周春暉，龔麗妍，丘智聰，王偉廷，范 瑞

（廣東輕工職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品與生物技術(shù)學(xué)院，廣東 廣州 510030）

越橘（Vɑccinium vitis-idɑeɑLinn.）原產(chǎn)于歐洲大陸北部和北美洲北部森林，在我國(guó)的吉林、內(nèi)蒙古、新疆、黑龍江等地區(qū)也有分布。越橘中含有原花青素、花青素、有機(jī)酸及多酚類、黃酮醇類物質(zhì)等多種營(yíng)養(yǎng)成分[1-4]，具有抗氧化、抗菌、抗炎、抗癌、改善肝功能和降血糖等功能[5-9]。原花青素作為越橘的主要功效成分，是一種具有獨(dú)特分子結(jié)構(gòu)的生物類黃酮物質(zhì)[10]，在抗氧化、降血脂、降血壓、抗糖尿病及促進(jìn)和活化視網(wǎng)膜的視紅素再合成等功能上均具有顯著作用[11-15]。

原花青素的提取方法有溶劑提取法[16]、酶解提取法[17]、超臨界CO2提取法[18-19]、超聲波輔助提取法[20]、微波輔助提取法[21]等。酶解提取法可以更好地溶出生物活性物質(zhì)，提高得率[22]。王海波等[23]使用雙酶（纖維素酶-果膠酶）提取葡萄皮渣中的原花青素，經(jīng)過(guò)優(yōu)化工藝條件后提取的原花青素含量達(dá)22.914 mg/g。超聲波輔助提取法可加速破壞植物細(xì)胞壁，迅速溶出細(xì)胞內(nèi)容物，能大幅縮短提取時(shí)間，提高提取率。邢穎等[24]以板栗為原材料，采用超聲波輔助纖維素酶法提取原花青素，提取量為21.03 mg/g，高于單獨(dú)用酶解法的提取量（10.12 mg/g）。本文以越橘為原料，采用超聲波輔助雙酶酶解法提取越橘中原花青素，響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)獲得原花青素的最佳提取條件，同時(shí)對(duì)提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，以期為越橘功效成分的提取及后續(xù)功能性食品的開(kāi)發(fā)提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

1.1.1 材料與試劑

越橘干果：由烏魯木齊新邊界貿(mào)易有限公司提供。

鹽酸、正丁醇、三羥甲基氨基甲烷、鄰苯三酚、抗壞血酸、硫酸亞鐵、水楊酸、氫氧化鈉（粒）、無(wú)水乙醇、硫酸鐵銨（NH4Fe(SO4)2·12H2O）：均為分析純，廣州市海珠化學(xué)試劑有限公司；1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）：合肥巴斯夫生物科技有限公司；原花青素標(biāo)準(zhǔn)品（UV＞98%）：安徽酷爾生物工程有限公司；纖維素酶（10 000 U/g）：南寧龐博生物工程有限公司；果膠酶（10 000 U/g）：寧夏和氏壁生物技術(shù)有限公司。

1.1.2 儀器與設(shè)備

pH-100 型筆式酸度計(jì)：上海力辰邦西儀器科技有限公司；101-3AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱、FW177型中草藥粉碎機(jī)、DK-98-IIA 型電熱恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司；JY96-IIN 型超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)：寧波新芝生物科技股份有限公司；SC-3610型高容量低速離心機(jī)：安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；UV-5200型紫外分光光度計(jì)：上海元析儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 越橘的預(yù)處理及原花青素的提取

越橘預(yù)處理：將越橘干果置于60 ℃的電熱鼓風(fēng)干燥箱中處理4 h，然后進(jìn)行粉碎并過(guò)80 目篩，越橘粉置于干燥器中密封備用。

原花青素提取：稱量越橘粉1.00 g，加入一定比例的纖維素酶和果膠酶，加去離子水，調(diào)節(jié)pH，置于55 ℃恒溫水浴鍋中酶解，滅酶，加入體積分?jǐn)?shù)60%乙醇溶液進(jìn)行超聲波提?。üβ?20 W，提取2 s，間歇4 s，60 ℃），然后以5 000 r/min 離心20 min，取上清液，干燥，得到越橘原花青素粗提物。

1.2.2 越橘原花青素提取的單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇料液比、酶解pH、酶解時(shí)間、纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比（酶的總添加量保持質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%不變）、超聲時(shí)間為影響因素，以越橘原花青素得率為考察指標(biāo)設(shè)計(jì)單因素試驗(yàn)，研究其對(duì)越橘原花青素提取得率的影響。各單因素的條件和范圍設(shè)置如下：酶解pH 5.0，酶解時(shí)間90 min，纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比1∶1，超聲波時(shí)間30 min，液料比分別為1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30（g/mL）；酶解pH 5.0，料液比1∶25（g/mL），酶解時(shí)間90 min，超聲時(shí)間30 min，纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比分別為1.0∶0.6、1.0∶0.8、1.0∶1.0、1.0∶1.2、1.0∶1.4；料液比1∶25（g/mL），酶解時(shí)間90 min，纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比1∶1.2，超聲時(shí)間30 min，酶解pH 分別為3.0、4.0、5.0、6.0 和7.0；酶解pH 5.0，料液比1∶25（g/mL），纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比1∶1.2，超聲時(shí)間30 min，酶解時(shí)間分別為0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h；酶解pH 5，料液比1∶25（g/mL），酶解時(shí)間90 min，纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1∶1.2，超聲時(shí)間分別為20、30、40、50、60 min。

1.2.3 越橘原花青素提取的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)

基于響應(yīng)面中心組合試驗(yàn)的設(shè)計(jì)原則和單因素試驗(yàn)結(jié)果的方差分析，挑選出影響越橘原花青得率的顯著因素，分別為料液比、酶解pH值和超聲波提取時(shí)間，以這3 個(gè)顯著因素為響應(yīng)面優(yōu)化因素，以越橘原花青素得率為響應(yīng)值，采用Design-Expert 10 軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn)的因素和水平，具體見(jiàn)表1。

表1 越橘原花青素提取工藝響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)Table 1 Response surface optimization experimental factor level design for bilberry proanthocyanidin extraction technique

1.2.4 越橘原花青素提取得率的測(cè)定

1.2.4.1 原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱量原花青素標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用無(wú)水乙醇溶解并定容至10 mL，分別吸取0、0.10、0.25、0.50、1.00、1.50 mL 該溶液于10 mL 容量瓶中，加入乙醇至刻度線，搖勻，分別移取1 mL 不同濃度溶液至10 mL容量瓶中，并加入6 mL 鹽酸-正丁醇（5∶95）溶液、0.2 mL硫酸鐵銨溶液，混合均勻，置于沸水中40 min，然后立即在冰水中冷卻至常溫，于546 nm處測(cè)定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo)，原花青素質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出回歸方程。

1.2.4.2 越橘原花青素的測(cè)定

取越橘原花青素提取液移至具塞容量瓶中，60%乙醇定容至刻度線，吸取1 mL 樣液于10 mL 具塞比色管中，精密加入鹽酸-正丁醇（5∶95）溶液6 mL，硫酸鐵銨溶液0.2 mL，混合均勻并密封，置沸水中加熱40 min 后取出，立即置冰水中冷卻至室溫，測(cè)定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算原花青素質(zhì)量濃度。越橘原花青素得率的計(jì)算公式如下：

式中：c為越橘原花青素的質(zhì)量濃度，μg/mL；V為提取越橘原花青素的上清液體積，mL；n為提取液稀釋倍數(shù)；m為越橘粉的質(zhì)量，g。

1.2.5 越橘原花青素提取液體外抗氧化活性的測(cè)定

1.2.5.1 羥基自由基（·OH）清除能力

參考宋昱等[25]和張鏡等[26]的方法，并加以改進(jìn)。向5 支比色管中依次加入1 mL 質(zhì)量濃度為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L 的越橘原花青素粗提物溶液，然后分別加入1.0 mL 9 mmol/L 的硫酸亞鐵、1.0 mL 9 mmol/L 的水楊酸-乙醇溶液、1.0 mL 8.8 mmol/L 的過(guò)氧化氫溶液，37 ℃恒溫水浴30 min，510 nm測(cè)定其吸光度，同時(shí)以同質(zhì)量濃度的VC為對(duì)照。·OH清除率的計(jì)算公式如下：

式中：A1為加入蒸餾水代替越橘原花青素粗提物溶液的空白對(duì)照液的吸光度；A2為加入越橘原花青素粗提物溶液的吸光度；A3為用蒸餾水代替顯色劑（過(guò)氧化氫）的吸光度。

1.2.5.2 DPPH自由基清除能力

參照王晗等[27]的方法并加以改進(jìn)。稱取0.05 g的DPPH，用500 mL 無(wú)水乙醇溶解，定容于棕色容量瓶中，配成0.1 mmol/L 的DPPH 溶液，為防止紫外線照射，放置陰暗處備用。另取抗壞血酸，用無(wú)水乙醇進(jìn)行溶解，配制成質(zhì)量濃度分別為0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L的溶液，分別取配制好的不同質(zhì)量濃度的樣品溶液1 mL，置于10 mL 試管中，加入3 mL DPPH 溶液，30 ℃條件下避光反應(yīng)30 min，于517 nm處測(cè)其吸光度，同樣方法測(cè)抗壞血酸梯度溶液的吸光度，同時(shí)以同質(zhì)量濃度的VC為對(duì)照。DPPH自由基清除率的計(jì)算公式如下：

式中：As′為1.0 mL 樣品溶液+3.0 mL 無(wú)水乙醇的吸光度；As為1.0 mL 無(wú)水乙醇+3.0 mL DPPH 溶液的吸光度；A′為1.0 mL 樣品溶液+3.0 mL DPPH 溶液的吸光度。

1.2.5.3 超氧陰離子自由基（O-2·）清除能力

參照金寧等[28]的方法并加以改進(jìn)。向20 mL 試管中添加9 mL pH 8.2 的Tris-HCl 緩沖液，于25 ℃下恒溫水浴20 min，向試管中加入40 mL鄰苯三酚溶液（45 mmol/L 鄰苯三酚，10 mmol/L HCl），25 ℃中預(yù)熱后立即混合并倒入1 cm的比色皿中，添加9 mL Tris-HCl緩沖液作為對(duì)照，在25 ℃下每隔30 s測(cè)定325 nm處的吸光度，自氧化速率控制在0.06/min，鄰苯三酚自氧化3 min后，迅速加入1滴VC，立即混合，室溫靜置5 min后，測(cè)定吸光度，即A0。在上述Tris-HCl緩沖液中，預(yù)先分別加入質(zhì)量濃度0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mg/L的原花青素粗提物溶液1.0 mL，再按上述方法測(cè)定鄰苯三酚自氧化體系的吸光度As和空白試劑吸光度As′，同時(shí)以同質(zhì)量濃度的VC 為對(duì)照。O-2·清除率的計(jì)算公式如下：

式中：A0為加入原花青素樣品后的鄰苯三酚自氧化速率吸光度；As為鄰苯三酚自氧化速率吸光度；As′為蒸餾水作為空白試劑的吸光度。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

響應(yīng)面試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Design-Expert 10 軟件處理，其他數(shù)據(jù)使用Excel 2019軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值為縱坐標(biāo)，原花青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制準(zhǔn)曲線，結(jié)果如圖1所示。原花青素標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：y=0.002 5x+0.004 6，R2=0.998 9。

圖1 原花青素溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of proanthocyanidin solution

2.2 越橘原花青素提取單因素試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 料液比對(duì)越橘原花青素得率的影響

如圖2 所示，隨著溶劑的增多，越橘原花青素得率呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng)料液比為1∶25（g/mL）時(shí)，原花青素得率達(dá)到最高；當(dāng)料液比為1∶30（g/mL）時(shí)，得率反而降低，可能是因?yàn)榱弦罕葹?∶25（g/mL）時(shí)，越橘粉中的原花青素已經(jīng)全部溶出，繼續(xù)增加提取溶劑的用量，使超聲波破碎細(xì)胞的程度下降，提取的有效成分減少，得率也隨之降低。

圖2 料液比對(duì)越橘原花青素得率的影響Fig.2 Effect of material-liquid ratio on the yield of bilberry proanthocyanidins

2.2.2 纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比對(duì)越橘原花青素得率的影響

如圖3所示，纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比在1.0∶0.6～1.0∶1.2 范圍內(nèi)得率呈緩慢上升趨勢(shì)，且變化較小。原因可能是，當(dāng)酶的總用量不變時(shí)，隨著果膠酶占比的增加，酶對(duì)越橘粉細(xì)胞壁的降解作用增加，將更多的原花青素釋放到溶劑中[29]，從而使得原花青素得率逐漸提高。當(dāng)纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1.0∶1.2時(shí)，得率達(dá)到最大值；當(dāng)纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1.0∶1.4時(shí)，得率緩慢下降，可能是因?yàn)樵诶w維素酶與果膠酶的質(zhì)量比為1.0∶1.2時(shí)，纖維素酶和果膠酶已使越橘粉中的原花青素最大限度地溶出，該條件下兩種酶發(fā)揮的作用最大，達(dá)到比較高的得率，若果膠酶占比再增大，兩種酶的復(fù)合作用會(huì)減弱，得率隨之下降。由此可得，纖維素酶與果膠酶的最佳質(zhì)量比為1.0∶1.2。

圖3 纖維素酶與果膠酶的質(zhì)量比對(duì)越橘原花青素得率的影響Fig.3 Effect of mass ratio of cellulase to pectinase on the yield of bilberry proanthocyanidins

2.2.3 酶解pH對(duì)越橘原花青素得率的影響

如圖4所示，酶解pH為3.0、4.0、5.0時(shí)，隨著酶解pH的升高，越橘原花青素得率大幅提高，當(dāng)pH為5.0時(shí)，得率達(dá)到最大，可能是因?yàn)樯倭克峥梢源蜷_(kāi)氫鍵和疏水鍵，以及蛋白質(zhì)多糖和原花青素相互連接，以形成更多的游離多酚類物質(zhì)和原花青素；酸可以抑制酚類物質(zhì)與金屬離子之間的沉淀反應(yīng)，從而提高原花青素得率。pH太低，原花青素的溶解度會(huì)降低，得率降低，可能是因?yàn)樵ㄇ嗨睾卸鄠€(gè)羥基，一般呈弱酸性，易溶于堿性溶液，酸度過(guò)低會(huì)降低其溶解度[30]。當(dāng)酶解pH大于5.0時(shí)，越橘原花青素得率呈下降趨勢(shì)，可能是pH過(guò)高時(shí)會(huì)造成酶失活，使得越橘粉細(xì)胞壁酶解不夠完全，造成得率下降。因此，確定酶解的適宜pH為5.0。

圖4 酶解pH對(duì)越橘原花青素得率的影響Fig.4 Effect of enzymolysis pH on the yield of bilberry proanthocyanidins

2.2.4 酶解時(shí)間對(duì)越橘原花青素得率的影響

如圖5 所示，酶解時(shí)間在0.5～1.5 h 時(shí)，越橘原花青素得率一直在升高，當(dāng)酶解時(shí)間達(dá)到1.5 h時(shí)，得率達(dá)到最大值。原因可能是：酶解時(shí)間為0.5 h時(shí)，還有較多的底物未被酶解，酶與底物反應(yīng)不完全，溶出的原花青素不多，因此得率較低；酶解時(shí)間為1.0 h 時(shí)，隨著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，酶與底物接觸機(jī)會(huì)越大，溶出的原花青素逐漸變多，故得率升高，此時(shí)酶與底物的反應(yīng)還不夠完全；酶解時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)至1.5 h時(shí)，酶與底物反應(yīng)完全，基本溶出了底物的全部原花青素，所以得率達(dá)到最大值。當(dāng)酶解時(shí)間大于1.5 h 時(shí)，得率開(kāi)始下降，可能是因?yàn)殡S著酶解時(shí)間的延長(zhǎng)，原花青素的穩(wěn)定性不斷下降，導(dǎo)致了得率逐漸降低。綜合考慮時(shí)間成本與能源消耗，確定酶解的適宜時(shí)間為1.5 h。

圖5 酶解時(shí)間對(duì)越橘原花青素得率的影響Fig.5 Effect of enzymolysis time on the yield of bilberry proanthocyanidins

2.2.5 超聲時(shí)間對(duì)越橘原花青素得率的影響

如圖6 所示，超聲時(shí)間為20～50 min 時(shí)，越橘原花青素的得率隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸升高；超聲時(shí)間為50 min 時(shí)，原花青素得率達(dá)到最大值，可能是隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，超聲波對(duì)越橘細(xì)胞組織不斷地破壞，使原花青素不斷溶出，得率不斷升高，此時(shí)原花青素基本上已經(jīng)提取完全，得率也達(dá)到了最大值9.27%；當(dāng)超聲時(shí)間大于50 min 時(shí)，得率反而下降，可能是繼續(xù)延長(zhǎng)超聲時(shí)間，原花青素的結(jié)構(gòu)被破壞導(dǎo)致。由此可得，超聲波處理的適宜時(shí)間為50 min。

圖6 超聲時(shí)間對(duì)越橘原花青素得率的影響Fig.6 Effect of ultrasound time on the yield of bilberry proanthocyanidins

2.3 越橘原花青素提取響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上進(jìn)行響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，方差分析見(jiàn)表3。對(duì)表2中的數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸分析，得到各因素與越橘原花青素得率（Y）的二次多項(xiàng)式方程為：Y＝9.29＋0.26A－0.082B-0.21C＋0.13AB＋0.27AC－0.22BC－0.29A2-0.36B2-0.47C2。

表2 響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果Table 2 Response surface optimization experimental design and results

由表3可知，各因素對(duì)越橘原花青素得率的影響大小排序?yàn)椋篈（料液比）＞C（超聲時(shí)間）＞B（酶解pH）。其中，一次項(xiàng)A和二次項(xiàng)B2、C2對(duì)越橘原花青素得率的影響均達(dá)極顯著水平（P＜0.01），一次項(xiàng)C、交互項(xiàng)AC、二次項(xiàng)A2對(duì)越橘原花青素得率的影響均達(dá)顯著水平（P＜0.05）?；貧w模型的P值為0.002 9，失擬項(xiàng)不顯著（P=0.1710＞0.05），表明擬合獲得的模型方程極顯著，回歸模型與試驗(yàn)擬合良好，得出的越橘原花青素得率是可靠、有意義的。

2.3.2 各因素交互作用分析

利用Design-Expert 10軟件繪制了各因素之間兩兩交互作用的響應(yīng)面圖和等高線圖，具體見(jiàn)圖7。料液比與超聲時(shí)間的交互作用響應(yīng)面圖陡峭，且等高線圖呈橢圓形，說(shuō)明因素A與因素C的交互作用對(duì)越橘原花青素得率的影響顯著，這與方差分析的結(jié)果一致。

圖7 各因素交互作用對(duì)越橘原花青素得率影響的響應(yīng)面圖及等高線圖Fig.7 Response surface and contour plots of the effect of interaction of the various factors on the yield of bilberry proanthocyanidins

對(duì)回歸模型進(jìn)行分析，得到越橘原花青素提取的最佳條件：料液比為1∶29.186（g/mL），酶解pH 為4.882，超聲時(shí)間為51.563 min，在此條件下，越橘原花青素得率最高，為9.36%。為了方便操作，將提取條件調(diào)整為：料液比1∶30（g/mL），酶解pH為5.0，超聲時(shí)間50 min。經(jīng)驗(yàn)證試驗(yàn)得出，越橘原花青素的得率平均值為9.38%，與預(yù)測(cè)值偏差較小，說(shuō)明此工藝優(yōu)化具有一定的可靠性。

2.4 越橘原花青素體外抗氧化活性測(cè)定結(jié)果

2.4.1 羥基自由基清除能力

如圖8 所示，隨著質(zhì)量濃度的增大，越橘原花青素粗提物溶液和抗壞血酸對(duì)·OH清除率均呈不斷上升趨勢(shì)。越橘原花青素質(zhì)量濃度高于0.8 mg/L 時(shí)，其對(duì)·OH 的清除能力趨于平緩，清除率最高達(dá)97.84%，而抗壞血酸最高僅81.49%，明顯低于越橘原花青素，二者的半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.354 mg/L和0.642 mg/L，抗壞血酸高于越橘原花青素。因此，越橘原花青素和抗壞血酸對(duì)羥基自由基都有較強(qiáng)的清除能力，且與質(zhì)量濃度有一定的量效關(guān)系，前者的清除能力強(qiáng)于后者。

圖8 越橘原花青素和抗壞血酸對(duì)羥基自由基的清除能力Fig.8 Scavenging capacity of bilberry proanthocyanidins and ascorbic acid against hydroxyl radicals

2.4.2 DPPH自由基清除能力

如圖9 所示，隨著質(zhì)量濃度的增大，越橘原花青素粗提物溶液和抗壞血酸對(duì)DPPH 自由基的清除率均不斷上升。越橘原花青素和抗壞血酸對(duì)DPPH 自由基都有較強(qiáng)的清除能力，與質(zhì)量濃度有一定的量效關(guān)系。越橘原花青素提取液質(zhì)量濃度高于0.8 mg/L后，對(duì)DPPH 自由基清除能力上升緩慢，清除率最高達(dá)到96.47%，而抗壞血酸最高只有82.06%，明顯高于抗壞血酸，半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.394 mg/L 和0.705 mg/L。因此，越橘原花青素有很強(qiáng)的DPPH 自由基清除能力。

圖9 越橘原花青素和抗壞血酸對(duì)DPPH自由基的清除能力Fig.9 Scavenging capacity of bilberry proanthocyanidins and ascorbic acid against DPPH free radicals

2.4.3 超氧陰離子自由基清除能力

如圖10所示，隨著質(zhì)量濃度的增大，越橘原花青素粗提物溶液和抗壞血酸對(duì)O-2·的清除率均不斷上升，且與質(zhì)量濃度有一定的量效關(guān)系。二者對(duì)O-2·的清除率最高分別為94.47%和87.06%，半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.387 mg/L和0.720 mg/L。因此，越橘原花青素有較強(qiáng)的O-2·清除能力。

圖10 越橘原花青素提取液和抗壞血酸對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力Fig.10 Scavenging capacity of bilberry proanthocyanidin and ascorbic acid against superoxide anion free radicals

3 結(jié)論

本研究對(duì)越橘原花青素的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)化，并對(duì)其體外抗氧化活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：以越橘干果為原料，經(jīng)60 ℃干燥4 h 后粉碎過(guò)篩（80目）得越橘粉，在料液比1∶30（g/mL），纖維素酶與果膠酶質(zhì)量比為1∶1.2，酶解pH 5.0，酶解時(shí)間90 min，超聲時(shí)間50 min條件下，越橘原花青素得率最高，達(dá)9.38%。越橘原花青素對(duì)羥基自由基、DPPH 自由基和超氧陰離子自由基的清除率最高分別為97.84%、96.47%和94.47%，半數(shù)抑制濃度IC50分別為0.354、0.394、0.387 mg/L。這表明本試驗(yàn)制備的越橘原花青素具有較好的抗氧化活性。該研究為越橘的精深加工和以原花青素為功效成分在醫(yī)學(xué)、食品等領(lǐng)域的產(chǎn)品開(kāi)發(fā)提供了理論依據(jù)和技術(shù)參數(shù)，具有一定的參考價(jià)值，后期可對(duì)以越橘為主要原料的功能性食品的創(chuàng)新開(kāi)發(fā)進(jìn)行更深入的研究與探討。