宋莎莎，王永芳，陳毅，李新宇

中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 皮膚病研究所，江蘇 南京 210042

痤瘡是皮膚科常見的一種慢性炎癥性疾病，主要發(fā)生于顏面和胸背多脂區(qū)，臨床主要表現(xiàn)為粉刺、丘疹、膿皰和結(jié)節(jié)等多形性皮損，好發(fā)于青春期，對(duì)青少年的心理和社交影響很大[1]。痤瘡的發(fā)病機(jī)制主要包括皮脂腺大量分泌，毛囊皮脂腺導(dǎo)管上皮過度角化，微生物尤其是痤瘡丙酸桿菌Propionibacterium acnes的定殖及炎癥和免疫反應(yīng)。機(jī)體免疫細(xì)胞如角質(zhì)形成細(xì)胞、單核細(xì)胞等在抵抗P.acnes等入侵過程中釋放白細(xì)胞介素（IL）-1、IL-8 和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等炎癥因子，這些炎癥因子將炎癥細(xì)胞趨化至毛囊周圍，引起炎性損傷[2]。

壬二酸又名杜鵑花酸，是一種來自杜鵑花的天然含有9 個(gè)碳原子的飽和直鏈二羧酸。壬二酸的抗炎和抗氧化特性已被證實(shí)，其外用可以治療酒糟鼻、尋常痤瘡、黃褐斑和炎癥后色素沉著等疾病[3]。《中國痤瘡治療指南（2019 修訂版）》推薦壬二酸是輕中度痤瘡的二線外用藥[4]。水楊酸最早是從柳樹皮中提取出的天然活性成分，屬于β-羥基酸，因其具有較好的脂溶性，更易深入毛囊皮脂腺深部而溶解粉刺，被廣泛用于治療痤瘡和脂溢性皮炎等疾病[5]。本研究體外觀察壬二酸和水楊酸對(duì)P.acnes的胞壁成分肽聚糖（PGN）和脂磷壁酸（LTA）、熱滅活P.acnes以及佛波醇酯（PMA）和細(xì)菌脂多糖（LPS）分別誘導(dǎo)的人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT 和人單核細(xì)胞THP-1 產(chǎn)生炎癥因子的影響，通過分子對(duì)接技術(shù)分析2 種藥與Toll樣受體4（TLR4）蛋白間的相互作用模式以及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證對(duì)HaCaT 細(xì)胞表面TLR4 蛋白表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 主要材料

壬二酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.15%，上海易恩化學(xué)技術(shù)有限公司，批號(hào)RH244687）；水楊酸（質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.7%，山東新華制藥股份有限公司提供，批號(hào)21036）；人角質(zhì)形成細(xì)胞永生化細(xì)胞株HaCaT、人單核細(xì)胞株THP-1（本室維持保存）；P.acnes（ATCC6919，本室維持保存）；PGN、LTA、PMA、LPS（美國Sigma 公司，貨號(hào)分別是69554、L3265、P1585、L4130）；DMEM、RPMI 1640 培養(yǎng)基、胎牛血清、2-巰基乙醇（美國Gibco 公司）；腦心浸出液肉湯（BHI，青島高科園海博生物技術(shù)有限公司）；人IL-8、IL-1β 和TNF-α ELISA 試劑盒（北京四正柏生物科技有限公司）；4%多聚甲醛（南京森貝伽生物科技有限公司）；TLR4 抗體（美國Santa cruz 公司）；Cell Counting Kit-8、Triton X-100、山羊血清、Alexa Fluor 488 標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H＋L）、辣根過氧化物酶標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（H＋L）、DAPI 染色液、BCA 蛋白定量試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司）；ECL 顯色液（美國Thermo Fisher Scientific公司）；厭氧產(chǎn)氣袋和密封培養(yǎng)罐（日本三菱MGC）。酶標(biāo)儀（瑞士Tecan 公司）；激光掃描共聚焦顯微鏡（日本Olympus 公司）。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) HaCaT細(xì)胞用含10%胎牛血清的DMEM 培養(yǎng)基培養(yǎng)，THP-1 細(xì)胞用含10%胎牛血清、0.05 mmol/L 2-巰基乙醇的RPMI 1640 培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37 ℃、5% CO2，并以1∶3 每隔2～3 d 傳代1 次，取處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 滅活P.acnes的制備 挑取在厭氧條件下血瓊脂平皿中維持培養(yǎng)的P.acnes菌落接種于BHI 培養(yǎng)基，37 ℃厭氧環(huán)境下培養(yǎng)24 h，收集菌落，用無菌PBS 洗3 次，4 ℃下以4 000 r/min 離心15 min，調(diào)整菌液濃度至4.5×107CFU/μL，置于80 ℃水浴中滅活30 min。

1.2.3 細(xì)胞增殖活力 HaCaT細(xì)胞以2×105個(gè)/mL接種于96 孔培養(yǎng)板，0.1 mL/孔，培養(yǎng)過夜后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)基，加入各濃度藥液0.2 mL；THP-1 細(xì)胞以3×105個(gè)/mL 接種于96 孔培養(yǎng)板，0.1 mL/孔，培養(yǎng)過夜后每孔加入各濃度藥液0.1 mL。每組設(shè)4 個(gè)復(fù)孔，培養(yǎng)48 h 后加入10 μL CCK-8 溶液，于培養(yǎng)箱中孵育4 h，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長處檢測吸光度（A）值。

細(xì)胞存活率＝A給藥/A對(duì)照

1.2.4 HaCaT 細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8 含量 PGN＋LTA 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)置為對(duì)照組（僅加培養(yǎng)基）、模型組（加培養(yǎng)基和刺激劑）、溶媒組（加含溶媒培養(yǎng)基和刺激劑）、壬二酸（62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 μg/mL）組和水楊酸（31.25、15.63、7.81、3.91、1.95 μg/mL）組；P.acnes誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)置為對(duì)照組、模型組、溶媒組、壬二酸（62.50、31.25、15.63、7.81 μg/mL）組和水楊酸（31.25、15.63、7.81、3.91 μg/mL）組。細(xì)胞以3×105個(gè)/mL 接種于96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，0.1 mL/孔，培養(yǎng)6 h 后更換無血清培養(yǎng)基進(jìn)行饑餓培養(yǎng)，次日棄去孔內(nèi)培養(yǎng)基，加入不同質(zhì)量濃度的藥液0.1 mL/孔，孵育16 h 或6 h 后，棄去孔內(nèi)溶液，加入PGN＋LTA（終質(zhì)量濃度 12.5 μg/mL＋12.5 μg/mL）和不同質(zhì)量濃度藥液共同作用24 h，或P.acnes（終濃度2.25×109CFU/mL）和不同質(zhì)量濃度藥液共同作用48 h，收集細(xì)胞上清液，按ELISA 試劑盒說明檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8 含量。

1.2.5 THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-1β 和TNF-α 含量 PMA＋LPS 誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)置為對(duì)照組、模型組、溶媒組、壬二酸（1 000.00、500.00、250.00、125.00、62.50、31.25 μg/mL）組和水楊酸（500.00、250.00、125.00、62.50、31.25 μg/mL）組；P.acnes誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)設(shè)置為對(duì)照組、模型組、溶媒組、壬二酸（1 000.00、500.00、250.00、125.00 μg/mL）組和水楊酸（500.00、250.00、125.00、62.50 μg/mL）組。細(xì)胞用無血清RPMI 1640 培養(yǎng)基調(diào)整成12×105個(gè)/mL 或6×105個(gè)/mL 細(xì)胞懸液接種96 孔培養(yǎng)板，加入不同質(zhì)量濃度的藥液孵育18 h 或6 h，繼續(xù)加入PMA＋LPS（終質(zhì)量濃度100 ng/mL＋500 ng/mL）和不同質(zhì)量濃度藥液共同作用48 h，或加入P.acnes（終濃度2.25×109CFU/mL或2.25×108CFU/mL）和不同質(zhì)量濃度藥液共同作用48 h，收集細(xì)胞上清液，按ELISA 試劑盒說明檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-1β 和TNF-α 含量。

1.2.6 分子對(duì)接分析壬二酸、水楊酸與TLR4 蛋白受體的分子間相互作用模式 利用PubChem 數(shù)據(jù)庫（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）分別下載壬二酸、水楊酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)文件，再導(dǎo)入Chem 3D（v15.0）軟件生成3D 化學(xué)結(jié)構(gòu)并使其能量最小化。通過RCSB PDB 數(shù)據(jù)庫（https://www.rcsb.org/）下載TLR4蛋白的晶體結(jié)構(gòu)文件，采用PyMOL 軟件去除蛋白結(jié)構(gòu)中的溶劑和有機(jī)物，然后利用AutoDock（v4.2.6）軟件對(duì)蛋白結(jié)構(gòu)進(jìn)行加氫、計(jì)算電荷、添加原子類型。由Autodock vina 分別實(shí)施壬二酸、水楊酸和TLR4 蛋白受體的分子對(duì)接，再利用PLIP 分別分析壬二酸、水楊酸和TLR4 蛋白受體對(duì)接的分子間相互作用模式，最后通過PyMOL 軟件可視化結(jié)果。

1.2.7 細(xì)胞免疫熒光檢測TLR4 蛋白表達(dá) HaCaT細(xì)胞懸液1 mL（1×105個(gè)/mL）接種于直徑15 mm玻底培養(yǎng)皿，待細(xì)胞貼壁后加入藥液（壬二酸62.50 μg/mL、水楊酸31.25 μg/mL）孵育16 h，棄去孔內(nèi)藥液后加入PGN＋LTA（終濃度50 μg/mL＋50 μg/mL）或P.acnes（終濃度2.25×109CFU/mL）及配制好的藥液（壬二酸62.50 μg/mL、水楊酸31.25 μg/mL），繼續(xù)作用24 h。無菌PBS 漂洗3 次，經(jīng)4%多聚甲醛固定、0.5% Triton X-100 破膜、10%山羊血清封閉后，加入TLR4（1∶50）抗體，置4 ℃過夜，棄一抗，PBS 清洗，加入Alexa Fluor 488 標(biāo)記山羊抗小鼠IgG（1∶500），避光孵育1 h，DAPI 核染5 min，激光共聚焦顯微鏡（×100）觀察并拍照。

1.2.8 壬二酸和水楊酸組合物對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)HaCaT 產(chǎn)生IL-8 及THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α的影響 將壬二酸和水楊酸按15∶1 的比例配制成組合物，即質(zhì)量濃度為125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 μg/mL。組合物對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)后HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 以及THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α的影響，實(shí)驗(yàn)步驟同1.2.4 和1.2.5。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，通過單因素方差分析比較總體的組間差異，再采用LSD-t檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較。

2 結(jié)果

2.1 壬二酸和水楊酸對(duì)HaCaT 和THP-1 細(xì)胞增殖的影響

細(xì)胞分別經(jīng)62.50～1 000.00 μg/mL 的壬二酸和水楊酸作用48 h 后，發(fā)現(xiàn)壬二酸質(zhì)量濃度為1 000.00、500.00 μg/mL 時(shí)，HaCaT 細(xì)胞的存活率分別為16%、35%，而壬二酸質(zhì)量濃度為250.00 μg/mL 及以下時(shí)，HaCaT 細(xì)胞的存活率均高于75%；相同受試質(zhì)量濃度范圍內(nèi)的壬二酸對(duì)THP-1 細(xì)胞活力無明顯影響。1 000.00 μg/mL 水楊酸作用48 h，HaCaT 細(xì)胞存活率為43%，THP-1 細(xì)胞存活率為61%，而在500 μg/mL 及以下質(zhì)量濃度，2 種細(xì)胞的存活率均高于75%，見圖1。

圖1 CCK-8 法檢測藥物作用48 h 對(duì)HaCaT 細(xì)胞和THP-1 細(xì)胞增殖的影響（，n＝3）Fig.1 Effect of drugs on the cell proliferation in HaCaT and THP-1 cells by CCK-8 method (，n＝3)

因此，在后續(xù)的HaCaT 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，選擇壬二酸62.50 μg/mL、水楊酸31.25 μg/mL 為最大實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度；THP-1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中壬二酸的最大實(shí)驗(yàn)質(zhì)量濃度為1 000.00 μg/mL，水楊酸為500.00 μg/mL。

2.2 壬二酸和水楊酸對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)后HaCaT細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的影響

如圖2 所示，不同受試濃度的壬二酸、水楊酸對(duì)PGN＋LTA 或熱滅活P.acnes誘導(dǎo)后HaCaT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 均表現(xiàn)出一定的抑制作用，PGN＋LTA誘導(dǎo)后，壬二酸：半數(shù)效應(yīng)濃度（EC50）為5.17 μg/mL，水楊酸EC50為3.50 μg/mL。熱滅活P.acnes誘導(dǎo)后，壬二酸EC50為2.76 μg/mL，水楊酸EC50為2.80 μg/mL。且隨著藥物濃度的增加，IL-8 含量明顯下降，抑制作用呈劑量相關(guān)性。

圖2 壬二酸和水楊酸對(duì)PGN＋LTA（A）或熱滅活P. acnes（B）誘導(dǎo)后的HaCaT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的影響（，n＝3）Fig.2 Effects of azelaic acid and salicylic acid on IL-8 production in HaCaT cells induced by PGN+LTA (A) and heat inactivated P. acnes (B) stimulants (，n＝3)

2.3 壬二酸和水楊酸對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)后THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α 的影響

如圖3 所示，不同受試濃度的壬二酸、水楊酸對(duì)PMA＋LPS 或熱滅活P.acnes誘導(dǎo)后的THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α 均有一定的抑制作用。PGN＋LTA 誘導(dǎo)后壬二酸抑制THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β，壬二酸EC50為1.05 μg/mL，水楊酸EC50為2.16 μg/mL，PGN＋LTA 誘導(dǎo)后壬二酸抑制THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生TNFα，壬二酸EC50為3.74 μg/mL；水楊酸的抑制率均＞90%；熱滅活P.acnes誘導(dǎo)后抑制THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 中，壬二酸EC50為3.04 μg/mL，水楊酸EC50為2.17 μg/mL；熱滅活P.acnes誘導(dǎo)后抑制THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α 中，壬二酸EC50為4.05 μg/mL，水楊酸EC50為3.02 μg/mL。且隨著藥物濃度的增加，IL-1β 和TNFα 含量均明顯下降，呈量效關(guān)系。

圖3 壬二酸和水楊酸對(duì)PMA＋LPS（A）或熱滅活P. acnes（B）誘導(dǎo)后THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α 的影響（，n＝3）Fig.3 Effects of azelaic acid and salicylic acid on expression of IL-1β and TNF-α in THP-1 cells after induced by PMA+LPS(A) and heat inactivated P. acnes (B) stimulants (，n＝3)

2.4 壬二酸和水楊酸與TLR4 蛋白的分子間相互作用模式分析

如圖4 所示，壬二酸可通過氫鍵、疏水相互作用、鹽橋相互作用與TLR4 蛋白受體結(jié)合，親和力為?27.72 kJ/mol；水楊酸可通過氫鍵、疏水相互作用、鹽橋相互作用、π-堆積（平行）作用與TLR4 蛋白受體結(jié)合，親和力為?31.5 kJ/mol。結(jié)果表明，壬二酸、水楊酸均能與TLR4 蛋白受體有效地結(jié)合。

圖4 壬二酸和水楊酸與TLR4 蛋白受體的分子對(duì)接Fig.4 Molecular docking of azelaic acid,salicylic acid and TLR4 protein receptor

2.5 壬二酸和水楊酸處理后對(duì)HaCaT 細(xì)胞表面TLR4 蛋白表達(dá)的影響

與對(duì)照組相比，PGN＋LTA 或P.acnes刺激后細(xì)胞表面TLR4 蛋白熒光強(qiáng)度明顯增高（P＜0.01），62.50 μg/mL 壬二酸預(yù)處理后，PGN＋LTA 刺激的HaCaT 細(xì)胞表面TLR4 蛋白表達(dá)明顯降低（P＜0.01）；而31.25 μg/mL 水楊酸預(yù)處理后能明顯降低滅活后的P.acnes誘導(dǎo)的細(xì)胞表面TLR4 蛋白表達(dá)（P＜0.05），見圖5、6。

圖6 壬二酸和水楊酸對(duì)不同刺激劑誘導(dǎo)后HaCaT 細(xì)胞TLR4 相對(duì)蛋白表達(dá)量的影響（，n＝3）Fig.6 Effects of azelaic acid and salicylic acid on relative protein level of TLR4 in HaCaT cells induced by different stimulants (，n＝3)

2.6 壬二酸和水楊酸及兩者15∶1 組合物對(duì)刺激劑誘導(dǎo)后炎癥因子EC50 值比較

根據(jù)ELISA 結(jié)果計(jì)算EC50值發(fā)現(xiàn)，對(duì)PGN＋LTA 聯(lián)合刺激以及P.acnes滅活菌誘導(dǎo)HaCaT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，兩者聯(lián)合應(yīng)用后效價(jià)強(qiáng)度增高，同時(shí)組合物對(duì)于P.acnes滅活菌誘導(dǎo)THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 的抑制作用也表現(xiàn)出顯著的聯(lián)合應(yīng)用優(yōu)勢，見表1。

表1 壬二酸和水楊酸及兩者組合物對(duì)刺激劑誘導(dǎo)后炎癥因子EC50 值比較Table 1 Comparison on EC50 values of azelaic acid,salicylic acid and their mixture on inflammatory factor induced by stimulants

3 討論

痤瘡俗稱粉刺、青春痘，是一種累及毛囊皮脂腺的慢性炎癥性皮膚疾病，發(fā)病因素較多，主要影響皮脂腺豐富的區(qū)域，嚴(yán)重的可導(dǎo)致疤痕和毀容，是一種對(duì)患者的心理和身體健康有較大影響的疾病。P.acnes是體表的正常菌群之一，為革蘭陽性厭氧菌，是痤瘡發(fā)病和炎癥維持的關(guān)鍵因素之一。P.acnes通過激活與痤瘡相關(guān)的關(guān)鍵細(xì)胞上Toll 樣受體（TLRs）表達(dá)，可轉(zhuǎn)錄激活轉(zhuǎn)錄因子蛋白家族（NFκB）信號(hào)通路，誘導(dǎo)下游促炎細(xì)胞因子如IL-1、IL-8、IL-6 和TNF-α 等表達(dá)，引起炎癥反應(yīng)[6]，是天然免疫系統(tǒng)的重要模式識(shí)別分子。角質(zhì)形成細(xì)胞是人類皮膚中抵御外源性病原體的第一道屏障，細(xì)胞中TLRs 可識(shí)別廣泛的微生物或其成分的配體，包括PGN、LTA、LPS 和細(xì)菌脂蛋白等[7]。P.acnes的主要胞壁成分PGN 和LTA 能刺激免疫細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，LPS 作為革蘭陰性菌的組成部分亦是一種免疫刺激因子[8]。TLR4 是角質(zhì)形成細(xì)胞表面存在的TLRs 中的一個(gè)亞型。過往研究報(bào)導(dǎo)LPS 和LTA 均能觸發(fā)TLR4 的激活，導(dǎo)致下游IL-8 產(chǎn)生的級(jí)聯(lián)反應(yīng)[9-10]。本研究中細(xì)胞免疫熒光結(jié)果也已證實(shí)，給予PGN＋LTA 聯(lián)合應(yīng)用刺激，或用滅活P.acnes刺激后均能上調(diào)HaCaT 細(xì)胞表面TLR4 蛋白的表達(dá)。

痤瘡的治療主要包括口服藥、外用藥及物理治療等，外用藥治療中的維甲酸應(yīng)用較多，但該藥易引起局部刺激?？股貙?duì)痤瘡的治療雖然有效，但隨之而來的耐藥性亦成為一個(gè)巨大的挑戰(zhàn)[11-12]，尋找和使用安全有效的局部用藥一直是臨床治療痤瘡的重要需求。

壬二酸具有多種藥理作用，能夠抑制線粒體代謝和微生物蛋白的合成，具有抗炎、抗菌以及改變毛囊表皮過度增殖和炎癥反應(yīng)等活性，有利于痤瘡的治療[13-15]。作為一種非甾體類、亦具有抗炎活性的物質(zhì)，水楊酸還有抑制真菌和細(xì)菌的作用，同時(shí)具有低濃度下調(diào)節(jié)角質(zhì)細(xì)胞、高濃度松解剝脫角質(zhì)細(xì)胞能力及美白作用，它在治療痤瘡的同時(shí)也對(duì)痤瘡炎癥后的色素沉著有淡化作用[16-17]，因此應(yīng)用較為廣泛。但是2 種藥物治療痤瘡的機(jī)制有必要進(jìn)一步研究。本研究結(jié)果表明，壬二酸和水楊酸對(duì)P.acnes成分PGN＋LTA，或P.acnes本身誘導(dǎo)的HaCaT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8，以及THP-1 細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β 和TNF-α，均具有較強(qiáng)的抑制作用。分子對(duì)接結(jié)果表明，壬二酸、水楊酸均能與TLR4 蛋白受體有效地結(jié)合。體外實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步表明，壬二酸、水楊酸對(duì)上述刺激劑誘導(dǎo)下的HaCaT 細(xì)胞表面TLR4 蛋白的表達(dá)也有明顯的下調(diào)作用，這些結(jié)果均提示，壬二酸和水楊酸能抑制P.acnes引起的角質(zhì)形成細(xì)胞表面TLR4 蛋白的表達(dá)，以及下游促炎因子IL-8 的產(chǎn)生，和抑制P.acnes誘導(dǎo)的單核細(xì)胞IL-1β 和TNF-α 的產(chǎn)生，這可能是2 種藥物在臨床上治療痤瘡有效的機(jī)制之一。

另外，本研究還發(fā)現(xiàn)將壬二酸和水楊酸按15∶1聯(lián)合處理細(xì)胞后，再測定PGN＋LTA 或P.acnes誘導(dǎo)的HaCaT 細(xì)胞產(chǎn)生IL-8 的水平以及P.acnes誘導(dǎo)的THP-1 細(xì)胞IL-1β 的產(chǎn)生，發(fā)現(xiàn)聯(lián)合用藥時(shí)的效價(jià)強(qiáng)度優(yōu)于單獨(dú)用藥。這一結(jié)果也提示，壬二酸與水楊酸的聯(lián)合作用可能更有利于發(fā)揮痤瘡治療中的抗炎效果。在痤瘡治療中壬二酸可能對(duì)皮脂的產(chǎn)生并不表現(xiàn)抑制作用[18]，而水楊酸為一種脂溶性物質(zhì)，它可與毛囊中的表皮脂質(zhì)和皮脂腺脂質(zhì)相溶，具有良好的溶解角質(zhì)和消除粉刺的特性[19-20]，結(jié)合以上的結(jié)果，本研究將壬二酸與水楊酸聯(lián)合應(yīng)用，不僅利用了各自的作用特點(diǎn)，同時(shí)在對(duì)抗痤瘡促炎因子的產(chǎn)生中更有優(yōu)勢。

綜上所述，壬二酸和水楊酸能抑制P.acnes引起的角質(zhì)形成細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞中促炎因子的產(chǎn)生，同時(shí)還能減少角質(zhì)形成細(xì)胞表面TLR4 蛋白的表達(dá)，從而發(fā)揮治療痤瘡的作用。2 種藥物聯(lián)合應(yīng)用后治療痤瘡的其他機(jī)制仍值得深入探討。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突