張良子 左琴琴 吳大洲 張泳 褚曉月 張薇薇 王紅 毛娟 徐華(陜西省血液中心，陜西 西安 710061)

輸血作為臨床治療的1 種重要手段，在臨床急救及許多疾病的治療中起著無法替代的作用。 紅細(xì)胞血型具有多種生物功能，但最主要的臨床意義是具有抗原性[1]。 紅細(xì)胞血型系統(tǒng)到目前為止已命名了45 個(gè)，共有360 種血型抗原[2]。其中高頻抗原陰性或者多種常規(guī)抗原組合呈陰性的視為稀有血型[3]。 稀有血型的臨床供應(yīng)是1 個(gè)國際性難題，當(dāng)稀有血型患者急需輸血而又找不到相合的血液時(shí)，在醫(yī)學(xué)上可能發(fā)生非常嚴(yán)重的并發(fā)癥甚至導(dǎo)致死亡[4]，因此解決已產(chǎn)生相應(yīng)意外抗體的稀有血型患者和有預(yù)見今后需多次輸血的稀有血型患者輸血難題的最佳手段便是建立稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2017～2023 年6 月陜西省血液中心無償獻(xiàn)血者，年齡18 ～60 周歲，所有獻(xiàn)血者均符合GB18467-2011《獻(xiàn)血者健康檢查要求》，標(biāo)本采集已事先征得獻(xiàn)血者的知情同意。

1.2 主要試劑與儀器

1.2.1 試劑 抗球蛋白試劑(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)；分析純尿素試劑(Vetec，批號(hào):041M0013V)；抗-C，抗-c，抗-E，抗-e，抗-D，抗-M，抗-N，抗-P1(上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司)；抗-Jka，抗-Jkb，抗-Fya，抗-Fyb，抗-Dia，抗-Lea，抗-Leb(GmbH，德國，克隆號(hào):MS-15，MS-8，M235-2，M261-4，A3，M125-2，M113-2)等；血液基因組DNA 提取離心柱形試劑盒(Roche，瑞士)；人類紅細(xì)胞稀有血型基因分析試劑盒(Innotrain Diagnostik GmbH，德國)；Taq 酶(Promega Corporation)；2X GC Buffer，6X Loading Buffer，dNTP，DL2000(TaKaRa，日本)，均在有效期內(nèi)使用。

1.2.2 儀器 水浴箱(德國，GFL)；臺(tái)式離心機(jī)(日本久保田，KA-2200 型)；顯微鏡(OLYMPUS，CX23)；全自動(dòng)血細(xì)胞洗滌離心機(jī)(日本日立，MC450)；臺(tái)式離心機(jī)(湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司，L600A)；PCR 儀(德國，Sensoquest Labcyler)；凝膠成像系統(tǒng)(Tanon 上海，T1600)。

1.3 鑒定紅細(xì)胞血型試驗(yàn)方法 無償獻(xiàn)血者的紅細(xì)胞血型鑒定按文獻(xiàn)[1]的方法和試劑操作說明進(jìn)行，M，N，P1，D，C，c，E，e，Jka，Jkb，Lea及Leb抗原采用鹽水試管法進(jìn)行鑒定；Dia，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb抗原采用抗人球試管法進(jìn)行鑒定；無償獻(xiàn)血者Dib抗原采用實(shí)驗(yàn)室已建立并發(fā)表的Diego 血型基因分型方法[5]進(jìn)行鑒定；Jk(a-b-)表型采用2mol/L 尿素溶解試驗(yàn)進(jìn)行篩選。

1.4 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)的建立

1.4.1 血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室組成 血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室主要由用戶端、應(yīng)用支撐層、數(shù)據(jù)層、硬件層等部分組成，見圖1。

圖1 血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室的組成及功能

1.4.2 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)設(shè)計(jì)流程 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)依托血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室，并與SHINOW9.5系統(tǒng)關(guān)聯(lián)。 由標(biāo)本接收、結(jié)果登記、供者檔案、庫存血液4 個(gè)模塊組成，各模塊功能描述如下。 1)樣本接收 錄入待檢測血型的無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血碼。 2)結(jié)果登記 登記無償獻(xiàn)血者各個(gè)血型系統(tǒng)抗原鑒定結(jié)果，保存后自動(dòng)進(jìn)入稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)數(shù)據(jù)庫。 3)供者檔案 當(dāng)收到非常見血型血液或稀有血型血液(缺失多個(gè)常規(guī)抗原或缺失某個(gè)高頻抗原)申請(qǐng)時(shí)，在供者檔案模塊通過數(shù)據(jù)庫查詢相應(yīng)抗原陰性的獻(xiàn)血者及其血液狀態(tài)(有無庫存)。 4)庫存血液 與SHINOW9.5 系統(tǒng)關(guān)聯(lián)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測稀有血型血液庫存狀態(tài)。

當(dāng)實(shí)驗(yàn)室收到臨床稀有或非常見表型血液申請(qǐng)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先確定該患者所存在意外抗體的特異性，并與臨床醫(yī)生及醫(yī)院輸血科了解患者情況，例如血液申請(qǐng)的緊急程度、所需血液的血型表型及用血量、患者的用藥史(可能會(huì)干擾輸血相容性檢測的藥物)、患者的親屬信息等。 再通過血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室—稀有血型庫—供者檔案，查詢庫中是否有相應(yīng)抗原陰性的獻(xiàn)血者血液，若無可用的紅細(xì)胞產(chǎn)品時(shí)，可進(jìn)一步查詢相容獻(xiàn)血者相關(guān)信息進(jìn)行獻(xiàn)血招募。

1.4.3 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)數(shù)據(jù)采集 將疑難配血進(jìn)行交叉配血時(shí)檢測的無償獻(xiàn)血者血型、固定獻(xiàn)血者(至少獻(xiàn)過3 次血，且近12 個(gè)月內(nèi)至少獻(xiàn)血1 次的無償獻(xiàn)血者)的Rh、Kidd、Lewis、MNS、P、Diego、Duffy、Kell 血型及篩選O 型獻(xiàn)血者D--、Jk(a-b-)、Dib-、Fya-血型分別導(dǎo)入、錄入血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室—稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)。

2 結(jié)果

2.1 西安地區(qū)無償獻(xiàn)血者人群Rh、MNSs、P1、Kidd、Lewis、Duffy 血型抗原分布 Rh 血型系統(tǒng)常規(guī)抗原C 陰性占比16.98%(1 048/6 144)，e 陰性15.22%(659/4 329)；MNSs 血型系統(tǒng)常規(guī)抗原M 陰性為25.65%(548/2 141)，N 陰性22.66%(46/203)；Kidd 血型系統(tǒng)常規(guī)抗原Jka陰性為28.16%(379/1 314)，Jkb陰性20.85%(281/1 247)。 Lewis 血型系統(tǒng)常規(guī)抗原Leb陰性占比20.18%(176/872)(表1)。

表1 西安地區(qū)無償獻(xiàn)血人群主要血型抗原分布

2.2 稀有血型獻(xiàn)血者血型分布 在5 398 名Rh 陰性無償獻(xiàn)血者中篩查到稀有Rh 表型獻(xiàn)血者273 名，其中A 型76 名，B型89 名，O 型85 名，AB 型23 名。 33 010 名無償獻(xiàn)血者中篩查到缺失多種常規(guī)抗原獻(xiàn)血者51 名，其中A 型16 名，B 型25 名，O 型10 名。 篩查到缺失高頻抗原的O 型獻(xiàn)血者共13名，其中Jk(a-b-)表型為0.019‰(3/158 484)，Di(a＋b-)表型為0.436‰(2/4 586)，F(xiàn)y(a-b＋)表型為4.03‰(8/1 983)，見表2。

表2 稀有血型獻(xiàn)血者血型分布

2.3 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)的工作流程 第一步，錄入待檢測血型的無償獻(xiàn)血者獻(xiàn)血碼，見圖2-A；第二步，登記無償獻(xiàn)血者各個(gè)血型系統(tǒng)抗原鑒定結(jié)果，保存后自動(dòng)導(dǎo)入稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)數(shù)據(jù)庫，見圖2-B；第三步，當(dāng)收到非常見血型血液或稀有血型血液(缺失多個(gè)常規(guī)抗原或缺失某個(gè)高頻抗原)申請(qǐng)時(shí)，在信息化供應(yīng)平臺(tái)查詢相應(yīng)抗原陰性的獻(xiàn)血者及其血液狀態(tài)(有無庫存)，見圖2-C；第四步，與SHINOW9.0 系統(tǒng)關(guān)聯(lián)，通過平臺(tái)實(shí)時(shí)監(jiān)測稀有血型實(shí)體庫血液庫存狀態(tài)，以備稀有血型患者的緊急用血，保障輸血安全，見圖2-D。

圖2 稀有血型血液信息化供應(yīng)平臺(tái)的工作流程

2.4 稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)的應(yīng)用 患者1，2023 年4 月某三甲醫(yī)院送檢直腸靜脈曲張便血患者，血型為A 型，ccDEe，M-N＋，Jk(a-b＋)，鑒定出存在IgM-M，IgG-C，IgG-Jka抗體，根據(jù)西安地區(qū)獻(xiàn)血者人群抗原分布(表1)計(jì)算A 型獻(xiàn)血者M(jìn)，C，Jka均為陰性的概率為3.69‰。 通過查詢稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)篩選符合條件的獻(xiàn)血者共3 名，見圖3-A。患者2，2023 年6 月某三甲醫(yī)院送檢肝硬化上消化道出血患者，急需輸血。 血型為B 型，CCDee，M-N＋，Jk(a＋b-)，血清中存在IgM-M，IgG-c，IgG-E，IgG-Jkb抗體，計(jì)算相容性獻(xiàn)血者總概率為5.9‰。 查詢稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)篩選符合條件的獻(xiàn)血者共15 名，成品庫中有2U 紅細(xì)胞懸液，解決了臨床對(duì)于血液的迫切需求，見圖3-B。

圖3 稀有血型血液信息化供應(yīng)平臺(tái)的查詢結(jié)果

3 討論

在臨床輸血實(shí)踐中，常有因妊娠或者多次輸血產(chǎn)生多種意外抗體，導(dǎo)致抗體鑒定難度增加的案例。 安全輸血面臨的重要挑戰(zhàn)之一就是保護(hù)受血者免受同種異體免疫對(duì)紅細(xì)胞抗原的不良反應(yīng)[6-8]。 2012—2023 年6 月，本實(shí)驗(yàn)室疑難配血患者標(biāo)本數(shù)，產(chǎn)生特異性意外抗體的數(shù)量和種類都在攀升，患者體內(nèi)存在兩種以上意外抗體的發(fā)生率32.53%(349/1 073)，合并存在3 個(gè)血型系統(tǒng)的意外抗體共8 例。 為避免可能出現(xiàn)的輸血安全問題，實(shí)驗(yàn)室需要準(zhǔn)確鑒定患者體內(nèi)意外抗體的特異性，并采用血清學(xué)方法和基因型方法鑒定患者血型抗原，以確定需要相合的獻(xiàn)血者血型，評(píng)估相容獻(xiàn)血者的頻率。 計(jì)算相容獻(xiàn)血者的頻率，必須將同血型獻(xiàn)血者的概率乘以每個(gè)抗原陰性獻(xiàn)血者的概率[3]。 本文患者1，患者2因多次輸血產(chǎn)生了3 個(gè)血型系統(tǒng)抗體，根據(jù)計(jì)算相容獻(xiàn)血者總概率分別為3.69‰，5.9‰。 若僅含有這些意外抗體中的任何一種，要找到相合血液并不困難，但是合并多種意外抗體則需要篩選大量的血液才能找到相合的血液。

藥物抗體也會(huì)干擾輸血相容性檢測的鑒定，接受CD38單抗治療的多發(fā)性骨髓瘤患者大多將接受多次輸血，為避免和推遲意外抗體的產(chǎn)生并排除漏檢的風(fēng)險(xiǎn)[9]，本實(shí)驗(yàn)室選取與患者ABO、Rh、Kidd、Lewis 等多個(gè)血型系統(tǒng)相合的獻(xiàn)血者血液，采用鹽水法、凝聚胺法、抗球蛋白法進(jìn)行交叉配血。 四個(gè)血型系統(tǒng)均相容的獻(xiàn)血者頻率低，要想獲得匹配的血液，篩選過程中將耗費(fèi)大量的人力、物力、財(cái)力。 一方面帶給患者龐大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，另一方面仍不能確保篩選到相合的血液進(jìn)而耽誤患者的臨床救治。 當(dāng)患者再一次需要輸血或者存在相同復(fù)雜意外抗體的其他患者需要輸血時(shí)，仍將繼續(xù)再一次重復(fù)如此的篩選工作[10-11]。

目前國內(nèi)建立的稀有血型庫大多指RhD(-)獻(xiàn)血者的信息庫和實(shí)體庫，只有極個(gè)別采供血機(jī)構(gòu)篩選缺乏某個(gè)(些)高頻抗原如Jk(a-b-)，Dib，F(xiàn)ya等的血液或者獻(xiàn)血者[12]。 當(dāng)面臨患者存在復(fù)雜意外抗體時(shí)，由于在獻(xiàn)血人群中缺失多個(gè)常規(guī)抗原獻(xiàn)血者的低分布，致使匹配困難，很難有更高效快捷的應(yīng)對(duì)措施[13-15]。 隨著信息技術(shù)的不斷發(fā)展，醫(yī)療機(jī)構(gòu)信息化建設(shè)逐步開始走向智能化發(fā)展方向，相較于采供血機(jī)構(gòu)信息化建設(shè)的飛速發(fā)展，臨床輸血的信息化建設(shè)仍較落后，尤其是建立實(shí)驗(yàn)室與采供血機(jī)構(gòu)信息共享平臺(tái)層面。

因此，在獻(xiàn)血人群中展開多種血型的篩選工作，建立稀有血型庫信息化供應(yīng)平臺(tái)系統(tǒng)，篩選出足夠多的稀有血型獻(xiàn)血者，上傳信息儲(chǔ)備至可實(shí)時(shí)共享的信息化管理平臺(tái)，并與采供血系統(tǒng)共享血液狀態(tài)，可為稀有血型人士提供輸血安全保障。 本研究依托血型與輸血智慧實(shí)驗(yàn)室，設(shè)計(jì)與建立稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)與采供血系統(tǒng)并機(jī)聯(lián)網(wǎng)，導(dǎo)入2017—2023 年6 月檢測的5 398 名Rh 陰性無償獻(xiàn)血者血型，33 010 名無償獻(xiàn)血者血型及從十萬多例O 型獻(xiàn)血者中篩查到的稀有血型獻(xiàn)血者血型。 數(shù)據(jù)庫中記載稀有Rh 表型獻(xiàn)血者信息273 例，缺失多種常規(guī)抗原獻(xiàn)血者信息51 例，缺失高頻抗原的O 型獻(xiàn)血者信息共13 例，其中Jk(a-b-)表型3例，Di(a＋b-)表型2 例，F(xiàn)y(a-b＋)表型8 例保存于稀有血型實(shí)體庫。 當(dāng)實(shí)驗(yàn)室收到臨床稀有或非常見表型血液申請(qǐng)時(shí)，可通過稀有血型信息化供應(yīng)平臺(tái)查詢是否有相應(yīng)抗原陰性的獻(xiàn)血者血液，若無可用的紅細(xì)胞產(chǎn)品時(shí)，可進(jìn)一步查詢相容獻(xiàn)血者相關(guān)信息進(jìn)行獻(xiàn)血招募。

綜上所述，構(gòu)建稀有血型血液信息化供應(yīng)平臺(tái)可解決臨床上對(duì)稀有血型血液的迫切需求，減少輸血反應(yīng)的發(fā)生，提高輸血療效，將為稀有血型人士的醫(yī)療服務(wù)提供安全保障。

利益沖突:所有作者均聲明不存在利益沖突。