劉明浦 廖年生 李海榮 胡賢德 胡 劍 吳 濤

（1 江西省藥品檢查員中心，江西 南昌 330029；2 江西潤澤藥業(yè)有限公司，江西 大余 341000；3 江西贛隆藥業(yè)有限公司，江西 贛州 341006）

野漆樹苷（rhoifolin）又名芹菜素-7-O-β新橙皮糖苷，是以芹菜素（apigenin）為母核的黃酮苷類化合物，它存在于多種來自蕓香科柑橘屬的植物或中藥材中，如枳實(shí)[1]、山香圓[2]、化橘紅[3]、柚葉[4]。還存在于絡(luò)石藤[5]、胡椒葉[6]、鳳尾草[7]、兔尾草[8]、裸花紫珠[9]等多種藥用植物，在牡丹花中含量較高，多達(dá)33.87 mg/g[10]。此外，也存在于大麥、小麥、大豆等一些可食用植物中[11]。野漆樹苷（rhoifolin）結(jié)構(gòu)見圖1。本文就野漆樹苷的生物活性研究進(jìn)行綜述。

圖1 野漆樹苷（rhoifolin）結(jié)構(gòu)

1 野漆樹苷生物活性作用概述

目前已有研究報(bào)道野漆樹苷具有抗氧化、保肝、抗炎、降血壓、壯骨、神經(jīng)保護(hù)、降糖、抗癌和抗病毒等多種生物活性。雖然從PubMed近年來發(fā)表的全文中提到野漆樹苷文獻(xiàn)數(shù)量（圖2）來看，有增加趨勢，但相比于其苷元芹菜素，以及其他黃酮類化物，如柚皮苷（naringin）、橙皮苷（hesperidin）等，野漆樹苷的相關(guān)研究文獻(xiàn)要少得多。

圖2 近10年P(guān)ubMed收載全文中含野漆樹苷文獻(xiàn)

2 野漆樹苷生物活性作用

2.1 抗氧化作用 Deng等[12]研究了從沙田柚果肉中分離的黃酮類化合物的抗氧化能力，柚皮苷和野漆樹苷顯示出最高氧化自由基吸收能力（oxygen radical absorbance capacity，ORAC）。He等[13]從粗壯女貞（ligustrum robustum）葉中提取得到包括野漆樹苷在內(nèi)的13種天然產(chǎn)物，并對其抗氧化活性進(jìn)行研究，其中野漆樹苷的抗氧化活性強(qiáng)于對照物水溶性維生素E（trolox）。

2.2 保肝作用 野漆樹苷對雷公藤甲素誘導(dǎo)的肝損傷具有很好的保護(hù)作用，高書亮等[14]采用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人系L02肝細(xì)胞，加入40 μg/mL雷公藤甲素孵育，制備肝細(xì)胞損傷模型，MTT法測定各組細(xì)胞存活率，野漆樹苷300、150、75 μg/mL劑量組均能顯著提高雷公藤甲素?fù)p傷的人系L02肝細(xì)胞存活率。0.625 mg/kg劑量的雷公藤甲素灌胃1次，制備小鼠急性肝損傷模型，提前給予野漆樹苷140、70、35 mg/kg劑量組均能顯著降低雷公藤甲素所致急性肝損傷小鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性，降低肝臟丙二醛（MDA）含量，增強(qiáng)超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和谷胱甘肽S移換酶（GST）活力，并能明顯改善肝組織的病理學(xué)損傷。另有研究表明，用CCl4處理的大鼠提前服用野漆樹苷，降低了已經(jīng)增強(qiáng)的血清肝酶水平，AST、ALT、總膽紅素（TB）、堿性磷酸酶（ALP）和血清總蛋白分別降低60%、59%、51%、39%和43%，表明野漆樹苷具有良好的抗肝毒性活性；口服20 mg/kg的野漆樹苷后，CCl4中毒小鼠氧化應(yīng)激的一個(gè)指標(biāo)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物的升高水平明顯降低，其效果與水飛薊素相當(dāng)[15]。

2.3 抗炎作用 宋小欣等[16]研究了野漆樹苷對脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)的小鼠單核巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞炎癥模型釋放炎性因子的影響，與空白對照組相比，在LPS誘導(dǎo)下，RAW264.7細(xì)胞分泌致炎因子NO、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）和白細(xì)胞介素6（IL-6）（P＜0.01）；與模型組相比，25～100 μmol/L的野漆樹苷可明顯下調(diào)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞釋放炎癥因子NO、TNF-α、IL-1β、IL-6（P＜0.05，P＜0.01），并呈現(xiàn)良好的劑量依賴關(guān)系；野漆樹苷還不同程度地抑制Erk和JNK激酶的磷酸化。Fang等[17]用脂多糖誘導(dǎo)小鼠急性炎癥模型，觀察野漆樹苷對肺和肝臟病理損傷的影響。采用角叉菜膠致大鼠足腫脹模型，觀察野漆樹苷對足腫脹體積的影響。野漆樹苷能促進(jìn)急性炎癥小鼠肝、肺組織損傷的恢復(fù)，抑制角叉菜膠所致大鼠足腫脹；顯著抑制大鼠和小鼠模型血清中TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌。在LPS誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞中，100 μmol/L野漆樹苷顯著提高細(xì)胞活力，并抑制TNF-α、IL-6和IL-1β的產(chǎn)生。還能降低iNOS和CCL2的mRNA表達(dá)，抑制IκBα和IKKβ的磷酸化。對炎癥有潛在的治療價(jià)值。骨關(guān)節(jié)炎（osteoarthritis，OA）是一種常見的與年齡有關(guān)的關(guān)節(jié)疾病。它的發(fā)展通常被認(rèn)為與炎癥和自噬有關(guān)。Yan等[18]研究了野漆樹苷對大鼠骨關(guān)節(jié)炎的治療效果以及潛在機(jī)制。野漆樹苷可以顯著減輕IL-1β誘導(dǎo)的大鼠軟骨細(xì)胞炎癥反應(yīng)、軟骨降解和自噬下調(diào)。P38/JNK和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路參與了野漆樹苷的保護(hù)作用。在體內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)注射野漆樹苷可顯著改善大鼠OA模型的軟骨損傷，表明野漆樹苷在OA治療中的潛在作用。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種涉及疼痛和炎癥的膝關(guān)節(jié)自身免疫性疾病。Peng等[19]采用完全弗氏佐劑（CFA）誘導(dǎo)的大鼠關(guān)節(jié)炎模型研究野漆樹苷相關(guān)作用。野漆樹苷（10、20 mg/kg）治療大鼠整體健康指數(shù)（如足腫脹和體質(zhì)量減輕）有顯著改善。形態(tài)學(xué)參數(shù)的改善證實(shí)了組織病理學(xué)分析中觀察到的大體形態(tài)學(xué)變化。從關(guān)節(jié)軟骨組織中細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽、谷胱甘肽過氧化物酶、MDA和SOD水平的變化可以明顯看出，野漆樹苷治療也能顯著降低氧化應(yīng)激。促炎細(xì)胞因子、TNF-α、IL-1β和IL-6顯示出基因表達(dá)和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)濃度水平的顯著下調(diào)。核因子-κB（NF-κB）通路表現(xiàn)出顯著的減弱，這在NF-κB p65和p-IκB-α水平的顯著降低中很明顯。這些結(jié)果表明，野漆樹苷可以作為現(xiàn)有治療方案，包括非甾體抗炎藥和免疫抑制劑的天然產(chǎn)物替代療法。野漆樹苷的抗氧化和抗炎作用可能是通過NF-κB途徑介導(dǎo)的。野漆樹苷對角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足腫脹具有時(shí)間和劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)作用[20]，治療4 h后，與對照組（74%）相比，劑量為2.5、25和250 mg/kg的野漆樹苷對大鼠足腫脹體積的顯著抑制分別為14%、25%和45%。除了顯著降低前列腺素E2水平外，增加野漆樹苷的劑量還顯著減少炎癥滲出液中TNF-α的釋放；在同一動(dòng)物模型中，野漆樹苷以相反的劑量順序增加總抗氧化能力，在最低的試驗(yàn)劑量時(shí)具有最強(qiáng)的抗氧化能力。

2.4 降血壓作用 以麻醉犬為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，比較了木犀草素、芹菜素和野漆樹苷與硝苯地平對由缺氧和前列腺素F2α（PGF2α）體內(nèi)產(chǎn)生的兩種實(shí)驗(yàn)性肺動(dòng)脈高血壓模型中對肺血管回路的急性影響，野漆樹苷按5 mg/kg靜脈注射對缺氧性肺血管收縮沒有影響，但降低了心排血量和主動(dòng)脈壓；PGF2α誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓對黃酮類化合物和硝苯地平的反應(yīng)與缺氧誘導(dǎo)的肺動(dòng)脈高壓幾乎相同[21]。在一項(xiàng)關(guān)于野漆樹苷和牡荊素對麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)影響的對比研究中，野漆樹苷可以使平均主動(dòng)脈壓、動(dòng)脈和肺毛細(xì)血管壓及心率降低[22]。

2.5 壯骨作用 人工關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體松動(dòng)是一個(gè)非常棘手的臨床問題。磨損顆粒誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞生成已被證明是假體周圍骨溶解的主要原因，最終導(dǎo)致假體無菌性松動(dòng)。因此，抑制破骨細(xì)胞的生成是控制假體周圍骨溶解的一個(gè)有前途的策略。Liao等[23]研究探討了野漆樹苷對破骨細(xì)胞生成和鈦顆粒誘導(dǎo)的顱骨骨溶解作用的可能機(jī)制，野漆樹苷可以改善破骨細(xì)胞引起的骨溶解，可能是治療假體松動(dòng)的潛在藥物。體外研究表明，野漆樹苷可顯著抑制NF-κB受體激活劑配體刺激的破骨細(xì)胞生成、羥基磷灰石再吸收、F-肌動(dòng)蛋白形成以及破骨細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)。Western-blot分析表明，野漆樹苷可以減弱NF-κB和絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）途徑，以及轉(zhuǎn)錄因子活化T細(xì)胞核因子c1（NFATc1）和c-Fos的表達(dá)。進(jìn)一步的研究表明，野漆樹苷抑制p65向細(xì)胞核的移位和NFATc1與NF-κB的活性，減少抗酒石酸磷酸陽性破骨細(xì)胞的數(shù)量和鈦顆粒誘導(dǎo)的C57小鼠在體顱骨丟失。

2.6 神經(jīng)保護(hù)作用 Brinza等[24]研究了野漆樹苷對東莨菪堿誘導(dǎo)的斑馬魚焦慮、健忘癥和腦氧化應(yīng)激的改善作用，并闡明相關(guān)的潛在機(jī)制。用野漆樹苷（1、3、5 μg/L）處理斑馬魚，連續(xù)9 d，然后加入100 μmol/L東莨菪堿中30 min，隨之進(jìn)行行為學(xué)試驗(yàn)，包括新魚缸潛水試驗(yàn)（novel tank diving test）、Y迷宮試驗(yàn)和新物體識(shí)別試驗(yàn)（novel object recognition test），還評估了體內(nèi)抗氧化狀態(tài)和乙酰膽堿酯酶（AChE）活性。在東莨菪堿斑馬魚模型中，野漆樹苷可以緩解焦慮、記憶障礙和大腦氧化應(yīng)激，還可以通過抑制AChE活性來調(diào)節(jié)膽堿能功能。野漆樹苷通過恢復(fù)膽堿能活性和改善大腦氧化應(yīng)激，有望成為抗焦慮和健忘癥的候選化合物。

2.7 降糖作用 Rao等[25]從柚子葉中分離到野漆樹苷和大波斯菊苷（cosmosiin，COS），并確定柚子葉是野漆樹苷的豐富來源（1.1%，w/w）。在用于對糖尿病有益的生物學(xué)研究中，在分化的3T3-L1脂肪細(xì)胞中，野漆樹苷和COS分別在0.001～5 μmol/L 和1～20 μmol/L濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性反應(yīng)。尤其是野漆樹苷和COS分別為0.5 μmol/L和20 μmol/L，對脂聯(lián)素分泌水平顯示出與10 nmol/L胰島素相近的作用。此外，5 μmol/L的野漆樹苷和20 μmol/L的COS與10 nmol/L胰島素相等的作用，對葡萄糖蛋白4（GLUT4）易位有積極作用外，還可以增強(qiáng)胰島素受體β的磷酸化。野漆樹苷和COS可能通過增強(qiáng)脂聯(lián)素分泌、胰島素受體β的酪氨酸磷酸化和GLUT4易位而有益于糖尿病并發(fā)癥。有學(xué)者綜述了柑橘黃酮類化合物在糖尿病方面研究，認(rèn)為包括野漆樹苷在內(nèi)的19個(gè)來自柑橘的黃酮類化合物有抗糖尿病潛力[26]。

2.8 抗腫瘤作用 ezrin是一種重要的膜細(xì)胞骨架連接蛋白，通過組織膜蛋白并協(xié)調(diào)其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，ezrin有助于調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)中的細(xì)胞骨架重排。野漆樹苷對乳腺癌細(xì)胞具有抗運(yùn)動(dòng)特性，其在上皮間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化（EMT）過程中可能下調(diào)podocalyxin-ezrin相互作用[9]，10 μmol/L和40 μmol/L野漆樹苷處理可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞的遷移，并改變肌動(dòng)蛋白細(xì)胞骨架的位置和組織。野漆樹苷顯著抑制ezrin磷酸化以及隨后與PODXL的相互作用，對TGF-β1誘導(dǎo)的MDA-MB-231細(xì)胞EMT也有明顯的抑制作用。RNA干擾試驗(yàn)的數(shù)據(jù)證實(shí)，缺失ezrin可增強(qiáng)野漆樹苷對ezrin的抑制作用。以綠原酸等有機(jī)酸和野漆樹苷為主要成分的苦艾提取物對人結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞（DLD-1）、人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞（ECC-1）有細(xì)胞毒性[27]，提示野漆樹苷具有潛在抗癌作用。用人表皮樣喉癌（Hep 2）和人宮頸癌（HeLa）細(xì)胞系進(jìn)行評估時(shí)，野漆樹苷顯示出很好的抗癌活性，幾乎與長春花堿相似；針對肝細(xì)胞癌（Hep G2）、結(jié)腸癌（HCT-116）和人胚肺成纖維細(xì)胞癌（MRC-5）細(xì)胞系有相當(dāng)?shù)幕钚?，野漆樹苷是對健康正常?xì)胞（Vero細(xì)胞）沒有細(xì)胞毒性活性，這表明該化合物具有很高的選擇性[28]。

2.9 抗病毒作用 全世界都被流感病毒所困擾，從藥用植物和（或）草藥中分離的粗提物或純化合物對流感病毒有良好的抑制作用。包括野漆樹苷在內(nèi)93種候選抗病毒天然產(chǎn)物是潛在的抗流感病毒候選藥物，而且這些化合物對流感副流感病毒、呼吸道合胞病毒也有很好的抑制作用。利用分子對接方法來評估活性天然產(chǎn)物抑制流感病毒的主要蛋白酶和刺突糖蛋白活性，提示流感病毒治療中，與奈非那韋（nelfinavir）、氯喹和羥基氯喹硫酸酯相比，研究中所篩選的包括野漆樹苷等幾種天然化合物有更好的結(jié)合自由能，根據(jù)量子化學(xué)DFT計(jì)算，所選化合物的化學(xué)反應(yīng)性為柳穿魚苷（pectolinarin）＞橙皮苷＞ 野漆樹苷 ＞ 桑色素（morin）＞ 表沒食子兒茶素沒食子酸酯。系統(tǒng)篩選對流感病毒復(fù)制周期中的關(guān)鍵酶有抑制活性化合物，草棉黃素（herbacetin）、野漆樹苷和柳穿魚苷能有效阻斷該類酶活性，誘導(dǎo)契合對接（induced fit docking）分析表明S1、S2和S30位點(diǎn)與黃酮類化合物結(jié)合。Meta分析野漆樹苷是一個(gè)很有潛力的抗流感病毒候選物[11]。有專利公開了一種包含川芎嗪、野漆樹苷和金絲桃素三種物質(zhì)的組合物，作為一種神經(jīng)氨酸酶抑制劑用于預(yù)防和治療流感。

3 討論

如前文所述，相比其苷元芹菜素，目前野漆樹苷的相關(guān)研究文獻(xiàn)要少得多，其在大鼠體內(nèi)主要生成脫新橙皮糖基的苷元芹菜素，而一部分芹菜素又在微粒體酶催化下生成柚皮素[29]。由此推斷，野漆樹苷應(yīng)該具有芹菜素和柚皮素所具有其他一些藥理活性，由于野漆樹苷具有較好的多方面的藥理活性，可以預(yù)見，未來對其的研究將會(huì)越來越多，在未來研究中可關(guān)注并就與芹菜素或柚皮素似的藥理作用方面，對野漆樹苷進(jìn)行研究。

鑒于黃酮類化合物在骨方面的應(yīng)用，其在骨缺損修復(fù)方面的研究值得進(jìn)一步研究與關(guān)注。鑒于天然產(chǎn)物中黃酮類化合物共生存在，與野漆樹苷共生黃酮之間的相互作用方面也需要深入地研究。

藥理活性的研究是基于廣泛的大量得到該化合物的基礎(chǔ)之上，目前有關(guān)野漆樹苷的分離純化還是保留在傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物化學(xué)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)分離階段，對該化合物的分離方法同樣值得研究關(guān)注。