李忠軍　徐建人　李鎮(zhèn)軍　胡燁敏　樊麗妃　李奇　焦紅

二羥吲哚合成應(yīng)用在國外已有30 多年歷史。國內(nèi)外多年研究發(fā)現(xiàn)，二羥吲哚有天然黑色染發(fā)作用，還具有抗菌、清除自由基和抗紫外輻射等功效。SCCP 早在18 年前就公布了二羥吲哚的染發(fā)劑安全性評價(jià)結(jié)果和使用推薦濃度。本文通過對國產(chǎn)二羥吲哚進(jìn)行相關(guān)毒理學(xué)項(xiàng)目的重復(fù)驗(yàn)證，將實(shí)驗(yàn)結(jié)果同國際實(shí)驗(yàn)室相應(yīng)項(xiàng)目的結(jié)果進(jìn)行比較，為中國化妝品新原料的批準(zhǔn)提供科學(xué)依據(jù)。根據(jù)中國《化妝品新原料申報(bào)與審評指南》規(guī)定，本實(shí)驗(yàn)采用《化妝品技術(shù)規(guī)范2015 版》中動(dòng)物急性經(jīng)口和經(jīng)皮毒性、皮膚和眼刺激性/ 腐蝕性、皮膚變態(tài)反應(yīng)性、皮膚光毒性、皮膚光變態(tài)反應(yīng)性、基因突變、染色體畸變和90 天經(jīng)皮染毒實(shí)驗(yàn)方法，進(jìn)行相關(guān)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，對結(jié)果進(jìn)行比較評價(jià)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，小鼠經(jīng)口急性毒性，雄性LD50 ＞ 3.690g/kg BW，雌性LD50 ＞3.160g/kg BW，毒性分級為低毒。急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)LD50>2.180g/kg BW，毒性分級為微毒性。急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗(yàn)反應(yīng)分級為微刺激性。皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)致敏強(qiáng)度為輕致敏性。皮膚刺激性/ 腐蝕性試驗(yàn)反應(yīng)分級為輕刺激性?；蛲蛔兒腿旧w畸變試驗(yàn)均為陰性。皮膚光毒性和皮膚光變態(tài)反應(yīng)均為陰性。亞慢性經(jīng)皮毒性最大無作用劑量為20 mg/kg bw/day。所驗(yàn)項(xiàng)目同國際組織SCCP 公布的結(jié)果比較基本一致，大部分項(xiàng)目的結(jié)果優(yōu)于國外。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本土相關(guān)產(chǎn)品二羥吲哚在染發(fā)劑中以0.5% 濃度添加使用是安全的。

關(guān)鍵詞：二羥吲哚；染發(fā)劑；動(dòng)物毒理學(xué)試驗(yàn)；結(jié)果比較

Part 1

前言

據(jù)國內(nèi)外多年研究發(fā)現(xiàn)，二羥吲哚有天然黑色染發(fā)作用，同時(shí)具有抗菌、清除自由基和抗紫外輻射、以及作為抗氧化劑制備各類應(yīng)急性疾病的預(yù)防或治療藥物等功效。二羥吲哚作為新一代染發(fā)護(hù)發(fā)用品中的有效活性成分已成為發(fā)展趨勢，也是國內(nèi)外關(guān)注的研究熱點(diǎn)[1]。二羥吲哚目前在日本稱作為“空氣氧化性染發(fā)劑”[2]。歐盟委員會(huì)健康和消費(fèi)者保護(hù)總局公共衛(wèi)生及風(fēng)險(xiǎn)評估委員會(huì)（以下簡稱：“SCCP”）0952/05 《關(guān)于對二羥基吲哚的意見》報(bào)道了多個(gè)國際實(shí)驗(yàn)室依據(jù)GLP程序和OECD 方法指南，對物質(zhì)代碼為P36和P39 的二羥吲哚樣品開展毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，據(jù)此做出安全性評估意見和推薦使用濃度[3]。近10 年來， 隨著精細(xì)化學(xué)新產(chǎn)品的發(fā)展，中國在二羥吲哚合成方法和用途方面的報(bào)道也不斷出現(xiàn)，但是尚未被批準(zhǔn)使用。根據(jù)中國《化妝品新原料申報(bào)與審評指南》要求[4]，申請注冊化妝品新原料，應(yīng)符合情景II 要求的項(xiàng)目進(jìn)行毒理學(xué)評價(jià)。本文對相關(guān)二羥吲哚原料分別進(jìn)行了急性經(jīng)口、經(jīng)皮毒性、急性眼刺激、皮膚刺激性/ 腐蝕性、皮膚變態(tài)反應(yīng)、皮膚光毒性、皮膚光變態(tài)反應(yīng)和基因突變、染色體畸變和90 天經(jīng)皮染毒等10 項(xiàng)毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)，并將實(shí)驗(yàn)結(jié)果與SCCP/0952/05 的同項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較，為本土二羥吲哚原料開發(fā)的毒理學(xué)評價(jià)提供科學(xué)依據(jù)。

Part 2

材料和方法

1. 實(shí)驗(yàn)樣品來源

廣州市驕子日化有限公司提供產(chǎn)品染發(fā)劑原料二羥吲哚（批號(hào)研2023001-1） 共500mg。來源于3，4- 二烷氧基苯乙胺同溶劑乙酸在催化劑三溴化硼作用下，加氧化劑五氧化二磷和溶劑四氫呋喃進(jìn)行氧化反應(yīng)，加還原劑連二亞硫酸鈉進(jìn)行還原反應(yīng)生成二羥吲哚液體。再經(jīng)乙酸乙酯萃取、鹽水洗滌、減壓濃縮、冷凍結(jié)晶、真空干燥得到單一化合物二羥吲哚，純度高達(dá)97% 以上。500mg 二羥吲哚由鋁箔真空袋封存為5 袋，每袋100mg，外包裝完整無殘缺無泄漏。開袋后樣品為黑灰色固體粉末狀，見空氣顏色加深，二羥吲哚純度≥ 97.5%。實(shí)驗(yàn)二次取樣后充氮封存，加套自封袋再次充氮4℃保存。

2. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)、急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)、急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗(yàn)、皮膚刺激性/ 腐蝕性試驗(yàn)、皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)在廣州市黃埔區(qū)瑞發(fā)路16 號(hào)2 棟一樓動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)室完成，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（粵）2021-0270。室溫18℃～ 26℃，濕度40% ～ 70%。上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)經(jīng)過廣州市宜健醫(yī)學(xué)技術(shù)發(fā)展有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利和倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

皮膚光毒性試驗(yàn)、皮膚光變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)、基因突變和染色體畸變實(shí)驗(yàn)在廣州市黃埔區(qū)科學(xué)城尖塔山路1 號(hào)普通環(huán)境動(dòng)物毒理實(shí)驗(yàn)室和體外實(shí)驗(yàn)室完成，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（ 粵）2022-0194。室溫18℃～ 26℃，濕度40% ～ 70%。上述動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)經(jīng)過廣州市微生物研究所集團(tuán)股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

3. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼料來源

急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)使用SPF 級KM小鼠（ 雌雄各半）；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)∶SCXK（粵）2022-0002；動(dòng)物合格證號(hào)：44007200113413。飼料購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，批號(hào)：20220907。質(zhì)量合格證：No.4420030028392。急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)使用SPF 級SD 大鼠（雌雄各半），實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、飼料來源和批號(hào)同1.3.1。動(dòng)物合格證號(hào)：NO.44007200113412。

急性眼刺激性/ 腐蝕性試驗(yàn)使用普通級新西蘭兔，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許