邵麗華，李鵬

摘? 要：選擇了2個水稻品種，通過病原菌孢子和菌絲懸浮液與稻粒混拌的方法接種，接種5 d后分離出病原菌的芽數(shù)占總分離稻芽的70%以上，從病原菌分離出部位看，病原菌隨著植株生長逐步向上擴展蔓延。接種發(fā)病的效果證明了使用稻粒與惡苗病菌混拌接種方法是可行的，且簡便易行。

關(guān)鍵詞：水稻；惡苗?。唤臃N；鐮孢屬

中圖分類號：Ｓ435.111.4+4? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼：A文章編號：1673－6737（２０23）05－００30－０3

Preliminary Study on Inoculation Test of Rice Bakanae

SHAO Li-hua ， LI Peng*

（Institute of Plant Protection， Heilongjiang Academy of Land Reclamation Sciences， Harbin 150038， China）

Abstract：In this paper， two rice varieties were selected and inoculated by mixing pathogen spores and mycelia suspension with rice grain. After 5 days of inoculation， the number of shoots isolated pathogens accounted for more than 70% of the total isolated rice shoots. The effect of inoculation proved that the mixed inoculation method of rice grain and pathogen was feasible and simple.

Key words： Rice; Bakanae; Inoculation; Fusarium

水稻惡苗病又名徒長病俗稱公稻子，是危害性強的水稻常見真菌性病害，是黑龍江稻區(qū)普遍發(fā)生的水稻病害，在水稻生育后期調(diào)查發(fā)病重的地塊發(fā)病率達10%～20%，嚴重影響水稻產(chǎn)量。目前，種子處理是防治惡苗病的關(guān)鍵，降低苗期的發(fā)病率，然而種植抗惡苗病水稻品種是最經(jīng)濟有效的防治方法。本論文通過病原菌孢子和菌絲懸浮液與稻?；彀璧姆椒ń臃N，明確浸種催芽階段此接種方法的可行性，為惡苗病室內(nèi)抗性研究提供簡便易行的接種方法。

1? 材料與方法

1.1? 水稻粒寄生病原真菌種類

將100粒品種為龍粳31的稻谷內(nèi)穎、外穎和糙米手動分開后，使用次氯酸鈉溶液表面消毒（內(nèi)穎、外穎各1.5 min，糙米2.5 min）后，置于直徑90 mm玻璃培養(yǎng)皿的PDA培養(yǎng)基平板上，每個平板放10個（粒），之后將培養(yǎng)皿置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，6 d后觀察病原菌形態(tài)。

1.2? 病原菌分離培養(yǎng)

在水稻品種為龍粳31的地塊上采集惡苗病病株，將病株的病節(jié)取3 mm×（3～5）mm大小的病組織，經(jīng)次氯酸鈉溶液表面消毒3 min后，置于直徑90 mm玻璃培養(yǎng)皿的PDA培養(yǎng)基平板上，每個平板放5塊病組織，之后將培養(yǎng)皿置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，6 d后觀察病原菌形態(tài)并轉(zhuǎn)管保存待用。

1.3? 惡苗病菌接種試驗

水稻品種：墾稻26、龍粳31。

浸種藥劑：4%嘧啶核苷類抗菌素水劑1 000倍液（武漢科諾生物科技股份有限公司生產(chǎn)）。

試驗方法：每品種選500粒，藥劑浸種2 d后更換清水浸種，24 h后再更換1次清水，共浸種4 d后催芽，催芽前接種，并設(shè)置不接種的處理為CK（每個品種215粒），每個品種接種285粒，接種后32 ℃恒溫催芽24 h，按接種后1 d、3 d、5 d將接種與不接種的2個品種隨機選30粒取各處理種子芽進行分離培養(yǎng)，使用次氯酸鈉溶液表面消毒2 min后，置于直徑90 mm玻璃培養(yǎng)皿的PDA培養(yǎng)基平板上，每個平板放10粒，之后將培養(yǎng)皿置于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)，每隔2 d觀察病原菌分離情況并記錄。催芽24 h后30 ℃下全光照24 h，之后溫度調(diào)至25 ℃全黑暗24 h、全光照24 h，然后將各處理剩余種子播種待用。

接種方法：將病組織分離培養(yǎng)轉(zhuǎn)管保存的鐮孢屬真菌轉(zhuǎn)至PDA培養(yǎng)基平板上擴繁，擴繁后的菌落取下后放入直徑90 mm玻璃培養(yǎng)皿中，加少量水將菌絲和孢子刮下來，制成菌絲和孢子懸浮液，將菌絲和孢子懸浮液倒入裝有稻谷的三角瓶中搖晃，使稻谷和懸浮液混合均勻。

播種方法：將3 kg土與3 g尿素混拌均勻后，分裝在5個塑料盒內(nèi)澆水、播種、覆土。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 水稻粒寄生病原真菌種類

6 d后病原菌形態(tài)特征目測和鏡檢觀察可知，稻粒內(nèi)穎、外穎和糙米分離出鏈格孢屬、鐮孢屬真菌及紅色未知真菌（表1），其中內(nèi)穎分離出69株鏈格孢屬真菌，占分離出總菌株數(shù)97.2%，外穎分離出89株鏈格孢屬真菌，占分離出總菌株數(shù)97.8%，糙米分離出60株鏈格孢屬真菌，占分離出總菌株數(shù)95.2%。

鏈格孢屬真菌氣生菌絲白色，絨氈狀，菌落背面橄欖黑色，顏色較深，分生孢子鏈生，倒棒狀、卵形、倒梨形或近橢圓形，褐色，表面光滑或具細疣，具橫、縱、斜隔膜，分隔處略縊縮，少數(shù)具喙，喙短柱狀或錐狀。

鐮孢屬真菌氣生菌絲絨狀至粉狀，白色，菌落背面黃色或紅色，小型分生孢子數(shù)量多，卵型或橢圓形，單胞，大型分生孢子鐮刀型，細長，頂胞漸尖。

2.2? 病原菌分離培養(yǎng)

10個病組織分離培養(yǎng)2 d后均可見到病原菌菌絲，6 d后病原菌形態(tài)特征目測和鏡檢觀察可知，氣生菌絲絨狀至粉狀，菌落背面黃色或紅色，培養(yǎng)基不變色，小型分生孢子數(shù)量多，卵型或橢圓形，單胞，偶見雙胞，大型分生孢子鐮刀型，細長，頂胞漸尖。從形態(tài)特征上確定病原菌為鐮孢屬（Fusarium）真菌。

2.3? 惡苗病菌接種試驗

2.3.1? 接種后1 d分離培養(yǎng)結(jié)果? 分離培養(yǎng)2 d后目測觀察，墾稻26和龍粳31接種處理各有1個芽分離出病原菌，墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。分離培養(yǎng)4 d后目測觀察，墾稻26接種處理有1個芽分離出病原菌，占總分離稻芽3.3%；龍粳31接種處理有3個芽分離出病原菌，占總分離稻芽10%；墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。

2.3.2? 接種后3 d分離培養(yǎng)結(jié)果? 分離培養(yǎng)2 d后目測觀察，墾稻26接種處理有25個芽分離出病原菌，龍粳31接種處理有8個芽分離出病原菌，墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。分離培養(yǎng)4 d后目測觀察，墾稻26接種處理有26個芽分離出病原菌，占總分離稻芽86.7%，分離出病原菌的部位均在鞘葉；龍粳31接種處理有9個芽分離出病原菌，占總分離稻芽30%，分離出病原菌的部位均在鞘葉；墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。

2.3.3? 接種后5 d分離培養(yǎng)結(jié)果? 分離培養(yǎng)2 d后目測觀察，墾稻26接種處理有22個芽分離出病原菌，龍粳31接種處理有21個芽分離出病原菌，墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。分離培養(yǎng)4 d后目測觀察，墾稻26接種處理有25個芽分離出病原菌，占總分離稻芽83.3%，分別在10個鞘葉和15個不完全葉上分離出來；龍粳31接種處理有22個芽分離出病原菌，占總分離稻芽73.3%，分別在10個鞘葉、9個不完全葉和3個1葉上分離出來；墾稻26和龍粳31未接種處理沒有分離出病原菌。

3? 結(jié)論與討論

水稻粒內(nèi)穎、外穎和糙米經(jīng)次氯酸鈉溶液表面消毒后，分離出鏈格孢屬、鐮孢屬等真菌，為了不影響惡苗病菌接種效果，使用嘧啶核苷類抗菌素浸種后接種效果明顯，接種5 d后分離出病原菌的芽數(shù)占總分離稻芽的70%以上，從病原菌分離出部位看，病原菌隨著植株生長逐步向上擴展蔓延。以上試驗證明了使用稻粒與惡苗病菌混拌的接種方法是可行的。

臺蓮梅等[1]（2003）以濾紙保濕法和分離培養(yǎng)法，從水稻種子內(nèi)部和表面共分離鑒定出13個屬、15個種真菌，其中鏈格孢菌（Alternaria oryzae）、禾谷鐮孢菌（Fusarium graminearum）、黑附球菌（Epicoccum neglectum）、枝孢菌（Cladosporium cladosporioidas）為優(yōu)勢種。鏈格孢菌在兩種分離方法中出現(xiàn)數(shù)量都高，禾谷鐮刀菌、枝孢菌以分離培養(yǎng)法出現(xiàn)數(shù)量多，而黑附球菌則以濾紙保濕法出現(xiàn)的數(shù)量多。臺蓮梅等[2]（2020）確定黑龍江省水稻穗褐變病主要由禾谷鐮孢（Fusarium graminearum）、鏈格孢（Alternaria alternata）、稻黑孢（Nigrospora oryzae）和黑附球霉（Epicoccum nigrum）4種病原真菌引起。喬金玲等[3]（2010）遵循Kochs法則，參照Ainsworth分類系統(tǒng)，確定了水稻褐變穗的病原菌主要是鏈格孢（Alternaria alternata （Fr.）Keissl）和黑孢霉（Nigrospora Zi）。韓雨桐[4]（2016）明確了引起黑龍江省水稻褐變穗病的病原為鏈格孢（Alternaria alternata （Fr.）Keissl）。從以上文獻研究結(jié)果可以明確稻谷上有多種病原真菌，且以鏈格孢屬和鐮孢屬真菌出現(xiàn)的數(shù)量多，筆者采用分離培養(yǎng)法獲得的鏈格孢屬真菌最多，也有少量的鐮孢屬真菌，因此在接種試驗中使用了殺菌劑，以消除種子帶菌對試驗結(jié)果的影響。

前人在惡苗病菌接種試驗過程中采用了多種試驗方法，并明確了惡苗病菌侵染主要時期。鄭鎬燮，呂彬等[5-8]（1993，1994）明確水稻芽期浸菌接種法能明顯區(qū)分不同品種（系）的抗感水平，且簡便易行，適用于大量水稻品種抗惡苗病篩選鑒定。李勇等[9]（1994）將病菌孢子液連同培養(yǎng)基與種子拌勻接種，也取得了較好的鑒定結(jié)果。方興洲等[10]（2012）明確了惡苗病菌侵染主要時期是催芽階段，浸種過程中發(fā)病率隨溫度增加而上升，催芽溫度34 ℃發(fā)病率最高。呂彬[11]（1996）研究結(jié)果確定芽期浸菌接種的致病效果最佳。筆者在芽期采用病原菌孢子和菌絲懸浮液與稻?；彀璧姆椒ń臃N，也有比較好的接種發(fā)病效果，且簡便易行。

參考文獻：

[1] 臺蓮梅，鄭雯，閆鳳云，等.水稻種子真菌種群研究[J].黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)學(xué)報，2003（1）：31-33.

[2] 臺蓮梅，姜小玉，靳學(xué)慧，等.黑龍江省水稻穗褐變病病原菌的分離與鑒定[J].微生物學(xué)通報，2020，4（6）：1776-1786.

[3] 喬金玲，臺蓮梅，王平，等.水稻褐變穗病原菌生物學(xué)特性的研究[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)，2010（04）：9-10.

[4] 韓雨桐.黑龍江省水稻褐變穗病原鑒定、抗源及藥劑篩選研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2016.

[5] 鄭鎬燮，呂彬，吳潤植，等.水稻惡苗病抗病性篩選方法的初步研究[J].植物保護學(xué)報，1993（4）：289-293.

[6] 呂彬.水稻種質(zhì)資源對水稻惡苗病的抗性鑒定初報[J].植物保護，1994（3）：20-21.

[7] 鄭鎬燮，呂彬，吳潤植，等.水稻品種抗惡苗病鑒定方法的研究[J].植物保護，1993（3）：8-10.

[8] 鄭鎬燮，呂彬，吳潤植.水稻品種資源對惡苗病抗性鑒定研究[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1993（3）：11-13.

[9] 李勇，林佩力，李靜，等.水稻品種抗惡苗病鑒定研究初報[J].黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，1994（1）：29-31.

[10] 方興洲，陳莉，產(chǎn)祝龍，等.水稻惡苗病與浸種、催芽和播種等因子的關(guān)系研究[J].熱帶作物學(xué)報，2012，33（6）：1107-1110.

[11] 呂彬.水稻抗惡苗病的鑒定方法研究[J].作物學(xué)報，1996（5）：629-632.

（責(zé)任編輯：王丹）