作者單位：101300" 北京市順義區(qū)醫(yī)院

【摘要】" 目的" 分析冷凍切片免疫組化技術在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的價值。方法" 以醫(yī)院2021年1月- 2022年4月收治的50例甲狀腺腫瘤患者手術切除標本為觀察對象，同時做冷凍免疫組化和常規(guī)石蠟切片免疫組化，將常規(guī)石蠟切片免疫組化染色結果作為診斷標準，評價冷凍免疫組化結果的靈敏度、特異度以及一致性（Kappa）。結果" 以常規(guī)石蠟切片免疫組化為診斷金標準，確診47例為癌，經冷凍免疫組化檢測確診46例為癌。鏡下4例甲狀腺微小乳頭狀癌纖維組織增生不明顯，5例病變纖維結締組織內見鈣化灶，腫瘤形態(tài)與常規(guī)HE類似，切片中乳頭狀癌細胞核特點可見核溝、核異型、擁擠以及核增大等，毛玻璃樣核特點在冷凍切片中表現(xiàn)不顯著，但能夠明顯看見結構異型性或浸潤，伴隨顯著的纖維化。以常規(guī)石蠟切片免疫組化為診斷金標準，冷凍免疫組化檢測技術診斷的靈敏度為97.87%，接近100.00%，表明漏診率極低；特異度為66.67%，存在較高誤診率。冷凍免疫組化檢測技術的診斷結果與實際結果中高度一致（Kappa=0.645）。結論" 針對甲狀腺乳頭狀癌，在術中預留冷凍切片能夠完全保留病變組織，證實冷凍切片免疫組化技術能夠輔助提升對甲狀腺微小乳頭狀癌的診斷。

【關鍵詞】" 冷凍切片；免疫組化技術；甲狀腺乳頭狀癌；診斷價值

中圖分類號" R736.1" " 文獻標識碼" A" " 文章編號" 1671-0223（2024）02--03

甲狀腺乳頭狀癌是最常見的濾泡細胞起源的惡性腫瘤，在甲狀腺惡性腫瘤中的發(fā)生率占80%左右[1]。針對術前甲狀腺細胞學細針穿刺診斷不明確的病例，術中冷凍切片是最常用的確診方法，冷凍制片在甲狀腺微小乳頭狀癌患者中缺少典型細胞形態(tài)與結構時，術中甲狀腺乳頭狀癌的診斷會存在一定誤診和漏診的可能。免疫組化技術常用于鑒別腫瘤良惡性確定及癌癥的病發(fā)部位，在較多的小活檢標本中，由于沒有典型的形態(tài)學表現(xiàn)，在此時實施免疫組化能夠幫助確定癌癥的病發(fā)部位，是幫助甲狀腺微小乳頭狀癌明確診斷、輔助制定診療方案的關鍵措施[2]。調查發(fā)現(xiàn)，甲狀腺乳頭狀癌作為常見的甲狀腺癌癥，惡性程度較低，臨床表現(xiàn)不具有特異性，在診斷時出現(xiàn)漏診或誤診，導致醫(yī)療糾紛的發(fā)生，對當前醫(yī)患關系產生不利影響[3]。為防止誤診以及漏診的發(fā)生，本研究通過對比分析，評價冷凍切片免疫組化技術在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的價值，現(xiàn)將結果報告如下。

1" 對象與方法

1.1" 研究對象

以醫(yī)院2021年1月- 2022年4月收治的50例甲狀腺腫瘤患者手術切除標本為觀察對象，其中男12例，女38例；年齡36～74歲，中位數(shù)年齡55.5歲；病灶直徑1.84～5.77mm，平均3.81±0.87mm。納入標準：①病變直徑≤10mm的甲狀腺濾泡上皮源性病變；②患者年齡≥18歲。排除標準：①預留冷凍切片經免疫組化染色后，仍不能夠確診的患者；②實施冷凍切片免疫組化失敗的病例；③術后常規(guī)切片或術中冷凍切片證實為非來源于濾泡上皮腫瘤。所有患者及家屬均已知曉本次研究內容并簽署知情同意書，且研究通過醫(yī)院倫理委員會批準。

1.2" 診斷方法

1.2.1" 標本處理" 將所有病例均取病變組織做冷凍，每例病變組織冷凍切片4～6μm切4張冷凍切片，其中一張常規(guī)HE染色做冷凍診斷，余三張選用Galectin-3、CK19、TPO三項指標，對病變組織冷凍切片進行免疫組化染色；剩余組織和再取組織采用常規(guī)手段進行脫水、包埋、切片，在包埋時需要注意將有病變的一側朝下，在修蠟時，連續(xù)輕微修片，切3張切片常規(guī)免疫組化Galectin-3、CK19、TPO做對比染色。

1.2.2" 常規(guī)石蠟切片免疫組化" 實驗步驟如下：切片脫蠟至乙醇，磷酸緩沖鹽溶液（PBS）沖洗，根據抗體選擇EDTA8.0或9.0高壓修復，3%過氧化氫封閉10min，PBS沖洗，一抗37℃孵育1小時，PBS沖洗，二抗37℃孵育30分鐘，PBS沖洗，DAB顯色5分鐘，水洗，復染，封片。總時長約5小時。

1.2.3 冷凍免疫組化技術" 實施步驟：①冷凍切片4～6μm立即放入固定液中，0.5～1.0min；②PBS-T沖洗5～10s，封閉液封閉1min；③抗體孵育3min，重復沖洗步驟，增強劑孵育3min，再次沖洗；④DAB顯色1～3min之后復染、脫水封片0.5min?？倳r長約13分鐘。

以上切片的診斷均由我院2名醫(yī)師進行確認，并以2名醫(yī)師的統(tǒng)一結果為準。

1.3" 數(shù)據分析方法

運用SPSS 25.0統(tǒng)計學軟件分析處理數(shù)據，計數(shù)資料計算百分率（％），組間率比較采用χ2檢驗。以Plt;0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2" 結果

2.1" 鏡下形態(tài)特點

鏡下4例甲狀腺微小乳頭狀癌纖維組織增生不明顯，5例病變纖維結締組織內見鈣化灶，腫瘤形態(tài)與常規(guī)HE類似，切片中乳頭狀癌細胞核特點可見核溝、核異型、擁擠以及核增大等，毛玻璃樣核特點在冷凍切片中表現(xiàn)不顯著，但能夠明顯看見結構異型性，伴隨顯著的纖維化。

2.2" 冷凍免疫組化的診斷效果

以常規(guī)石蠟切片免疫組化為診斷金標準，冷凍免疫組化檢測技術診斷的靈敏度為97.87%，接近100.00%，表明漏診率極低；特異度為66.67%，存在較高誤診率。冷凍免疫組化檢測技術的診斷結果與實際結果中高度一致（Kappa=0.645），表明具有臨床應用價值。見表1。

3" 討論

調查發(fā)現(xiàn)，甲狀腺結節(jié)的發(fā)生率可能會受到調查群體的影響，出現(xiàn)一定差異，因為通常情況下，臨床認為甲狀腺良性結節(jié)屬于常見病，且目前我國針對甲狀腺結節(jié)的發(fā)生率并沒有確切的統(tǒng)計資料[4]。根據流行病學調查發(fā)現(xiàn)，甲狀腺惡性腫瘤的發(fā)生率受多方面因素影響呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢[5]。研究發(fā)現(xiàn)，甲狀腺冷凍切片是臨床醫(yī)師對患者手術方案制定的有效參考，針對甲狀腺乳頭狀癌的診斷則依賴于核的特征，核異型、毛玻璃樣核、重疊以及內包涵體等，但臨床冷凍切片不顯示毛玻璃樣且存在較多的人工假象，甲狀腺乳頭狀癌患者在實施術中冷凍診斷，需要在術后對冰余組織進行二次確診，但部分患者的標本可能會因病變較小或因切片原因導致冷凍中的病變消失，導致延遲診斷的病例不能及時確診[6]。雖然臨床針對包埋、切片等環(huán)節(jié)均采取了相應的防范措施但仍難以避免出現(xiàn)病變組織損失，對患者之后手術方案的制定，治療進程的順利實施產生影響。甲狀腺乳頭狀癌雖然惡性程度較低，但沒有劃分為早期腫瘤，不能及時制定手術治療方案，會導致潛在的醫(yī)患糾紛。在本研究收治的50例甲狀腺乳頭狀癌患者腫瘤手術切除標本中，以常規(guī)石蠟切片免疫組化為診斷金標準，確診47例為癌，經冷凍免疫組化檢測確診46例為癌。

部分的甲狀腺乳頭狀癌患者在冷凍、常規(guī)切片中均缺少典型形態(tài)，需要借助免疫組化以及分子檢測達到輔助確診的效果，既往研究多針對石蠟的常規(guī)切片與術中冷凍切片進行對比，但針對冷凍切片實施免疫組化的研究較少。本研究針對鏡下對甲狀腺乳頭狀癌進行觀察發(fā)現(xiàn)，鏡下4例甲狀腺乳頭狀癌纖維組織增生不明顯，5例病變纖維結締組織內見鈣化灶，腫瘤形態(tài)與常規(guī)HE類似，切片中乳頭狀癌細胞核特點可見核溝、核異型、擁擠以及核增大等，毛玻璃樣核特點在冷凍切片中表現(xiàn)不顯著，但能夠明顯看見結構異型性或浸潤，伴隨顯著的纖維化。

本研究發(fā)現(xiàn)，冷凍免疫組化技術的靈敏度為97.87%（46/47）、特異度為66.67%（2/3），Kappa=0.645，提示冷凍切片免疫組化的診斷具有較高的靈敏度，臨床漏診率較低，符合臨床篩查需要。有研究發(fā)現(xiàn)，CK19在甲狀腺乳頭狀癌的常規(guī)石蠟切片中具有高敏感度、低特異度的表達特點[7]；BARF在近年來的研究中發(fā)現(xiàn)，其基因突變會發(fā)生在甲狀腺癌腫，突變位點最多見的是15外顯子1799位點，導致基因編碼的蛋白產物被谷氨酸替代，導致接到的信號轉導通路發(fā)生異常[8-9]，但國內關于其的相關報道較少，本研究由于并未針對上述指標的具體表達以及診斷效能等作針對性研究，因而并不能夠證實CK19與BRAF與甲狀腺乳頭狀癌之間的腫瘤大小、淋巴結轉移情況之間的關系，可在后續(xù)進行補充。

綜上所述，針對甲狀腺乳頭狀癌，在術中預留冷凍切片能夠完全保留病變組織，證實冷凍切片免疫組化技術能夠對甲狀腺腫瘤病變的性質和類型做出更早期和快速的診斷。

4" 參考文獻

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[2023-09-04收稿]