鄧東方，王 鑫，姜 帆，雷詩卉，張勝麗，繆程鋅，劉 林，葛安琪

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長沙 410007；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙 410208）

乳腺增生是發(fā)生于育齡期婦女的一種乳腺組織良性增生性疾病[1]，以乳腺疼痛、結(jié)塊及腫塊為主要表現(xiàn)。乳腺增生屬于中醫(yī)學(xué)中“乳癖”的范疇，氣滯、痰凝、血瘀是其發(fā)病因素[2]，治法有理氣、化痰、活血等方法。研究表明乳腺增生患者發(fā)生乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)為1%～2%，比普通人患乳腺癌的概率增加了4倍左右[3-4]，因此對乳腺增生的研究與治療具有重要的意義。

乳痛軟堅(jiān)片是湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院專家根據(jù)多年的臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)研制而成的特色醫(yī)院制劑，具有疏肝解郁、化痰散結(jié)、活血止痛的功效，對肝郁氣滯、痰瘀互結(jié)型乳腺增生患者具有良好的治療效果[5-6]。本研究通過鎮(zhèn)痛、抗炎和調(diào)節(jié)免疫藥理作用的動物實(shí)驗(yàn)研究，進(jìn)一步明確其防治乳腺增生的藥理作用機(jī)理及特點(diǎn)，旨在為其進(jìn)一步臨床運(yùn)用推廣和新藥研發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材 料

1.1 藥物與試劑 乳痛軟堅(jiān)片（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，批號：201804，人臨床用量為7.2 g/d）；醋酸潑尼松（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號：1909215，人臨床用量為60 mg/d）；乳核散結(jié)片（廣州白云山中一藥業(yè)有限公司，批號：VN0020，人臨床用量為4.32 g/d）；阿司匹林（舒泰神生物制藥股份有限公司，批號：191408，人臨床用量為3.0 g/d）；羅通定（山西云鵬制藥有限公司，批號：200807，人臨床用量為120 mg/次）；左旋咪唑（山西云鵬制藥股份有限公司，批號：B150101）；冰醋酸（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司，批號：20180901）；角叉菜膠（Solarbio公司，批號：9000-07-1）；豚鼠血清（北京鑫泉永碩科技有限公司，批號：20190702）；印度墨汁（北京雷根生物技術(shù)有限公司，批號：1023A20）。

1.2 儀器 UV1800多功能分光光度計(jì)（日本島津）；YLS-7B型足趾容積測定儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備科）；37370型足底熱痛測試儀（意大利VGO）；AY-120型電子分析天平（日本島津）；101-2ES型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京永光明醫(yī)療儀器有限公司）；TP-2200B電子天平（湘儀天平儀器設(shè)備有限公司）；LA612型超純水儀（ELGA）；H1850型低速臺式離心機(jī)（湖南湘儀儀器有限公司）；BCD-196TMZL型冰箱（海爾集團(tuán)）；HDPN-88型電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)動物 SD大鼠，120只，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量（140±10）g；ICR小鼠，240只，SPF級，雌雄各半，體質(zhì)量（20±2）g。動物均購自湖南斯萊克景達(dá)動物有限公司，許可證號：SCXK（湘）2019-0004。所有動物均適應(yīng)性喂養(yǎng)4 d后開始實(shí)驗(yàn)，飼養(yǎng)溫度維持在18～24 ℃，濕度40%～70%，照明時(shí)間隨同自然晝夜變化，每2 d投喂飼料、清換墊料、清理籠具，定期消毒籠具。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會審查，批號：ZYFY20230509-01。

2 方 法

2.1 鎮(zhèn)痛藥理作用實(shí)驗(yàn)[7]

2.1.1 小鼠扭體實(shí)驗(yàn)[8]取60只ICR小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、羅通定組（46.8 mg/kg）、乳核散結(jié)片組（0.56 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（3.76 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.88 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.94 g/kg），每組10只。羅通定組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組灌胃等體積純凈水，灌胃體積均為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。于末次藥后1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 mL/20 g，記錄15 min內(nèi)各組小鼠的扭體次數(shù)及潛伏期。

2.1.2 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn) 預(yù)選痛閾在5～30 s內(nèi)的18～22 g雌性ICR小鼠60只，按痛閾值隨機(jī)分為模型組、羅通定組（46.8 mg/kg）、乳核散結(jié)片組（0.56 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（3.76 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.88g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.94g/kg），每組10只。羅通定組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組小鼠分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組灌胃等體積純凈水，灌胃體積均為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)給藥5 d。用熱板法分別測小鼠末次給藥后1、2、3 h痛閾值。小鼠的足部受熱板刺激而產(chǎn)生疼痛時(shí)，會發(fā)生舔舐后足（后足為身體支撐點(diǎn)）的特殊反應(yīng)，以接觸熱板到舔舐后足所需的時(shí)間作為痛閾值。

2.2 抗炎藥理作用實(shí)驗(yàn)[7]

2.2.1 大鼠肉芽腫實(shí)驗(yàn) 取60只SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量130～150 g，麻醉后進(jìn)行腹部切口，將50 mg棉球（青霉素消毒）植入大鼠兩側(cè)腹股溝皮下，左右各1個(gè)，縫合，誘導(dǎo)大鼠肉芽腫增生。于手術(shù)后24 h，按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、醋酸潑尼松組（5.4 mg/kg）、乳核散結(jié)片組（0.39 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（2.6 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.3 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.65 g/kg），每組10只。醋酸潑尼松組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組大鼠分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組大鼠灌胃給予等體積純凈水，灌胃體積均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)7 d。末次灌胃1 h后，處死動物，將棉球和肉芽組織一同摘出，于60 ℃干燥24 h至恒重后，稱重，空白棉球同法處理。肉芽組織與棉球的質(zhì)量減去空白棉球質(zhì)量，即為肉芽腫凈重，按動物體質(zhì)量折算成“肉芽腫質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量（100 g）”。

2.2.2 大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn)[9]取60只SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量130～150 g。按性別、體質(zhì)量機(jī)分為模型組、阿司匹林組（0.27 g/kg）、乳核散結(jié)片組（0.39 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（2.6 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.3 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.65 g/kg），每組10只。阿司匹林組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組大鼠分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組灌大鼠胃等體積純凈水，灌胃體積均為10 mL/kg，1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥前，用足趾容積測定儀測定大鼠右踝關(guān)節(jié)下容積為致炎前容積，末次給藥30 min后，大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜膠0.1 mL致炎。于致炎后1、2、3、4、5、6 h測右踝關(guān)節(jié)下容積1次。以足腫脹度為指標(biāo)。腫脹度=致炎后足趾容積-致炎前足趾容積。

2.3 調(diào)節(jié)免疫功能藥理作用實(shí)驗(yàn)[10]

2.3.1 小鼠血清溶血素實(shí)驗(yàn) 取ICR小鼠60只，體質(zhì)量18～22 g，雌雄各半，按體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、左旋咪唑組（22.75mg/kg）、乳核散結(jié)片組（0.56 g/kg)、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（3.76 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.88g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.94g/kg），每組10只。左旋咪唑組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組小鼠分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組小鼠灌胃等體積純凈水，灌胃體積均為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)3 d。末次給藥1 h后，腹腔注射5%氯化鈉溶液雞紅細(xì)胞混懸液0.2 mL進(jìn)行免疫，免疫后繼續(xù)灌胃給藥7d，第10天給藥30 min后，各組小鼠摘眼球取血，3 000 r/min（離心半徑10 cm），離心15 min，取血清用生理鹽水稀釋100倍，取稀釋血清1 mL，與5%雞紅細(xì)胞混懸液0.5 mL、補(bǔ)體（10%豚鼠的血清）0.5 mL混合，37 ℃恒溫箱保溫30 min后，置0 ℃冰箱內(nèi)中止反應(yīng)，再離心待測定。另設(shè)不加血清的空白管，即5%雞紅細(xì)胞混懸液0.5 mL，10%補(bǔ)體0.5 mL混合，在37 ℃水浴保溫30 min后，置于0 ℃冰箱中，中止反應(yīng)，2 000 r/min（離心半徑為10 cm）離心10 min，取其上清液測定光密度（OD），以O(shè)D值作為血清溶血素指標(biāo)。

2.3.2 小鼠碳粒廓清試驗(yàn) 取ICR小鼠60只，雄性，體質(zhì)量18～22 g，根據(jù)體質(zhì)量隨機(jī)分為模型組、左旋咪唑組（22.75 mg/kg）、乳核散結(jié)片組（0.56 g/kg)、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組（3.76 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組（1.88 g/kg）、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組（0.94 g/kg），每組10只。左旋咪唑組、乳核散結(jié)片組、乳痛軟堅(jiān)片高劑量組、乳痛軟堅(jiān)片中劑量組、乳痛軟堅(jiān)片低劑量組小鼠分別灌胃相應(yīng)藥物，模型組小鼠灌胃等體積純凈水，灌胃體積均為20 mL/kg，1次/d，連續(xù)7d。末次給藥1 h后，小鼠尾靜脈注射20%印度墨汁（0.1 mL/10 g)，分別于注入墨汁2 min和10 min后經(jīng)眼眶靜脈采血20 μL，加入2 mL 0.1%Na2CO3溶液中。于分光光度計(jì)波長600 nm處測OD值。按照公式計(jì)算各組廓清指數(shù)（K）和吞噬指數(shù)（α）。K=（lgOD2-lgOD10）/（t2-t1）=lg（OD2/OD10）/8。α=體質(zhì)量/（肝質(zhì)量+脾質(zhì)量）×K1/3。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 27.0軟件處理數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”（±s）表示，計(jì)量資料符合正態(tài)分布且方差齊。計(jì)量資料比較采用單因素方差分析（One way ANOVA），兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。不符合正態(tài)分布的重復(fù)測量數(shù)據(jù)，采用廣義估計(jì)方程分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 小鼠扭體實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片高劑量組小鼠扭體潛伏期長于模型組，扭體次數(shù)少于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片中劑量組扭體次數(shù)少于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠扭體潛伏期、扭體次數(shù)與羅通定組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中劑量組小鼠扭體潛伏期長于乳核散結(jié)片組，扭體次數(shù)少于乳核散結(jié)片組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片能顯著減少小鼠扭體次數(shù)，具有一定的鎮(zhèn)痛作用。（見表1）

表1 各組小鼠扭體潛伏期、扭體次數(shù)比較 （±s）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與乳核散結(jié)片組比較，dP＜0.05。

組別 n 給藥劑量 潛伏期/s 扭體次數(shù)/次模型組 10 212.42±83.59 36.41±14.81羅通定組 10 46.80 mg/kg 340.53±101.71b 17.53±6.49b乳核散結(jié)片組 10 0.56 g/kg 215.91±66.23 35.43±12.18乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 3.76 g/kg 321.93±125.64ad 18.22±6.02bd乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.88 g/kg 302.44±102.31d 22.51±8.27ad乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.94 g/kg 278.63±89.13 25.24±8.53 F 3.13 6.99 P 0.014 0.000

3.2 小鼠熱板法實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片組高劑量組小鼠給藥后2、3 h痛域值均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片中劑量組小鼠給藥后1 h痛域值高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠給藥后1h痛閾值低于羅通定組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠給藥后2、3 h痛閾值與羅通定組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠給藥后1、2 h痛閾值與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片高、中劑量組小鼠給藥后3 h痛閾值與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片低劑量組小鼠給藥后3 h痛閾值低于乳核散結(jié)片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。廣義估計(jì)方程結(jié)果顯示，組間比較Waldχ2=14.383，P=0.013，表明不同組別之間痛閾值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；時(shí)間比較，Waldχ2=5.432，P=0.066，表明不同時(shí)間點(diǎn)之間痛閾值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；組別因素與時(shí)間因素存在交互效應(yīng)（P＜0.05），表明各組痛閾值變化幅度不一致。（見表2～3）

表2 各組小鼠痛域值比較 （±s）

表2 各組小鼠痛域值比較 （±s）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與羅通定組比較，cP＜0.01，與乳核散結(jié)片組比較，dP＜0.05。

組別 n 給藥劑量 1 h 2 h 3 h Waldχ2 P模型組 10 9.71±5.92 7.82±5.19 5.83±2.27 4.441 0.109羅通定組 10 46.80 mg/kg 16.96±7.86b 7.65±2.62a 7.59±2.63 14.170 0.001乳核散結(jié)片組 10 0.56 g/kg 9.58±6.82 10.79±6.97 10.59±6.31 1.997 0.369乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 3.76 g/kg 7.46±3.19bc 10.35±5.90a 13.00±6.90a 6.130 0.047乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.88 g/kg 10.04±3.50ac 6.38±1.80a 14.82±11.34a 14.587 0.001乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.94 g/kg 6.42±3.07ac 6.38±1.79 6.16±1.75d 0.364 0.834 Waldχ2 22.009 7.388 20.637 P 0.001 0.193 0.001

表3 小鼠痛域值廣義估計(jì)方程模型效應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果

3.3 大鼠肉芽腫實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片組高、中、低劑量組大鼠肉芽質(zhì)量均低于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片組高、中、低劑量組大鼠肉芽質(zhì)量與醋酸潑尼松組、乳核散結(jié)片組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳痛軟堅(jiān)片能抑制肉芽生長。（見表4）

表4 各組大鼠肉芽質(zhì)量比較 （±s）

表4 各組大鼠肉芽質(zhì)量比較 （±s）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01。

組別 n 給藥劑量 肉芽質(zhì)量/（mg/100 g）模型組 10 59.54±9.41醋酸潑尼松組 10 5.40 mg/kg 44.83±11.31b乳核散結(jié)片組 10 0.39 g/kg 51.52±15.01乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 2.60 g/kg 48.02±8.13b乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.30 g/kg 50.59±5.52a乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.65 g/kg 49.62±10.04a F 2.28 P 0.059

3.4 大鼠足腫脹實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片高劑量組大鼠在致炎后1、3、4 h足跖腫脹度均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片中劑量組大鼠在致炎后3、4 h足跖腫脹度均低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中劑量組大鼠在致炎后1、2、3、4、5、6 h足跖腫脹度與阿司匹林組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片低劑量組大鼠在致炎后1、2、4 h足跖腫脹度高于阿司匹林組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片低劑量組大鼠在致炎后3、4、5、6 h足跖腫脹度與阿司匹林組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高劑量組大鼠在致炎后1 h足跖腫脹度低于乳核散結(jié)片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片中、低劑量組大鼠在致炎后1 h足跖腫脹度與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組大鼠在致炎后2 h足跖腫脹度與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片高、中劑量組大鼠在致炎后3 h足跖腫脹度低于乳核散結(jié)片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片低劑量組大鼠在致炎后3 h足跖腫脹度與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組大鼠在致炎后4、5、6 h足跖腫脹度與乳核散結(jié)片組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。廣義估計(jì)方程結(jié)果顯示，組間比較Waldχ2=52.079，P=0.000，表明不同組別之間足腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；時(shí)間比較，Waldχ2=59.600，P=0.000，表明不同時(shí)間點(diǎn)之間足腫脹度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；組別因素與時(shí)間因素存在交互效應(yīng)（P＞0.05），表明不同組別大鼠足腫脹度變化幅度不一致。（見表5～6）

表5 各組大鼠足腫脹度比較 （±s，mL）

表5 各組大鼠足腫脹度比較 （±s，mL）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與阿司匹林組比較，cP＜0.05；與乳核散結(jié)片組比較，dP＜0.05。

組別 n 給藥劑量/(g/kg) 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 6 h Waldχ2 P模型組 10 0.222±0.122 0.244±0.085 0.342±0.140 0.417±0.119 0.346±0.177 0.306±0.204 21.589 0.001阿司匹林組 10 0.27 0.095±0.075a 0.157±0.125 0.251±0.125 0.218±0.148b 0.172±0.141a 0.164±0.156 15.917 0.007乳核散結(jié)片 10 0.39 0.208±0.140 0.252±0.146 0.345±0.127 0.360±0.149a 0.317±0.179 0.298±0.218 9.348 0.096乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 2.60 0.099±0.110a d 0.178±0.100 0.216±0.121a d 0.257±0.127a 0.239±0.166 0.232±0.161 13.024 0.023乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.30 0.135±0.068 0.216±0.120 0.214±0.121a d 0.286±0.119a 0.231±0.210 0.227±0.232 16.296 0.006乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.65 0.196±0.141c 0.281±0.202c 0.329±0.210 0.380±0.263c 0.337±0.236 0.291±0.246 6.829 0.234 Waldχ2 15.549 7.199 12.523 17.517 9.578 5.175 P 0.008 0.206 0.028 0.004 0.088 0.395

表6 大鼠足腫脹度廣義估計(jì)方程模型效應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果

3.5 小鼠血清溶血素實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片高劑量組小鼠血清溶血素高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；乳痛軟堅(jiān)片中、低劑量組小鼠血清溶血素與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠溶血素與左旋咪唑組、乳核散結(jié)片組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表7）

表7 各組小鼠血清溶血素比較 （±s）

表7 各組小鼠血清溶血素比較 （±s）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01。

組別 n 給藥劑量 溶血素/（光密度OD）模型組 10 0.764±0.342左旋咪唑組 10 22.75 mg/kg 1.234±0.350b乳核散結(jié)片組 10 0.56 g/kg 1.137±0.430a乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 3.76 g/kg 1.155±0.205b乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.88 g/kg 1.165±0.406乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.94 g/kg 0.940±0.327 F 2.57 P 0.037

3.6 碳粒廓清實(shí)驗(yàn) 乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)均低于左旋咪唑組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。乳痛軟堅(jiān)片高、低劑量組小鼠廓清指數(shù)與乳核散結(jié)片組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乳痛軟堅(jiān)片中劑量組小鼠廓清指數(shù)高于乳核散結(jié)片組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；乳痛軟堅(jiān)片高、中、低劑量組小鼠吞噬指數(shù)與乳核散結(jié)片組比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（見表8）

表8 各組小鼠廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)比較 （±s）

表8 各組小鼠廓清指數(shù)、吞噬指數(shù)比較 （±s）

注：與模型組比較，aP＜0.05，bP＜0.01；與左旋咪唑組比較，cP＜0.05；與乳核散結(jié)片組比較，dP＜0.05。

組別 n 給藥劑量 廓清指數(shù)/（×10-2）吞噬指數(shù)模型組 10 1.90±0.84 3.14±1.00左旋咪唑組 10 22.75 mg/kg 5.43±1.22b 5.15±0.99b乳核散結(jié)片組 10 0.56 g/kg 2.73±0.52a 3.91±0.72a乳痛軟堅(jiān)片高劑量組 10 3.76 g/kg 3.27±0.90b c 4.08±0.78a c乳痛軟堅(jiān)片中劑量組 10 1.88 g/kg 3.06±0.79b c d 4.20±0.61a c乳痛軟堅(jiān)片低劑量組 10 0.94 g/kg 2.74±0.86b c 4.13±0.93a c F 18.419 5.72 P 0.000 0.000

4 討 論

目前，乳腺增生治療主要以口服激素類藥物或碘制劑為主。此外，手術(shù)也可治療乳腺增生。但上述治療存在不良反應(yīng)、依賴性、易復(fù)發(fā)、損傷大等問題，給患者造成較大的困擾。中醫(yī)藥療法以活血化瘀、疏肝理氣、調(diào)和沖任為主要治法，可以標(biāo)本兼治，且療效確切。中藥治療乳腺增生以中藥內(nèi)服為主，該類方劑大多數(shù)以柴胡、當(dāng)歸等藥物為主要組成，如柴胡舒肝散、柴青消痛顆粒等[11]。除此之外，中藥穴位貼敷、針灸、推拿、膏藥外貼等中醫(yī)外治法也可運(yùn)用于乳腺增生治療，具有較好的治療效果[12-13]。

乳痛軟堅(jiān)片基本組成藥物為柴胡、陳皮、川楝子、延胡索、當(dāng)歸、白芍、莪術(shù)、川貝母、黨參、甘草等。方中柴胡解表退熱，疏肝解郁；陳皮理氣健脾，燥濕化痰；川楝子行氣止痛；延胡索活血，行氣，止痛；當(dāng)歸補(bǔ)血調(diào)經(jīng)，活血止痛；白芍養(yǎng)血斂陰，柔肝止痛，平抑肝陽；莪術(shù)破血行氣，消積止痛；川貝母清熱化痰，散結(jié)消癰；黨參補(bǔ)脾肺之氣，補(bǔ)血生津；甘草補(bǔ)脾益氣，緩急止痛，清熱解毒，調(diào)和藥性。全方配伍，共奏疏肝解郁、化痰散結(jié)、活血止痛之功。延胡索主要有效成分延胡索乙素具有明顯止痛作用。川楝子醇提物具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用[14]。莪術(shù)的主要單體成分為姜黃素、莪術(shù)醇、β-欖香烯等，其中姜黃素具有抗炎、抗腫瘤作用，莪術(shù)醇、β-欖香烯具有抗腫瘤活性[15]。川貝母中的生物堿類成分具有良好的抗炎作用[16]。其作用機(jī)制是通過抑制炎癥反應(yīng)信號通路中MAPKs的磷酸化活性從而使炎癥介質(zhì)水平下降，并且使核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB轉(zhuǎn)錄強(qiáng)度降低[17-18]。川貝母中的貝母素甲能阻斷Nav1.7靶點(diǎn)以及其他鈉離子通道以達(dá)到鎮(zhèn)痛效果[19-20]。柴胡主要活性成分為揮發(fā)油類、柴胡皂苷類、黃酮類、香豆素類等，具有調(diào)節(jié)免疫、抗炎、退熱、保肝、抗腫瘤等多種作用[21]。當(dāng)歸中富含苯酞類、有機(jī)酸、酯類、多糖等多種化學(xué)成分，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤、治療心血管疾病、神經(jīng)保護(hù)和抗氧化等作用[22-23]。白芍主要成分白芍總苷可通過多種途徑抑制自身免疫反應(yīng)并雙向調(diào)節(jié)免疫功能，維持機(jī)體免疫耐受[24-25]。陳皮中的黃酮類、揮發(fā)油類等成分均具有抑菌消炎的作用[26]。黨參中的黨參多糖（CPP）可以增強(qiáng)環(huán)磷酰胺所導(dǎo)致免疫功能低下大鼠的免疫功能[27]。甘草總黃酮能下調(diào)一氧化氮合酶（iNOS）、環(huán)氧化酶2（COX-2）表達(dá)，降低細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）的磷酸化水平，調(diào)控RK/MAPK和PPAR-γ從而達(dá)到抗炎的功效[28]。甘草多糖具有增強(qiáng)免疫的作用，能促使T淋巴細(xì)胞的激活，從而增強(qiáng)免疫活性[29]。

本研究中鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)顯示乳痛軟堅(jiān)片可減少小鼠的扭體次數(shù)，延長潛伏期和增加小鼠痛閾值，表明乳痛軟堅(jiān)片具有明顯的鎮(zhèn)痛作用?？寡讋游飳?shí)驗(yàn)顯示，乳痛軟堅(jiān)片能顯著抑制大鼠肉芽腫的生長，降低大鼠足腫脹度，具有抗炎及抑制炎癥組織增生的作用。調(diào)節(jié)免疫藥理實(shí)驗(yàn)顯示，乳痛軟堅(jiān)片能升高小鼠血清溶血素水平、廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)，表現(xiàn)出良好調(diào)節(jié)免疫作用。

綜上所述，乳痛軟堅(jiān)片具有鎮(zhèn)痛、抗炎和調(diào)節(jié)免疫的作用，可為其臨床防治乳腺增生提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。