研究化妝品修護(hù)功效的潛力模型，辛建雄等[46]利用斑馬魚斷尾模型以再生尾鰭長度計算修復(fù)促進(jìn)率，發(fā)現(xiàn)1 mg/mL纖連蛋白凍干粉具有促進(jìn)斑馬魚尾鰭修復(fù)的功效。何健華等[47]基于斑馬魚行為學(xué)研究方法以500 μmol/L十二烷基硫酸鈉作用15 min誘導(dǎo)建立斑馬魚刺激模型，以30 s內(nèi)斑馬魚胚胎的自旋運動頻率量化刺激強度，評價化妝品原料甘草酸二鉀和黃芩素的舒緩功效，結(jié)果表明兩種物質(zhì)均能有效緩解斑馬魚胚胎刺激，具有良好的舒緩功效，同時利用該模型發(fā)現(xiàn)α-紅沒藥醇、丹皮酚、積雪草苷和原花青素均具有緩解斑馬魚胚胎刺激的作用。此外，基于斑馬魚模型的化妝品控油功效評價已有相關(guān)的團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，T/QLMZ 7—2023團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)[48]中提到，皮脂腺控制人體皮膚油脂分泌主要與5α-還原酶相關(guān)，檢測受精后6 d的斑馬魚5α-還原酶合成的關(guān)鍵基因[STBX]srd5a1、srd5a2[STBZ]表達(dá)量可對化妝品的控油功效進(jìn)行評價。

3 討論

功效是消費者選擇化妝品的主要依據(jù)，也是化妝品最主要的生命力。目前，化妝品功效宣稱已進(jìn)入強監(jiān)管時代，但是化妝品功效評價技術(shù)體系仍不完善，嚴(yán)重阻礙化妝品行業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展，亟需加強基礎(chǔ)研究，形成科學(xué)、合理、可重現(xiàn)的功效評價技術(shù)體系。

斑馬魚的疾病特征、病因以及分子機制等與臨床相關(guān)且高度保守，使其在發(fā)育生物學(xué)和藥物臨床前研究中被廣泛應(yīng)用。其中，抑制黑色素生成、抗炎、抗氧化、抗衰老、修復(fù)等與化妝品功效密切相關(guān)的藥理模型，在藥物篩選、中藥功效評價等領(lǐng)域已得到較為充分的驗證。自2018年起，以斑馬魚為模型的化妝品功效評價相關(guān)文獻(xiàn)、標(biāo)準(zhǔn)等發(fā)表量呈快速上升趨勢，成為化妝品功效評價領(lǐng)域的新興和熱點模型。斑馬魚用于評價美白、保濕、抗皺、緊致、祛痘、舒緩、溫和（無刺激）等化妝品功效的350余篇文獻(xiàn)相繼發(fā)表。以斑馬魚為模型，評價化妝品美白、抗皺、控油、修護(hù)等功效的32項團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)陸續(xù)發(fā)布。我國在該研究領(lǐng)域處于核心地位，但國家間聯(lián)系不夠緊密。隨著《化妝品功效宣稱評價規(guī)范》［2］的正式實施以及功效評價技術(shù)服務(wù)市場需求的不斷攀升，斑馬魚在化妝品功效評價領(lǐng)域的應(yīng)用會繼續(xù)保持高水平發(fā)展。

本文通過分析斑馬魚模型在化妝品功效評價中的發(fā)展動態(tài)和趨勢，建議將來加強以下幾方面的研究：（1）加強斑馬魚模型與化妝品功效的相關(guān)性研究。目前，基于斑馬魚模型的化妝品功效評價方法多數(shù)由藥理活性評價方法轉(zhuǎn)化而來，例如選用CuSO4、斷尾機械損傷或LPS誘導(dǎo)的炎癥模型，以抗炎活性相關(guān)指標(biāo)評價化妝品祛痘、舒緩、去屑、修護(hù)等功效[49-50]。雖然化妝品可能通過抗炎活性發(fā)揮上述功效，但以抗炎為指標(biāo)評價化妝品是否具有上述功效具有一定的片面性。建議根據(jù)每個功效的特點，開發(fā)專屬性和特異性更強的評價方法。例如，以痤瘡丙酸桿菌誘導(dǎo)建立斑馬魚炎癥模型，通過檢測抗炎活性及抑菌率等指標(biāo)評價化妝品祛痘功效；以抑制炎癥和緩解刺痛等復(fù)合指標(biāo)評價化妝品舒緩功效等。（2）完善斑馬魚功效評價體系和技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。斑馬魚模型在化妝品功效評價領(lǐng)域中的應(yīng)用尚處于起步和快速發(fā)展階段，國內(nèi)外學(xué)者基于功效評價原理及斑馬魚的特點，開發(fā)了一系列方法但目前仍不完善。斑馬魚美白功效評價是目前較為成熟的方法之一，相關(guān)文獻(xiàn)及標(biāo)準(zhǔn)較多。較為常用的評價指標(biāo)包括黑色素生成面積、黑色素含量、酪氨酸酶活力、黑色素合成相關(guān)基因表達(dá)水平等。在開展美白功效評價時，有學(xué)者分別選用受精后9、22 h或6 d等不同魚齡的斑馬魚，化妝品處理45、48、72 h，從頭部圖像、魚體側(cè)視圖或頂視圖等不同角度和區(qū)域統(tǒng)計黑色素面積[51-53]。由此可見，斑馬魚功效評價方法亟待開展規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化研究，以提升化妝品功效評價的準(zhǔn)確性和科學(xué)性。（3）加強斑馬魚模型在化妝品研發(fā)和生產(chǎn)全過程中的應(yīng)用研究。功效評價貫穿于原料開發(fā)、配方設(shè)計與生產(chǎn)工藝優(yōu)化等化妝品研發(fā)的各個環(huán)節(jié)。由于化妝品種類較多，包括水、乳、霜、粉、膜等不同劑型[54]，斑馬魚模型在各類化妝品功效評價中的適用性以及操作規(guī)范等均需進(jìn)一步研究。（4）加強功效機制研究、技術(shù)推廣和科普等。闡明功效機制，是明確化妝品功效的重要前提。目前，斑馬魚模型在功效表型評價方面的應(yīng)用較多，但研究化妝品功效機制的報道很少，有必要進(jìn)一步結(jié)合現(xiàn)代技術(shù)加強機制研究。雖然斑馬魚模型在化妝品功效評價領(lǐng)域知名度和認(rèn)可度不斷提高，但相比體外細(xì)胞和人體試驗，斑馬魚在化妝品功效評價中的應(yīng)用仍需進(jìn)一步推廣。尤其應(yīng)該加強科普工作，使廣大科研工作者和消費者進(jìn)一步了解斑馬魚模型在化妝品功效評價中的適用性和科學(xué)性，促進(jìn)斑馬魚模型在該領(lǐng)域的發(fā)展。

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