李新，華永晨，王春芳,，黃澤森,，韓彥琪，趙專友，許浚，劉永姝,，郝泉，姚鵬飛，張鐵軍*，柴國(guó)林*

1.天津藥物研究院 天津市中藥質(zhì)量標(biāo)志物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

2.天津藥物研究院 中藥現(xiàn)代制劑與質(zhì)量控制技術(shù)國(guó)家地方聯(lián)合工程實(shí)驗(yàn)室 釋藥技術(shù)與藥代動(dòng)力學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

3.天津藥物研究院 藥物成藥性評(píng)價(jià)與系統(tǒng)轉(zhuǎn)化全國(guó)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300462

4.蘭州佛慈制藥股份有限公司，甘肅 蘭州 730000

5.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617

痔瘡是一種非常普通的臨床上常見的肛腸疾病，發(fā)病率較高，因其隨時(shí)可以發(fā)作，嚴(yán)重影響人們的生活與健康。痔瘡的病理特征是肛墊病理性肥大、移位及肛周皮下血管叢血流瘀滯形成的局部腫塊，痔急性發(fā)作常表現(xiàn)為黏膜糜爛、疼痛、便血、紅腫、滲出等，并伴有病變部位的感染。研究發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)傷或炎癥性因素可使各種細(xì)胞因子表達(dá)和活性增強(qiáng)，造成微血管壁及內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，不僅導(dǎo)致痔血管生成繼續(xù)增加，還導(dǎo)致痔出血、水腫、脫出等臨床癥狀，而增大和脫出的痔更易于發(fā)生創(chuàng)傷和炎癥，從而形成痔發(fā)病中的惡性循環(huán)[1]。目前臨床對(duì)早期痔瘡主要治療方法為非手術(shù)治療（如內(nèi)服、熏洗坐浴、外敷、激光等），從止痛、止血、抑制腫脹、促進(jìn)潰瘍愈合及抗炎等方面著手對(duì)痔瘡進(jìn)行有效治療[2]。

消痔丸出自《瘍醫(yī)大全》，由地榆（炒炭）、牡丹皮、三顆針皮（炒炭）、大黃（酒炒）、黃芪、白及、槐角（蜜炙）、防己、白術(shù)（炒）、當(dāng)歸（酒炒）、火麻仁（炒黃）及動(dòng)物大腸12 味中藥組成，具有消腫生肌、清熱潤(rùn)便、補(bǔ)氣固脫、止血、止痛的功效，主要用于痔疾腫痛、便秘出血、脫肛不收及腸風(fēng)下血、積滯不化等癥，主治痔瘡。本研究采用醋酸建立大鼠肛門潰瘍模型，進(jìn)一步探討消痔丸對(duì)潰瘍愈合、抗炎消腫等方面的影響。

1 材料

1.1 藥物和試劑

消痔丸由蘭州佛慈制藥股份有限公司生產(chǎn)，每100 丸重4 g，批號(hào) 210712；柑橘黃酮片由法國(guó)施維雅藥廠生產(chǎn)，規(guī)格500 mg（以總黃酮計(jì)），批號(hào)2 019224；痔炎消片由馬應(yīng)龍藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格0.53 g/片，批號(hào)220411。

冰醋酸（康科德公司，批號(hào)210312）；BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒（北京索萊寶科技有限公司，批號(hào)20220806）；大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）ELISA 檢測(cè)試劑盒（上海西唐生物科技有限公司，批號(hào)2212261）；大鼠腫瘤壞死因子-α（TNF-α）ELISA 檢測(cè)試劑盒（美國(guó)Immunoway 公司，批號(hào)KL04JH4L0322）；大鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA檢測(cè)試劑盒（美國(guó) R&D Systems 公司，批號(hào)900101）；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（TGFβ1）抗體（Affinity公司，批號(hào)20R6523）；誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）抗體（Affinity 公司，批號(hào)62Y7896）；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A（VEGFA）抗體（Affinity 公司，批號(hào)83M8093）；蘇木素染色液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)ZLI-9610）；伊紅染色液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)ZLI-9613）；兔二步法檢測(cè)試劑盒（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)2228G1129）。

1.2 動(dòng)物

SPF 級(jí)SD 大鼠，5～6 周齡，體質(zhì)量180～200 g，大鼠由北京斯貝福生物技術(shù)有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0010，飼養(yǎng)在天津天誠(chéng)新藥評(píng)價(jià)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障系統(tǒng)[合格證SYXK（津）2021-0008]，溫度、濕度、換氣次數(shù)由中央系統(tǒng)自動(dòng)控制，溫度維持在20～26 ℃，相對(duì)濕度維持在40%～70%，通風(fēng)次數(shù)為10～15 次/h 全新風(fēng)，光照為12 h 明、12 h 暗。自由攝食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1 周。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用經(jīng)天津天誠(chéng)新藥評(píng)價(jià)有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（IACUC：No.2022122302）。

1.3 儀器

SpectraMaxM5 酶標(biāo)儀（美國(guó)MolecularDevices公司）；Sorvall ST 8R 高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific 公司）；WD-2103B 自動(dòng)洗板機(jī)（北京六一生物科技有限公司）；Leica TP-1020 脫水機(jī)（徠卡儀器有限公司）；Leica HistoCore MULTICUT病理切片機(jī)（徠卡儀器有限公司）；ES500-1 包埋機(jī)（金華市華速科技有限公司）；ES500-3H 組織攤片機(jī)（金華市華速科技有限公司）；Leica DM750 正置光學(xué)顯微鏡（徠卡儀器有限公司）；ICC50W 成像系統(tǒng)（徠卡儀器有限公司）。

2 方法

2.1 模型制備、分組及給藥

取SD 大鼠80 只，除了對(duì)照組10 只，其余大鼠采用浸有冰醋酸的6 mm 濾紙片貼敷肛門，濾紙片需緊密接觸肛門皮膚及黏膜，每只鼠用3 片濾紙片，每片貼30 s。6 h 后觀察潰瘍程度并于24 h 后篩選模型成功的大鼠分為模型組、痔炎消片（0.86 g/kg）組、柑橘黃酮片（0.27 g/kg）組和消痔丸（0.81、1.62、3.24 g/kg）組，每組10 只，每天1 次，連續(xù)ig 給藥10 d。對(duì)照組與模型組ig 給予同等體積的0.1% CMC-Na 溶液。

根據(jù)臨床給藥劑量以人體質(zhì)量70 kg 換算消痔丸大鼠等效劑量，即中劑量1.62 g/kg，據(jù)此分別設(shè)置臨床劑量1/2 與2 倍即低劑量組0.81 g/kg 和3.24 g/kg，同時(shí)分別根據(jù)陽性藥痔炎消片、柑橘黃酮片臨床給藥劑量換算得出其大鼠給藥劑量分別為0.86 g/kg 和0.27 g/kg。將以上藥物研磨均勻后以0.1%CMC-Na 溶液充分混懸按照10 mL/kg ig 給藥。

2.2 觀察及檢測(cè)指標(biāo)

2.2.1 肛周形態(tài)及肛門潰瘍面積 記錄造模后（造模當(dāng)天為0 d）第1、3、7、10 d 各組大鼠肛周潰瘍、潮濕、焦瘕、黏液等情況，并采用Image J 軟件對(duì)潰瘍面積進(jìn)行計(jì)算。評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)按照表1 進(jìn)行[3-4]。

表1 表觀指標(biāo)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Apparent index grading standard

2.2.2 樣品制備 末次給藥1 h 后，以1%戊巴比妥鈉麻醉，肛周脫毛，棉簽置入肛門內(nèi)作為指引，沿肛周環(huán)形分離肛門，深置直腸5 mm 處，剪斷直腸，移出標(biāo)本，剔除周圍結(jié)締組織，縱剖，用冰冷生理鹽水漂洗，濾紙吸干表面水分，將肛周及直腸組織分為2 部分，一部分用于組織因子檢測(cè)，另一部分組織用于病理學(xué)及組化檢測(cè)。

2.2.3 肛門組織病理學(xué)檢測(cè) 取2.2.2 項(xiàng)下1/3 量肛門直腸組織，放入10%甲醛溶液中固定，經(jīng)脫水、包埋后切片，石蠟切片經(jīng)脫蠟至水、蘇木素-伊紅染色后脫水封片，經(jīng)顯微鏡鏡檢后采集圖像進(jìn)行分級(jí)評(píng)分：以大鼠肛周組織黏膜上皮和鱗狀上皮細(xì)胞排列、增生、缺損，間質(zhì)或黏膜下充血出血水腫，炎性滲出及壞死，炎細(xì)胞浸潤(rùn)和結(jié)締組織增生為觀察指標(biāo)，依據(jù)病變程度和范圍分為5 個(gè)等級(jí)，正常0 分，輕微1 分，輕度2 分，中度3 分，重度4 分。

2.2.4 肛門組織中MMP-9、TNF-α、IL-6 含量 取-80 ℃凍存的肛門組織適量，加入適量生理鹽水勻漿至均勻、無明顯組織塊后4 ℃、10 000 r/min 離心10 min，取上清按照試劑盒要求檢測(cè)MMP-9、TNF-α、IL-6 含量。

2.2.5 肛門組織iNOS、TGF-β1、VEGFA 蛋白表達(dá)收集肛門組織，放入10%甲醛溶液中固定，將組織常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片處理，按照免疫組化試劑盒操作分別以iNOS、TGF-β1、VEGFA 抗體（1∶200）孵育后，經(jīng)反應(yīng)增強(qiáng)液、酶標(biāo)聚合物、DAB 顯色、蘇木素復(fù)染后脫水封片，于顯微鏡下觀察肛門組織中iNOS、TGF-β1、VEGFA 的蛋白表達(dá)，iNOS、TGF-β1、VEGFA 蛋白陽性表達(dá)呈棕黃色顆粒。利用Image J 圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析，每組取3 個(gè)樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，每張片子隨機(jī)取5 個(gè)高倍視野，測(cè)量每個(gè)視野中蛋白陽性染色區(qū)域面積，計(jì)算得到陽性染色區(qū)域面與總面積比值，即為iNOS、TGFβ1、VEGFA 蛋白相對(duì)表達(dá)量。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 7 進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)均以表示，組間差異性采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 消痔丸對(duì)大鼠肛周潰瘍的影響

對(duì)照組大鼠肛門回縮，肛內(nèi)黏膜無損傷，肛周無水腫等異常情況。各組動(dòng)物貼敷冰醋酸紙片后均出現(xiàn)白色潰瘍面、肛周腫脹、黏液分泌增加、潮濕度顯著增加等癥狀，隨著時(shí)間推移，各組大鼠肛周潰瘍會(huì)自行愈和，但給藥組大鼠潰瘍愈合速度明顯加快，尤其在造模后第7 d 時(shí)與模型組相比，消痔丸表觀評(píng)分及潰瘍面積明顯降低（P＜0.05、0.01、0.001），至造模后第10 d 時(shí)各給藥組在潰瘍面積和表觀評(píng)分的治療效果非常顯著（P＜0.01、0.001），提示各給藥組具有明顯的抗醋酸誘導(dǎo)的肛門潰瘍作用，見表2、3。

表2 消痔丸對(duì)大鼠表觀指標(biāo)的影響（，n=10）Table 2 Effects of Xiaozhi Pills on apparent index in rats (,n=10)

表2 消痔丸對(duì)大鼠表觀指標(biāo)的影響（，n=10）Table 2 Effects of Xiaozhi Pills on apparent index in rats (,n=10)

與對(duì)照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001***P <0.001 vs control group;#P <0.05 ##P <0.01 ###P <0.001 vs model group

表3 消痔丸對(duì)大鼠潰瘍面積的影響（，n=10）Table 3 Effects of Xiaozhi Pills on ulcer area in rats (,n=10)

表3 消痔丸對(duì)大鼠潰瘍面積的影響（，n=10）Table 3 Effects of Xiaozhi Pills on ulcer area in rats (,n=10)

與對(duì)照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01 ###P＜0.001***P <0.001 vs control group;#P <0.05 ##P <0.01 ###P <0.001 vs model group

3.2 消痔丸對(duì)大鼠組織病理的影響

肛門直腸組織的HE 染色病理結(jié)果如圖1、表4 所示，對(duì)照組大鼠肛周組織黏膜上皮和鱗狀上皮細(xì)胞排列整齊，未見增生及缺損，間質(zhì)或黏膜下層未見水腫，小血管擴(kuò)張充血或出血，炎細(xì)胞不明顯。模型組大鼠肛周黏膜上皮見脫落欠整齊，局部鱗狀上皮層增厚，肛周組織黏膜上皮和鱗狀上皮間見損傷區(qū)，其間上皮組織缺損，大量嗜中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)并見炎細(xì)胞碎片，侵及黏膜下層或深部肌組織，見炎性滲出物及壞死組織，間質(zhì)或黏膜下水腫，小血管擴(kuò)張充血，見散在出血。結(jié)締組織增生反應(yīng)明顯，損傷區(qū)累及周邊組織。與對(duì)照組相比，模型組大鼠肛門直腸組織病理學(xué)評(píng)分顯著提高（P＜0.001）。經(jīng)消痔丸治療后，大鼠肛周黏膜上皮脫落減少，有的甚至呈現(xiàn)修復(fù)完好，局部鱗狀上皮層增厚明顯減輕，肛周組織黏膜上皮和鱗狀上皮見損傷區(qū)，其間上皮組織輕度缺損，缺損范圍較模型組明顯縮小，嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，炎性滲出物，間質(zhì)或黏膜下水腫和小血管擴(kuò)張充血程度明顯減輕，結(jié)締組織增生也呈現(xiàn)輕中度反應(yīng)。與模型組相比，消痔丸各給藥組病理學(xué)評(píng)分顯著降低（P＜0.05、0.001）。

圖1 各組大鼠肛門直腸組織病理結(jié)果（HE 染色）Fig.1 Pathological results of anorectal tissue of rats in each group (HE staining)

表4 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型病理形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分的影響（，n=3）Table 4 Effects of Xiaozhi Pills on histopathological damage score of acetic acid induced anal ulceration in rats (,n=3)

表4 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型病理形態(tài)學(xué)損傷評(píng)分的影響（，n=3）Table 4 Effects of Xiaozhi Pills on histopathological damage score of acetic acid induced anal ulceration in rats (,n=3)

與對(duì)照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01###P＜0.001***P <0.001 vs control group;#P <0.05 ##P <0.01 ###P <0.001 vs model group

3.3 消痔丸對(duì)大鼠肛門直腸組織中MMP-9、IL-6、TNF-α 的影響

如表5 所示，與對(duì)照組比較，模型組肛門直腸組織中MMP-9、IL-6、TNF-α 含量顯著增高（P＜0.001）。與模型組相比，消痔丸以及各給藥組均可顯著降低肛門組織中的MMP-9、IL-6、TNF-α 含量（P＜0.001）。

表5 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型肛門直腸組織中MMP-9、IL-6、TNF-α 含量的影響（，n=10）Table 5 Effects of Xiaozhi Pills on anorectal tissue MMP-9,IL-6,and TNF-α on acetic acid induced anal ulceration in rats(,n=10)

表5 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型肛門直腸組織中MMP-9、IL-6、TNF-α 含量的影響（，n=10）Table 5 Effects of Xiaozhi Pills on anorectal tissue MMP-9,IL-6,and TNF-α on acetic acid induced anal ulceration in rats(,n=10)

與對(duì)照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：###P＜0.001***P <0.001 vs control group;###P <0.001 vs model group

3.4 消痔丸對(duì)大鼠肛門組織中iNOS、TGF-β1、VEGFA 蛋白表達(dá)的影響

如表6、圖2 所示，與對(duì)照組比較，模型組肛門直腸組織中iNOS、VEGFA、TGF-β1 蛋白表達(dá)水平均顯著增高（P＜0.001）。與模型組比較，各給藥組可顯著降低iNOS、VEGFA 蛋白表達(dá)水平（P＜0.001），消痔丸1.62、3.24 g/kg 組可進(jìn)一步升高TGFβ1 蛋白表達(dá)水平（P＜0.05）。

圖2 免疫組化檢測(cè)各組大鼠肛門組織iNOS、VEGFA、TGF-β1 蛋白表達(dá)（×400）Fig.2 Expressions of iNOS,VEGFA and TGF-β1 protein in anorectal tissue of rats in each group detected by immunohistochemistry (×400)

表6 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型肛門直腸組織中iNOS、VEGFA、TGF-β1 蛋白表達(dá)的影響（，n=10）Table 6 Effects of Xiaozhi Pills on the expressions of iNOS,VEGFA and TGF-β1 protein in anorectal tissue of rats in each group (,n=10)

表6 消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)大鼠肛門潰瘍模型肛門直腸組織中iNOS、VEGFA、TGF-β1 蛋白表達(dá)的影響（，n=10）Table 6 Effects of Xiaozhi Pills on the expressions of iNOS,VEGFA and TGF-β1 protein in anorectal tissue of rats in each group (,n=10)

與對(duì)照組比較：***P＜0.001；與模型組比較：#P＜0.05 ###P＜0.001***P <0.001 vs control group;#P <0.05 ###P <0.001 vs model group

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為氣血不調(diào)，絡(luò)脈瘀滯，蘊(yùn)生濕熱是痔瘡的成因，與飲食起居、久站久行、便秘腹瀉、妊娠分娩、遺傳，以及風(fēng)、濕、瘀、熱等外因有關(guān)?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于痔的病因及發(fā)病機(jī)制研究較多，如肛墊下移學(xué)說、靜脈曲張學(xué)說、血管增生學(xué)說，但尚未取得一致結(jié)論。目前對(duì)痔組織的研究認(rèn)為痔組織主要由受損后異常擴(kuò)張的靜脈血管組成，靜脈內(nèi)常見血栓形成，此外還常伴有炎性改變（如淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞等炎性細(xì)胞浸潤(rùn)）、水腫和充血等，造成肛腸黏膜損傷，表面可見潰瘍形成[5]。消痔丸由12 味藥組成，方中地榆炭、白及、大黃等多味中藥具有收斂固澀、消腫生肌等功效?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪皂苷可抑制細(xì)胞間黏附分子 1（ICAM）、P-選擇素的表達(dá)，降低iNOS 的合成和谷胱甘肽的消耗，起到預(yù)防和治療腸道潰瘍性結(jié)腸炎的作用[6]；地榆炭涼血止血，研究發(fā)現(xiàn)鞣質(zhì)和鈣離子的增加可顯著縮短凝血時(shí)間并促進(jìn)血小板聚集，發(fā)揮止血作用[7]；槐角可下調(diào)IL-6 水平，抑制一氧化氮（NO）和前列腺素E2（PGE2）釋放，抑制核因子κB（NF-κB）核轉(zhuǎn)位和細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（ERK）磷酸化，表現(xiàn)出良好的抗炎活性；另外還可縮短斷尾小鼠的出血時(shí)間和凝血時(shí)間，具有明顯的促進(jìn)止血和凝血作用[8]；酒大黃中沒食子酸、大黃酚等成分可發(fā)揮收斂止血作用，大黃素、蘆薈大黃素等成分可發(fā)揮抗菌消炎作用，是有效對(duì)抗黏膜損傷和細(xì)菌感染的物質(zhì)基礎(chǔ)[9]；防己中的粉防己堿可通過抑制磷脂酶A2（PLA2），阻止單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞中PG 和白三烯的產(chǎn)生，對(duì)大鼠潰瘍性結(jié)腸炎具有明確的改善作用[10]；白及可通過激活外源性、內(nèi)源性凝血系統(tǒng)，調(diào)節(jié)6-酮前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）、血栓素B2（TXB2）水平，促進(jìn)血小板聚集，發(fā)揮止血功能，還可通過下調(diào)c-Jun 氨基末端激酶（JNK）及p38 絲裂原活化蛋白激酶（p38-MAPK）基因和蛋白表達(dá)水平，抑制炎癥因子TNFα、IL-1β 等異常分泌發(fā)揮黏膜保護(hù)、抗?jié)冏饔?，另外還具有促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和抗菌作用[11]。

醋酸致肛門潰瘍法可致局部紅腫、炎性滲出、潰瘍改變，與痔急性發(fā)作期表現(xiàn)的疼痛、便血、紅腫、滲出、黏膜糜爛等癥狀較為相近，且有維持時(shí)間較長(zhǎng)、可重復(fù)性較好等優(yōu)點(diǎn)[12]，采用該模型可以從保護(hù)黏膜損傷、抗炎消腫等多個(gè)角度，評(píng)價(jià)藥物“消腫生肌”的功效。因此，本研究采用醋酸貼敷法誘導(dǎo)大鼠肛周潰瘍模型，對(duì)肛周組織的大體觀察發(fā)現(xiàn)消痔丸可顯著加速潰瘍面的愈合，緩解紅腫和炎性滲出。微觀病理上可見大鼠肛周黏膜上皮脫落減少，局部鱗狀上皮層增厚明顯減輕，肛周組織黏膜上皮和鱗狀上皮缺損范圍較模型組明顯縮小，嗜中性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，炎性滲出物，間質(zhì)或黏膜下水腫和小血管擴(kuò)張充血程度明顯減輕，提示消痔丸對(duì)醋酸誘導(dǎo)的肛門潰瘍具有明顯的改善作用。

痔病臨床癥狀多表現(xiàn)為墜脹、便血、疼痛等，這與病變黏膜炎性水腫、血管損傷密切相關(guān)，而炎癥因子和炎癥細(xì)胞對(duì)炎癥過程具有決定作用。TNFα 是致炎作用最強(qiáng)、產(chǎn)生最快的炎癥介質(zhì)，一方面能夠激活細(xì)胞Ca2+內(nèi)流，釋放血小板活化因子，促進(jìn)血小板、淋巴細(xì)胞、白細(xì)胞黏附到腸黏膜的內(nèi)皮細(xì)胞上，誘導(dǎo)iNOS 生成，從而產(chǎn)生大量NO，引起細(xì)胞損傷；另一方面TNF-α 與IFN-γ 的共同作用能夠使腸上皮細(xì)胞的屏障功能及形態(tài)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，進(jìn)而增加腸黏膜和血管壁的通透性，最終破壞腸道黏膜的完整性，形成潰瘍[13]。IL-6 通過轉(zhuǎn)錄激活因子3 途徑激活NF-κB 信號(hào)通路而誘導(dǎo)細(xì)胞間黏附分子-1（ICAM-1）的極化表達(dá)，ICAM-1 激活信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，介導(dǎo)淋巴細(xì)胞之間、淋巴細(xì)胞與靶細(xì)胞之間的黏附，進(jìn)一步促進(jìn)炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，加重腸黏膜的組織損傷[14]。炎癥因子能對(duì)痔血管壁及血管內(nèi)皮造成氧化損傷，被氧化損傷的血管壁又不斷產(chǎn)生炎癥因子，形成惡性循環(huán)[15]。另外，局部炎癥可能導(dǎo)致基質(zhì)支架的扭曲和痔墊的滑動(dòng)，也可損傷固有層的小動(dòng)脈，導(dǎo)致排便時(shí)糜爛出血[16]。MMPs 能降解細(xì)胞外蛋白質(zhì)，如彈性蛋白、纖維連接蛋白和膠原蛋白，研究發(fā)現(xiàn)IL-1、TNF-α 和脂多糖等促炎細(xì)胞因子可特異性誘導(dǎo)MMP-9 的上調(diào)，充分激活的MMPs 可破壞毛細(xì)血管床，增加肛墊病理性移位和出血的風(fēng)險(xiǎn)[17-18]。本研究發(fā)現(xiàn)，消痔丸可顯著降低肛周組織中MMP-9、IL-6、TNF-α 含量，提示消痔丸可通過抑制炎癥因子釋放，有效減輕局部組織炎癥水腫的發(fā)生。

正常的愈合過程是由多個(gè)細(xì)胞間信號(hào)的整合啟動(dòng)，包括角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血小板等釋放細(xì)胞因子和趨化因子。iNOS 主要在病理狀態(tài)下由中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，研究發(fā)現(xiàn)潰瘍性結(jié)腸炎患者炎癥黏膜上皮細(xì)胞iNOS 表達(dá)率為100%，黏膜固有層約半數(shù)炎性細(xì)胞表達(dá)iNOS[19]，能催化合成NO，而NO 是調(diào)節(jié)血液循環(huán)、血小板活性、神經(jīng)傳遞、免疫和炎癥過程的關(guān)鍵因子，發(fā)揮炎性介質(zhì)作用。TGF-β1 是重要炎性細(xì)胞趨化因子，可趨化成纖維細(xì)胞和炎癥細(xì)胞向傷口聚集，促進(jìn)成纖維細(xì)胞大量合成膠原蛋白，促進(jìn)創(chuàng)面底部小血管的內(nèi)皮細(xì)胞的增生、分裂，誘導(dǎo)肉芽組織生長(zhǎng)和表皮形成，研究發(fā)現(xiàn)在胃潰瘍愈合過程中，內(nèi)源性TGF-β1 表達(dá)呈由弱到強(qiáng)的表現(xiàn)[20]。VEGF 作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞和血管，參與炎癥、損傷的修復(fù)，也是考察組織生長(zhǎng)和創(chuàng)傷愈合的重要指標(biāo)。在病理情況下，VEGF 含量增加可使毛細(xì)血管后靜脈和小靜脈的通透性增高而致使血液中的血漿蛋白、纖維蛋白、液體等外滲，導(dǎo)致周圍間質(zhì)水腫[21]。研究發(fā)現(xiàn)，痔組織水腫、出血的風(fēng)險(xiǎn)與VEGF陽性表達(dá)的增加呈正相關(guān)[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，消痔丸可顯著降低肛周直腸組織中iNOS、VEGFA 陽性表達(dá)，升高TGF-β1 陽性表達(dá)，提示消痔丸具有抑制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)潰瘍愈合的作用。

綜上所述，消痔丸通過抑制IL-6、TNF-α、MMP-9 相關(guān)細(xì)胞因子分泌和iNOS、VEGFA 蛋白表達(dá)，升高TGF-β1 表達(dá)對(duì)醋酸誘導(dǎo)的肛門潰瘍具有保護(hù)作用。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突