陳云麗，顏仁梁，盧雪花，李麗莎，張亞敏，徐小妹，徐榕青，林文津,*

（1.福建省醫(yī)學科學研究院，福建省醫(yī)學測試重點實驗室，福建福州 350001；2.廣東食品藥品職業(yè)學院，廣東廣州 510000）

陳皮為蕓香科柑橘屬小喬木植物橘（Citrus reticulateBlanco）及其栽培變種的成熟果皮，最早記載于《神農本草經(jīng)》，是藥食同源類物質[1]，具有理氣健脾、燥濕化痰的功效[2]。2020 年版《中國藥典》收載陳皮和廣陳皮2 個藥材品種，其中，廣陳皮來源于橘的變種茶枝柑（Pericarpium Citri Reticulatae'Chachi'），廣東新會茶枝柑皮為廣陳皮的上品[3]?，F(xiàn)代研究表明，陳皮揮發(fā)油能溫和刺激胃腸道平滑肌，促進消化液分泌，排除腸道積氣，增加食欲[4]；陳皮中的黃酮和多糖化合物能清除自由基，具有抗氧化活性[5-6]，抗衰老；陳皮含有的維生素C 能降低膽固醇、預防血管破裂或滲血，和維生素P 服用，治療壞血病，經(jīng)常飲用橘皮茶，對動脈粥樣硬化或維生素C缺乏者有益[7]；橙皮苷能降低膽固醇，調節(jié)腸胃功能和抗血栓形成[4]。陳皮還具有抗腫瘤[8-9]、降血脂[10]、抗肝損傷[11]等多種藥理作用，在臨床上廣泛用于治療惡心嘔吐、咳嗽、消化不良、貧血和呼吸道炎癥綜合征等[12-13]。陳皮主要含黃酮類[14]、揮發(fā)油類[13]、生物堿類[15]、多糖類[16]等成分，對陳皮化學成分的研究主要集中于對不同儲存年限、不同產地黃酮[2,17-18]和揮發(fā)油成分[19-21]的分析。

《日用本草》云“陳皮多年者更妙”，陳皮久置時間不同，其成分和藥理活性存有一定差別[22]，對其變化趨勢，不同學者研究不一。目前對于陳皮年份的鑒別常通過拉曼光譜[23]、性狀鑒別[24]、近紅外光譜[25-26]或測定其成分組成與含量[27-28]。采用性狀鑒別，操作簡單快速，但具有主觀性，準確率低。近紅外光譜和光譜學是一種快速、無損、綠色的年份鑒別方法，但需要多種預處理方法優(yōu)化光譜，消除儀器或樣品的干擾，且為單點檢測，不能直觀觀察整個樣本，對樣本本質的評估會有偏差[29]。通過化學方法判別，能檢測到的成分種類少，不能完全體現(xiàn)陳皮陳化過程中所有化學成分的變化。這些方法也不能闡述陳皮的陳化機制，代謝組學可以全面地對生物系統(tǒng)中小分子代謝物進行定性和定量研究，為一種發(fā)現(xiàn)生物過程活性驅動因素的技術，適合研究和分析傳統(tǒng)中藥，突顯中藥的藥理生物活性和生化機制[30-32]。廣泛靶向代謝組學技術通過多反應監(jiān)測技術采集大量的數(shù)據(jù)并建立代謝物標本數(shù)據(jù)庫實現(xiàn)對代謝物高通量、準確的定性定量[31]，能深入闡述樣本的生物活性過程及陳化機制。

顏仁梁等[33]利用UPLC-MS/MS 結合廣泛靶向代謝組學對陳化1 年、3 年和5 年廣陳皮化學成分的差異進行研究發(fā)現(xiàn)，在五年的陳化過程中，隨著陳化時間的增加，廣陳皮化學成分逐漸趨于穩(wěn)定。隨著存儲年限再延長，廣陳皮成分是否會產生新的差異有待進一步研究。本實驗采用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜（UPLC-MS/MS）結合廣泛靶向代謝組學對陳化7 年以上3 種不同年限（7 年、9 年、11 年）的廣陳皮化學成分進行組分鑒別分析，使用主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA）等多元統(tǒng)計分析方法對不同陳化年限廣陳皮化學成分差異代謝物進行定量分析，并對差異代謝物的代謝通路進行富集分析和拓撲分析，為深入研究廣陳皮陳化機制提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實驗所用18 個廣陳皮樣品 由廣東食品藥品職業(yè)學院顏仁梁副研究員提供；甲醇、乙腈 色譜級，德國CNW Technologies 公司；甲酸 色譜級，德國SIGMA 公司。

ExionLC AD 超高效液相色譜儀 美國Sciex公司；QTrap 6500+高靈敏度質譜儀 美國Sciex 公司；Heraeus Fresco17 離心機 美國Thermo Fisher Scientific 公司；明澈D24 UV 純水儀 德國Merck Millipore 公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 陳皮樣品采集 實驗所用陳皮樣品均采自廣東省江門市新會陳皮核心產區(qū)，經(jīng)廣東食品藥品職業(yè)學院梁永樞副研究員鑒定為蕓香科植物廣陳皮茶枝柑干燥成熟果皮，陳化時間分別為2014 年（7Y）、2012 年（9Y）、和2010 年（11Y）新會陳皮，分為3 組，每組3 個樣品，每個樣品分裝成兩份，共18 份，每份各檢驗一次，并兩兩對比（11Y VS 9Y，11Y VS 7Y 和9Y VS 7Y），7Y 廣陳皮采集地：廣東省江門市新會區(qū)天馬村、梅江、雙水南岸；9Y 廣陳皮采集地：廣東省江門市新會區(qū)茶坑村、圍墾村、雙水南岸；11Y 廣陳皮采集地：廣東省江門市新會區(qū)天馬村（2 份樣品）、茶坑村。

1.2.2 樣品制備 樣品處理方法、質譜與色譜條件參考文獻報道方法[33-35]。將陳皮樣本冷凍干燥后進行研磨（60 Hz，30 s），稱取50 mg 的樣品，加入700 μL提取液（甲醇水，體積比3:1，-40 ℃ 預冷，含內標2-氯苯丙氨酸），渦旋30 s（35 Hz），勻漿4 min，冰水浴超聲（35 Hz，5 min），重復勻漿超聲3 次，并在混勻儀上過夜（4 ℃），將樣品于4 ℃，12000 r/min 離心15 min，取上清液經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜過濾，并保存于進樣瓶中，用于UPLC-MS/MS 分析。

1.2.3 質控樣品 質控樣本（QC）由18 份陳皮樣本提取物混合制備而成，樣品制備項下提取得到的陳皮上清液用提取液稀釋10 倍，渦旋30 s 后，每個樣本稀釋液各取20 μL 混合成QC 樣本，加入內標2-氯苯丙氨酸，QC 樣本內標濃度相同，在儀器分析過程中，每10 個檢測分析樣本中插入一個質控樣本，以監(jiān)測分析過程的重復性。

1.2.4 分析條件

1.2.4.1 色譜條件 色譜柱：Waters Acquity UPLC HSS T3（1.8 μm，2.1×100 mm）；柱溫：40 ℃；進樣體積：2 μL；流速：400 μL/min；流動相A：0.1%甲酸水溶液，流動相B：乙腈；梯度洗脫條件：0～0.5 min（保持2% B），0.5～10 min（2% B～50% B），10～11 min（50% B～95% B），11～13 min（保持95% B），13～13.10 min（95% B～2% B），13.1～15 min（保持2%B）；自動進樣器溫度：4 ℃。

1.2.4.2 質譜條件 檢測儀器：SCIEX 6500 QTRAP+三重四極桿質譜儀（IonDrive Turbo VESI 離子源），結合使用電噴霧電離（ESI）正離子和負離子模式進行檢測。離子源參數(shù)：離子噴霧電壓：+5500/-4500 V；氣簾氣流速：35 psi；離子源溫度：400 ℃；GSI 氣體流速：60 psi；GSII 氣體流速：60 psi；去簇電壓：±100 V；以多反應監(jiān)測 （MRM）模式進行質譜分析。

1.3 數(shù)據(jù)處理

質譜數(shù)據(jù)：使用SCIEX Analyst Work Station Software （Version 1.6.3）對所有數(shù)據(jù)及目標化合物定量分析。 利用MSconventer 軟件將質譜原始數(shù)據(jù)轉成TXT 格式，并使用自撰寫R 程序包結合自建數(shù)據(jù)庫完成提峰、注釋等工作。代謝組數(shù)據(jù)：先對單個峰基于四分位距對偏離值進行過濾以去除噪音，只保留單組空值不多于50%或所有組中空值不多于50%的峰面積數(shù)據(jù)；其次對原始數(shù)據(jù)中的缺失值進行模擬，數(shù)值模擬方法為最小值二分之一進行填補；最后對數(shù)據(jù)進行標準化處理，利用內標進行歸一化。將處理好的數(shù)據(jù)導入SIMCA 軟件，進行主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA）等多元統(tǒng)計分析，然后根據(jù)OPLS-DA 模型第一主成分的變量投影重要度（Variable Importance in the Projection，VIP）大于1 且t檢驗（t-test）的P值（P-value）小于0.05，進行差異性代謝物篩選。利用KEGG 等數(shù)據(jù)庫對差異代謝物的代謝途徑進行富集分析和拓撲分析，找到與代謝物差異相關性最高的關鍵通路。

2 結果與分析

2.1 不同年限廣陳皮代謝組學的分析

使用UPLC-MS/MS 對混樣質控QC 樣品進行檢測，對兩次QC 樣本總離子流（TIC）出峰保留時間和峰面積進行重疊分析，判斷代謝物提取和檢測的重復性，為數(shù)據(jù)的質量提供保障[36]。QC 樣本的總離子流圖如圖1 所示，QC 樣本TIC 保留時間和峰面積重疊很好，表明儀器穩(wěn)定性好，數(shù)據(jù)可靠。

圖1 QC 樣本質譜檢測TIC 重疊圖Fig.1 TIC overlap diagram of QC sample mass spectrometry detection

對7 年、9 年和11 年廣陳皮代謝物進行質譜定性定量分析，從18 個實驗樣本及QC 樣本中提取出779 個峰（Peak），經(jīng)預處理（見1.3 數(shù)據(jù)處理）后778 個峰被保留，代謝物高分辨二級質譜數(shù)據(jù)與公共數(shù)據(jù)庫進行比對，利用質譜定性分析匹配得到物質名稱，鑒定出27 類778 種化合物，分別屬于黃酮類、植物激素類、氨基酸及其衍生物、萜類、生物堿類、其他類等27 類化合物，其他類包括苯甲醛類、苯甲酸衍生物、吡咯烷類、二惡烷類、胍類、甲亞胺酸及其衍生物、芪類等，其中黃酮類和萜類化合物較多，如表1 所示。在 7 年、9 年和 11 年廣陳皮均檢出 778種化合物。

表1 不同年限廣陳皮中代謝物分類及峰面積占比Table 1 Metabolites classification and proportion of peak area of Pericarpium Citri Reticulatae 'Chachi' under different aging years

2.2 不同年限廣陳皮代謝組學差異分析

主成分分析（Principal Component Analysis，PCA）是一種無監(jiān)督模型，可以揭示數(shù)據(jù)的內部結構，更好地解釋數(shù)據(jù)變量[37]，三組陳皮代謝組數(shù)據(jù)經(jīng)標準化處理后進行PCA 分析，結果見圖2 所示，第一主成分（PC1）的貢獻率為51.8%，第二主成分（PC2）的貢獻率為26.2%，R2X＝0.544，樣本全部處于95%置信區(qū)間內，三組廣陳皮樣本并沒有區(qū)分開，有部分數(shù)據(jù)靠近，可能是由于品種相同、代謝物種類相近的原因造成。由于PCA 是無監(jiān)督分類模型，數(shù)據(jù)會受許多與分組信息無關的變量影響，因此，進行了有監(jiān)督分類模型OPLS-DA。

采用正交偏最小二乘法-判別分析（OPLS-DA）統(tǒng)計方法，可以過濾掉代謝物中與分類變量不相關的正交變量，并對非正交變量和正交變量分別分析，從而獲取更加可靠的代謝物組間差異與實驗組的相關程度信息[38]。OPLS-DA 結果如圖3 和表2 所示，從結果可以看出，樣本全部處于95%置信區(qū)間內，Q2值大于等于0.4，說明OPLS-DA 預測性可接受，各兩組樣本分布于左右側置信區(qū)間內，樣本點間沒有重疊，區(qū)分效果較好。樣本點之間分布相對分散，這可能與采樣地點不同有關，由OPLS-DA 結果可以看出，陳化時間、產地對廣陳皮的代謝有一定的影響。

表2 OPLS-DA 模型參數(shù)和置換檢驗Table 2 OPLS-DA model parameters and permutation tests

圖3 廣陳皮OPLS-DA 模型的得分散點圖Fig.3 Score scatter plot of OPLS-DA model for Pericarpium Citri Reticulatae 'Chachi'

OPLS-DA 置換檢驗隨機模型（次數(shù)n=200）如表2 所示，其模型Q2值均小于原模型的Q2值；Q2的回歸線與縱軸的截距小于零；同時隨著置換保留度逐漸降低，置換Y 變量比例增大，隨機模型的Q2逐漸下降。說明原模型具良好的穩(wěn)健性，不存在過擬合現(xiàn)象，即OPLS-DA 得分圖結果準確。

2.3 不同年限廣陳皮之間差異代謝分析

2.3.1 不同年限廣陳皮差異代謝物鑒定與分析 利用t檢驗（t-test）的P值（P-value）和 OPLS-DA 模型第一主成分的變量投影重要度（Variable Importance in the Projection，VIP）篩選各組間的差異代謝物，VIP 值可以衡量各代謝物組分含量對樣本分類判別的影響強度和解釋能力，輔助標志代謝物的篩選[33]。當代謝物同時滿足P<0.05 和VIP>1 這兩個條件時，則認為存有差異。其中11Y VS 9Y 共篩選出22 類65 種差異代謝物，如表3 所示，占比較多的是黃酮、萜類、生物堿和酚類，有38 種差異代謝物上調和27 種差異代謝物下調，上調物質多為黃酮、氨基酸及其衍生物和核苷酸及其衍生物類物質，下調物質多為生物堿和萜類，其中下調物質萜類為單萜和倍半萜，是揮發(fā)油的主要成分，具有揮發(fā)性。9Y VS 7Y 篩選到14 類32 種差異代謝物，占比較多的是萜類、黃酮、氨基酸及其衍生物、酚類和生物堿，19 個差異代謝物上調和13 個差異代謝物下調，上調物質多為黃酮和酚類，下調物質多為萜類，為環(huán)烯醚萜和三萜類物質。其中高麗槐素、別隱品堿、育亨酸一水化合物、乙酸龍腦酯和Altholactone 在9Y VS 7Y 組中上調，在11Y VS 9Y 下調；N,N-二甲基苯胺、3,4,5,6-四氫吡啶-2-羧酸和Ipecoside 變化與之相反。11Y VS 7Y 篩選到20 類62 種差異代謝物，占比較多的是黃酮、萜類、氨基酸及其衍生物、苯丙素類和酚類，47 種差異代謝物上調和15 種差異代謝物下調，上調物質多為黃酮、氨基酸及其衍生物、苯丙素類和酚類，下調物質多為萜類，且多為三萜類物質。但高麗槐素、別隱品堿、育亨酸一水化合物、乙酸龍腦酯、Altholactone、N,N-二甲基苯胺、3,4,5,6-四氫吡啶-2-羧酸和Ipecoside 這些化合物在11Y VS 7Y 中為非顯著差異代謝物。3-羥基-3-甲基谷氨酸、錦葵色素3-O-葡糖苷、乳菇紫素、杜克苷A、右美托咪定、吳茱萸苦素和奇霉素在11Y VS 7Y、9Y VS 7Y 組上調，茉莉酸變化與之相反，但這些化合物在11Y VS 9Y 中為非顯著差異代謝物。

表3 不同年限廣陳皮差異代謝物Table 3 Differential metabolites of Pericarpium Citri Reticulatae 'Chachi' under different aging years

2.3.2 不同年限廣陳皮主要代謝成分比較分析 廣陳皮陳化7～11 年過程中，共發(fā)現(xiàn)778 種化學成分、121 種差異代謝物，差異代謝物占比約16%，而有約84%的成分保持穩(wěn)定，不同陳化年限廣陳皮代謝物有較大差異，11Y VS 9Y 和11Y VS 7Y 組篩選得到的差異代謝物種類和數(shù)量比9Y VS 7Y 多，在7～11 年這過程中，隨著陳化時間的增加，廣陳皮差異代謝物的數(shù)量和種類趨于增多，陳化時間對黃酮類、萜類、氨基酸及其衍生物影響較大。

將各兩組對比篩選得到的差異代謝物結果以韋恩圖（Venn Plot）的方式進行展示，用于發(fā)現(xiàn)多組間差異代謝物，如圖4 所示。三組共同交集差異代謝物成分僅為1-Methyladenine（1-甲基腺嘌呤，核苷酸及其衍生物）和L-Methionine（L-蛋氨酸，氨基酸及其衍生物），而1-甲基腺嘌呤和L-蛋氨酸在9Y VS 7Y 組中表現(xiàn)下調，在11Y VS 9Y 和11Y VS 7Y 組上調，各比較組間差異代謝物相差較大。

圖4 不同陳化年限廣陳皮差異代謝物比較韋恩圖Fig.4 Venn plot for differential metabolites comparison of Pericarpium Citri Reticulatae 'Chachi' under different aging years

2.3.3 不同年限廣陳皮差異代謝物通路分析 利用KEGG、HDMB 和PubChem 數(shù)據(jù)庫對差異代謝物的代謝途徑進行富集分析和拓撲分析，找到與代謝物差異相關性最高的關鍵代謝通路，通過分析發(fā)現(xiàn)：11Y VS 9Y 有14 種差異代謝物富集在15 條通路中，9Y VS 7Y 有7 種差異代謝物富集14 條通路中，11Y VS 7Y 有12 種差異代謝物富集17 條通路中，代謝通路分析的結果以氣泡圖展示，如圖5 所示。有5 條通路是11Y VS 9Y、9Y VS 7Y 和11Y VS 7Y 所共有，分別是：Valine, leucine and isoleucine biosynthesis（纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸生物合成）、Cysteine and methionine metabolism（半胱氨酸和蛋氨酸代謝）、Aminoacyl-tRNA biosynthesis（氨酰tRNA 生物合成）、Glucosinolate biosynthesis（葡萄糖苷酸生物合成）和Purine metabolism（嘌呤代謝）。這些差異代謝物參與的代謝途徑可能與廣陳皮陳化機制有關。

圖5 廣陳皮代謝通路氣泡圖Fig.5 Path bubble chart for Pericarpium Citri Reticulatae'Chachi' metabolomics

由圖5 綜合可知，Monoterpenoid biosynthesis（單萜類生物合成）處的氣泡顏色最深，而且最大，說明該通路對11 年和9 年廣陳皮之間的差異影響最大，11Y VS 9Y 中萜類成分為單萜和倍半萜；其次是黃酮類物質參與的代謝通路（黃酮和黃酮醇生物合成）、氨基酸及其衍生物參與的代謝通路（丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、半胱氨酸和蛋氨酸代謝、甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝）代謝通路對不同年限廣陳皮陳化的影響較大，總之，陳化時間對黃酮類、萜類、氨基酸及其衍生物影響較大，隨著陳皮儲藏年限延長，三類化合物種類和數(shù)目也增多。

另外，篩選出的121 種差異代謝物中有34 個化合物能被注釋到KEGG 數(shù)據(jù)庫現(xiàn)有的通路，主要包括17 類34 個差異代謝物，富集在45 條通路中，6 種黃酮（包括類黃酮）、6 種氨基酸及其衍生物、4 種單萜、1 種核苷酸及其衍生物、1 種糖類、1 種脂肪酰類、2 種苯丙素類、2 種酚類、1 種芳香類化合物、1 種其他類、3 種生物堿、1 種植物激素、2 種有機氧化合物、1 種羧酸類及其衍生物、1 種醇類和多元醇及1 種有機氮化合物。差異代謝物被注釋最多的是黃酮和氨基酸及其衍生物這2 種類別，其中黃酮類物質主要參與黃酮和黃酮醇生物合成、類黃酮生物合成、次級代謝產物的生物合成等多條代謝通路；氨基酸及其衍生物主要參與纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸生物合成、甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝、嘌呤代謝、氨酰tRNA 生物合成、次級代謝產物的生物合成等多條代謝通路。聚類分析結果以熱圖表示，如圖6 所示，不同陳化年限廣陳皮代謝物有較大差異，同型絲氨酸（Log2 FC:0.89）、槲皮素（Log2 FC:0.96）、矢車菊素（Log2 FC:1.05）、景天庚酮糖（Log2 FC:0.82）、L-蘇氨酸（Log2 FC:0.89）、麥芽三糖（Log2 FC:1.26）、N-甲酰蛋氨酸（Log2 FC:2.18）等成分在11Y VS 9Y 中上調；胸苷（Log2 FC:1.17）、鞘氨醇（Log2 FC:1.41）、D-果糖-6-磷酸（Log2 FC:0.82）、別隱品堿（Log2 FC:0.81）、高麗槐素（Log2 FC:1.62）等成分在9Y VS 7Y 中上調；苯乙酰甘氨酸（Log2 FC:1.54）、N-甲酰蛋氨酸（Log2 FC:1.15）、L-蘇氨酸（Log2 FC:0.78）、L-蛋氨酸（Log2 FC:1.04）、同型絲氨酸（Log2 FC:0.78）、黃顏木素（Log2 FC:0.61）、姜黃素（Log2 FC:0.91）、松柏苷（Log2 FC:1.95）、順式玉米素（Log2 FC:1.95）、金合歡素（Log2 FC:1.40）、6-氨基-2-氧代己酸（Log2 FC:0.4）等成分在11Y VS 7Y 中上調。

圖6 廣陳皮差異代謝物熱圖Fig.6 Heat map of differential metabolites for Pericarpium Citri Reticulatae 'Chachi'

3 討論與結論

本研究運用超高效液相色譜-串聯(lián)質譜廣泛靶向代謝組學技術對7 年、9 年、11 年廣陳皮化學成分進行組分鑒別分析，共鑒定出27 類778 個化合物，主要為黃酮類（121 個）和萜類（90 個）等成分，高于利用頂空固相微萃取-全二維氣相色譜-飛行時間質譜結合化學計量學方法檢測到的約500 種廣陳皮化合物[39]，778 個化合物中共篩選出121 種差異代謝物，說明7 年到11 年陳化過程中，約84%的成分保持穩(wěn)定，約16%是差異代謝物，差異代謝物中黃酮類、氨基酸及其衍生物和萜類占比較多。與前文研究報道[33]的5 年內廣陳皮陳化后化學成分變化情況比較，檢出了更多的成分，但7 年后廣陳皮化學成分變化較小，差異代謝物比例下降，主要是苷類變化較大，可能與苷類成分降解有關，具體機制有待進一步研究。

本實驗三組間共同交集差異代謝物成分為1-Methyladenine（1-甲基腺嘌呤，核苷酸及其衍生物）和L-Methionine（L-蛋氨酸，氨基酸及其衍生物），各比較組間相差較大，可能是由于陳化時間或者產地不同等造成的。在本次研究中發(fā)現(xiàn)，高麗槐素、別隱品堿、育亨酸一水化合物、乙酸龍腦酯、Altholactone在9Y VS 7Y 組中上調，在11Y VS 9Y 下調；N,N-二甲基苯胺、3,4,5,6-四氫吡啶-2-羧酸和Ipecoside 與之變化相反。但高麗槐素、別隱品堿、育亨酸一水化合物、乙酸龍腦酯、Altholactone、N,N-二甲基苯胺、3,4,5,6-四氫吡啶-2-羧酸和Ipecoside 這些化合物在11Y VS 7Y 中為非顯著差異代謝物。3-羥基-3-甲基谷氨酸、錦葵色素3-O-葡糖苷、乳菇紫素、杜克苷A、右美托咪定、吳茱萸苦素和奇霉素在11Y VS 7Y、9Y VS 7Y 組上調，茉莉酸變化與之相反，但這些化合物在11Y VS 9Y 中為非顯著差異代謝物。具體原因有待下一步深入研究。

7～11 年廣陳皮陳化期間，陳化年限不同的廣陳皮代謝物有較大差異，隨著陳化時間的增加，廣陳皮差異代謝物的數(shù)量和種類趨于增多，陳化時間對黃酮類、萜類、氨基酸及其衍生物影響較大。在差異代謝物涉及的代謝通路方面，與代謝物差異相關性最高的關鍵通路有：單萜類生物合成、黃酮和黃酮醇生物合成、氨基酸及其衍生物參與的代謝通路（丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代謝、甘氨酸、絲氨酸和蘇氨酸代謝、半胱氨酸和蛋氨酸代謝），為陳化機制研究奠定堅實基礎。

由于本實驗僅對7 年到11 年內的廣陳皮樣品進行研究，隨著存儲年限再延長，差異代謝物是否會有新的變化，需要進一步檢測研究。但隨著陳化時間越長，樣本取樣難度也越大，特別是收集新會區(qū)同一產地不同陳化年限的樣本，另外，雖然陳化7～11 年的廣陳皮還有較多的差異化學成分，但這些差異化學成分是否對其品質是產生顯著影響，需要結合體內外藥理實驗或臨床試驗進一步驗證。