黃琦 韓秉辰 陳丹丹 黃先菊 李竣 陳曉
【摘 要】目的:探尋川烏不同方法炮制過(guò)程中的關(guān)鍵點(diǎn)及對(duì)毒性成分的影響,建立感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。方法:按照常壓煮制、常壓蒸制、高壓煮制、高壓蒸制、切片蒸制、切片煮制6種工藝對(duì)川烏進(jìn)行炮制,采用高效液相色譜法(HPLC法)對(duì)炮制過(guò)程中樣品內(nèi)藥典中規(guī)定的新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿6種生物堿含量進(jìn)行檢測(cè),并結(jié)合斯科維爾指數(shù)法對(duì)炮制品麻度進(jìn)行分級(jí),綜合形貌特征選擇最佳工藝和質(zhì)量控制點(diǎn)。結(jié)果:6種炮制方法中雙酯型生物堿總量均符合藥典規(guī)定的不超過(guò)0.040%限量要求,切片蒸制、切片煮制中的單酯型生物堿總含量分別為0.064%、0.031%,不符合藥典規(guī)定范圍0.070%~0.15%;常壓煮制、常壓蒸制、高壓煮制、高壓蒸制的單酯型生物堿含量達(dá)到峰值的時(shí)間分別為2h、5h、1h、0.5h。川烏切片內(nèi)心為暗黃或黑色,麻度等級(jí)為1或2時(shí)符合藥典規(guī)定“切開(kāi)內(nèi)無(wú)白心,口嘗微有麻舌感”。結(jié)論:最佳工藝為川烏浸泡24h后常壓煮制2h。與生物堿含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比,炮制過(guò)程中質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)為川烏切片內(nèi)心暗黃色、麻度等級(jí)為1。
【關(guān)鍵詞】 川烏;生物堿;炮制;斯科維爾指數(shù)法
【中圖分類號(hào)】R283.1 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517(2023)16-0025-08
DOI:10.3969/j.issn.1007-8517.2023.16.zgmzmjyyzz202316006
Effect of Different Processing Methods on Toxic Components of Radix Aconiti and Its Quality Evaluation
HUANG Qi1 HAN Bingchen1 CHEN Dandan1 HUANG Xianju1 LI Jun1 CHEN Xiao2*
1.College of pharmacy to South-Central Minzu University,Wuhan 430070,China;2.YaoSheng traditional Chinese Medicine Technology Co.,Ltd,Zaoyang 441200,China
Abstract: Objective To explore the key points in the processing of Radix Aconiti with different methods and their effects on toxic components,and establish sensory evaluation standards.Methods Radix Aconiti was processed according to six processes:normal pressure cooking,normal pressure steaming,high pressure steaming,post slicing steaming and post slicing boiling.High performance liquid chromatography (HPLC) was used to detect the content of six alkaloids in the sample during processing,neoaconitine,aconitine,hypaconitine,benzoyl neoaconitine,benzoyl aconitine and benzoyl aconitine,as specified in the Pharmacopoeia.and the hemp degree of the processed products was graded by combining Scoville index determination method.The best process and quality control points were selected based on the morphology and characteristics.Results The total content of diester type alkaloids in the six processing methods all met the requirements of the pharmacopoeia,which did not exceed 0.040% of the limit.The total content of monoester type alkaloids in slice steaming and slice boiling was 0.064% and 0.031% respectively,which did not meet the standard of 0.070%~0.15% specified in the pharmacopoeia.The total content of monoester alkaloids prepared under normal pressure,normal pressure,high pressure and high pressure was in line with the range specified in the pharmacopoeia,and the peak time was 2 h,5 h,1 h and 0.5 h respectively.The inner part of the section is dark yellow or black.When the degree of numbness is 1 or 2,it complies with the provisions of the pharmacopoeia:“There is no white heart in the section,and the taste is tingling”.Conclusion The best process is to soak Radix Aconiti for 24 hours and boil it for 2 hours under normal pressure.Compared with the results of alkaloid content determination,the key points of quality control in the processing process are dark yellow inside the Radix Aconiti section and the hemp degree grade is 1.
Key words: Radix Aconiti; Alkaloid; Process; Scoville Index Setermination Method
川烏屬于毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的干燥根部[1],主要分布在四川、湖北、云南和陜西等地。生物堿是川烏的主要毒性成分和活性物質(zhì),炮制后的川烏具有祛風(fēng)除濕、溫經(jīng)止痛的功效,臨床上主要用來(lái)治療風(fēng)濕痹證[2]。另外,川烏是大毒之品,川烏中生物堿會(huì)導(dǎo)致心臟毒性和神經(jīng)毒性[3],目前認(rèn)為川烏中主要毒性成分為雙酯型生物堿(新烏頭堿、烏頭堿、次烏頭堿),經(jīng)過(guò)炮制加工后,毒性較大的雙酯型生物堿水解為毒性為其1/2000~1/4000的單酯型生物堿(苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿)[3-7]。川烏炮制的方法有很多,歷代記載的炮制方法有70多種[8]?,F(xiàn)代川烏炮制工藝有水煮法,蒸法,微波法等[9-11],也有采取川烏趁鮮切薄片后炮制的方法[12]。由于不同飲片加工企業(yè)炮制設(shè)備工藝存在差異,川烏飲片的質(zhì)量難以進(jìn)行控制。
此外,“口嘗微有麻舌感”是藥典中制川烏的評(píng)價(jià)方式之一,但針對(duì)川烏麻度分級(jí)國(guó)內(nèi)外尚未建立感官評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),“麻”作為質(zhì)量評(píng)價(jià)方式與炮制工藝中的技術(shù)指標(biāo)難以在產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定及進(jìn)行檢驗(yàn)。
本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比常壓煮制、常壓蒸制、高壓煮制、高壓蒸制和切片后蒸煮法,探究不同的炮制方法中藥典規(guī)定的生物堿含量變化;并參照和借鑒花椒麻度評(píng)價(jià),結(jié)合斯科維爾指數(shù)法川烏毒效成分含量,綜合川烏炮制過(guò)程中切片形貌顏色變化,建立了川烏麻度的感官評(píng)價(jià)分析,為優(yōu)選川烏炮制減毒的方法提供參考,為中藥感官評(píng)價(jià)分析標(biāo)準(zhǔn)提供思路。
1 儀器與材料
1.1 儀器 高效液相色譜儀 Waters 2965 :alliance;色譜柱ZORBAX Extend-C18 4.6mm×150mm 5-Micron:Agilent technologies;萬(wàn)分之一天平CP224C:奧豪斯儀器有限公司;十萬(wàn)分之一天平 AUW120D:島津公司;電子天平JM20002:余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司;移液槍:Eppendorf;高壓滅菌鍋YXQ-50SII :北京東南儀誠(chéng)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;超聲波清洗器 KQ-500E:昆山市超聲儀器有限公司;高壓鍋、蒸煮鍋、25L食品級(jí)不銹鋼桶、C22-T2240多功能電磁爐:均購(gòu)置廣東美的生活電器制造有限公司。
1.2 材料 川烏藥材由湖北藥昇中藥科技有限公司提供,并經(jīng)中南民族大學(xué)劉新橋副教授鑒定為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaelii Debx.的干燥母根。色譜純乙腈:SIGMA-ALDRICH;冰醋酸,三乙胺,鹽酸,分析純甲醇均購(gòu)置于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。純凈水:杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司。烏頭堿(aconitioe,HPLC≥98%,批號(hào):DST200729-006,樂(lè)美天醫(yī)藥德思物生物公司)[JP3];次烏頭堿(hypaconitine,HPLC≥98%,批號(hào):20170324,寶雞市辰光生物科技有限公司);新烏頭堿(mesacontine,HPLC≥98%,批號(hào):Y12A7H19379,上海源葉生物科技有限公司);苯甲酰烏頭原堿(benzoylacontine,HPLC≥98%,批號(hào):P16A7F19499,上海源葉生物科技有限公司);苯甲酰新烏頭原堿(benzoylmesaconitine,HPLC≥98%,批號(hào):20170329,寶雞市辰光生物科技有限公司);苯甲酰次烏頭原堿(benzoylhypalonitine,HPLC≥98%,批號(hào):20170129,寶雞市辰光生物科技有限公司)。
2 炮制工藝
2.1 浸泡 取原藥材8000g,除去雜質(zhì),備用。從中取50g留樣用于生川烏供試品制備。剩余生品在室溫(25℃)下于25L食品級(jí)不銹鋼桶中用純凈水浸泡,液面高于藥材5cm,每隔6 h取較大個(gè)切開(kāi),以內(nèi)無(wú)干心為浸泡終點(diǎn)。隨機(jī)取50 g左右浸泡好的川烏在通風(fēng)櫥晾干,留樣用于浸泡后川烏供試品制備。
2.2 炮制 取浸泡好的川烏分6組,每組取樣(1000±10)g,保證每組大小均勻,分別命名為川烏常壓蒸制組、川烏常壓煮制組、川烏高壓蒸制組、川烏高壓煮制組,剩余2組川烏通風(fēng)櫥風(fēng)干至6成干切片后命名為川烏切片蒸制組、川烏切片煮制組。
2.2.1 常壓蒸制和切片蒸制 將川烏常壓蒸制組,放入蒸煮鍋的蒸籠中,開(kāi)水蒸制。分別在蒸制1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h時(shí)取樣切片觀察外觀性狀,內(nèi)無(wú)白心為炮制終點(diǎn),通風(fēng)櫥干燥,備用。川烏切片蒸制組同法操作。
2.2.2 高壓蒸制 將川烏高壓蒸制組,高壓滅菌鍋中分別蒸制0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、2.5 h時(shí)取樣切片觀察外觀性狀,以內(nèi)無(wú)白心為炮制終點(diǎn),通風(fēng)櫥干燥,備用。
2.2.3 常壓煮制和切片煮制 將川烏常壓煮制組,加10倍量清水,開(kāi)水煮制,分別在1 h、2 h、3 h、4 h、5 h、6 h時(shí)取樣切片觀察外觀性狀,以內(nèi)無(wú)白心為炮制終點(diǎn),通風(fēng)櫥下干燥,備用。川烏切片煮制組同法操作。
2.2.4 高壓煮制 將川烏高壓煮制組放入高壓鍋中,加10倍水,高壓煮制,分別在煮制0.5 h、1 h、1.5 h、2 h時(shí)取樣切片觀察外觀性狀,內(nèi)無(wú)白心為炮制終點(diǎn),通風(fēng)櫥干燥,備用。
3 方法
3.1 HPLC法
3.1.1 色譜條件 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以乙腈為流動(dòng)相A,以0.2%冰醋酸溶液(三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.20)為流動(dòng)相B,按表1中的規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm[1]。理論板數(shù)按新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱定對(duì)照品,用0.01%鹽酸甲醇溶液定容到10 mL,制成每1 mL含新烏頭堿、次烏頭堿和烏頭堿各0.6 mg的混合對(duì)照溶液。單酯型生物堿對(duì)照品同法操作(每1 mL含苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿各 0.6 mg)。取上述溶液各1 mL,分別置2 mL、5 mL、10 mL、25 mL量瓶中,加 0.01%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻。
3.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取上述對(duì)照品混合溶液10 μL,按照上述色譜條件,以對(duì)照品混合溶液中生物堿的濃度為橫坐標(biāo),相應(yīng)色譜峰的峰面積值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。見(jiàn)表2。
3.1.4 供試品溶液制備 取藥材粉末(過(guò)三號(hào)篩)約 2 g,精密稱定后置具塞錐形瓶中,加氨試液3 mL,精密加入異丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液 50 mL,稱定重量,超聲處理(功率 300 W,頻率 40 kHz)30 min,放冷,再稱定重量,用異丙醇-乙酸乙酯(1∶1)混合溶液補(bǔ)足減失的重量,搖勻,濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液25 mL,40 ℃以下減壓回收溶劑至干,殘?jiān)?0.01%鹽酸甲醇溶液使溶解,轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,濾過(guò),精密吸取注入液相色譜儀,測(cè)定,按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算,即得。
3.1.5 精密度試驗(yàn) 取同一批川烏的供試品10 μL,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次,結(jié)果烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿峰面積的RSD分別為0.37%、0.64%、0.49%、0.97%、1.57%、1.32%。
3.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品1份,按“3.1.4”項(xiàng)操作,分別在0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h、36 h進(jìn)樣,結(jié)果烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿的RSD分別為1.17%、1.39%、1.84%、1.38%、0.89%、1.74%。
3.1.7 重復(fù)性試驗(yàn)及加樣回收試驗(yàn) 取川烏樣品5份,按“3.1.4”項(xiàng)操作制備供試品,在“3.1.1”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果為烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和苯甲酰新烏頭原堿的平均含量分別為0%、0.011%、0.027%、0.003%,0.015%、0.03%;RSD分別為0.23%、0.42%、0.36%、0.34%、0.51%、0.35%。
取樣品(生川烏)約1 g,共六份,精密稱定,分別加入烏頭堿(0.21 mg/mL)、次烏頭堿(0.42 mg/mL)、新烏頭堿(0.43 mg/mL)、苯甲酰烏頭原堿(0.57 mg/mL)、苯甲酰次烏頭原堿(0.41 mg/mL)和苯甲酰新烏頭原堿(0.56 mg/mL)對(duì)照品溶液適量,按“3.1.4”項(xiàng)操作,在“3.1.1”色譜條件下進(jìn)行測(cè)定,加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
3.2 川烏斯科維爾指數(shù)法麻度評(píng)價(jià) 取川烏不同炮制時(shí)間的炮制品切開(kāi)觀察,以藥典規(guī)定內(nèi)無(wú)白心,口嘗有麻舌感為標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)川烏炮制。麻舌感借鑒GB/T 38495-2020 花椒麻度評(píng)價(jià)[13]和GB/T 21265-2007辣椒辣度[14]的感官評(píng)價(jià)方法中斯科維爾指數(shù)法,結(jié)合文獻(xiàn)[15]進(jìn)行改進(jìn)。用食用乙醇提取被檢驗(yàn)樣品中引起麻感的物質(zhì),將該提取液按比例稀釋成不同濃度的醇水溶液,通過(guò)對(duì)比檢驗(yàn)確定出評(píng)價(jià)小組恰好識(shí)別出有麻感時(shí)被檢樣液對(duì)應(yīng)的最大稀釋倍數(shù),得到斯科維爾指數(shù),確定麻度等級(jí)。
3.2.1 斯科維爾指數(shù)(Scoville index;Scoville pungency units;SPU)[16] 在本標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試條件下,被評(píng)價(jià)小組恰好識(shí)別出有麻感時(shí)被驗(yàn)樣液的稀釋倍數(shù),可按式(1)計(jì)算。[KH*2D]
式中:V1為樣品提取液的移取體積,單位mL;V2為恰好識(shí)別出有麻感的樣液移取體積,單位mL。
3.2.2 樣品提取液制備 取炮制品粉末0.1 g,精密稱定,置棕色具塞錐形瓶中,加入乙醇50 mL,稱定重量, 20 ℃恒溫超聲提取20 min,放冷,用乙醇補(bǔ)足減輕的重量,將混合溶液全部轉(zhuǎn)移至離心管中,2000 r/min轉(zhuǎn)速下離心5 min,將上清液轉(zhuǎn)移至容量瓶中。重復(fù)洗滌沉淀1次,洗滌所得上清液轉(zhuǎn)移至同一容量瓶中,乙醇定容至200 mL,搖勻備用。
參考GB/T 38495-2020 花椒麻度評(píng)價(jià),評(píng)價(jià)小組(10人)初步確定樣品所屬的可能麻感區(qū)段在A1~D3區(qū)間。根據(jù)表4中A~J麻感區(qū)段對(duì)應(yīng)的取樣量,移取相應(yīng)體積(V1)的樣品提取液置于100 mL棕色容量瓶中,純凈水稀釋定容,制備成樣液,用于下一步確定最小樣液量。
3.2.3 樣品最小樣液量的確定 將制備好的樣品提取液按GB/T 38495-2020不同麻感區(qū)對(duì)應(yīng)移取體積,移取相應(yīng)體積的供試品置于50 mL棕色容量瓶中,純凈水稀釋定容。從移取體積由小到大由感官評(píng)價(jià)小組品評(píng),直到識(shí)別出有麻感時(shí)的樣液移取體積為最小樣液量。當(dāng)最大體積仍無(wú)麻感時(shí),采用低一級(jí)麻味區(qū)段重復(fù)上述方法。
3.2.4 空白液制備 移取與被檢供試品等體積的乙醇至50 mL容量瓶?jī)?nèi),加純凈水定容,備用。
3.2.5 評(píng)價(jià)方法 根據(jù)GB 12310-2012,評(píng)價(jià)小組分別對(duì)供試品的最小樣液量及空白液進(jìn)行比對(duì),評(píng)價(jià)結(jié)果為多次檢驗(yàn)正確答案數(shù)的總和,根據(jù)二項(xiàng)式分布顯著性檢驗(yàn)表,在置信度大于95%推出存在感官差別所需的最少正確答案數(shù),按公式1計(jì)算SPU。SPU與麻度等級(jí)換算按表5換算。
4 結(jié)果
4.1 含量測(cè)定結(jié)果 圖1、圖2、圖3為各生物堿和生川烏中色譜圖,各峰無(wú)干擾。根據(jù)表6、圖4可知,常壓煮制、常壓蒸制、高壓煮制、高壓蒸制4種炮制方法,雙酯型生物堿含量都在炮制1 h內(nèi)迅速降至藥典規(guī)定值0.04%以下,后期在最低值處平穩(wěn)。
6種川烏炮制方法達(dá)到峰值的時(shí)間不同,常壓蒸制,單酯型生物堿在炮制5~6 h內(nèi)符合藥典規(guī)定值范圍0.07%~0.15%,5 h時(shí)達(dá)到峰值0.0779%,炮制7 h下降到規(guī)定最低值以下。高壓蒸制川烏在0.5~2.5 h單酯型生物堿內(nèi)全部可以達(dá)到藥典要求范圍0.07%~0.15%,并在炮制1 h時(shí)含量達(dá)最高0.1355%。川烏高壓煮制單酯型生物堿在1~2 h達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)范圍0.07%~0.15%,1 h時(shí)達(dá)到峰值0.1319%,2.5 h以后降到藥典規(guī)定值以下。川烏常壓煮制單酯生物堿2~3 h達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn),在2 h達(dá)到峰值0.1338%,3 h降到藥典規(guī)定值以下。川烏切片煮制、切片蒸制單酯型生物堿含量均未達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)范圍0.07%~0.15%,可能與單酯型生物堿過(guò)度水解有關(guān)。取每種方法單酯型生物堿達(dá)到峰值的時(shí)間為較優(yōu)工藝,每種方法炮制較優(yōu)工藝如表7所示。
4.2 炮制過(guò)程的形貌及感官評(píng)價(jià) 因使用HPLC進(jìn)行對(duì)川烏炮制的過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)的難度大,無(wú)法精準(zhǔn)把控炮制達(dá)標(biāo)時(shí)間和達(dá)標(biāo)點(diǎn),根據(jù)中國(guó)藥典2020版描述,炮制需要達(dá)到內(nèi)無(wú)白心口嘗微有麻舌感,課題組對(duì)不同炮制方法和不同炮制時(shí)間的川烏切片進(jìn)行觀察,結(jié)果如圖5所示。川烏炮制過(guò)程中白心逐漸變黃,當(dāng)炮制時(shí)間繼續(xù)增加時(shí),藥材切片的心由黃變暗黃色,最后接近黑色。
由評(píng)價(jià)小組對(duì)炮制的川烏進(jìn)行了感觀評(píng)價(jià),結(jié)果見(jiàn)表8,麻度隨著炮制時(shí)間的增加而減少,結(jié)合含量測(cè)定結(jié)果可以看到麻度等級(jí)1對(duì)應(yīng)的炮制品都達(dá)到藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)。證明斯科維爾指數(shù)可以應(yīng)用在川烏炮制品的感官評(píng)價(jià)上,運(yùn)用斯科維爾指數(shù)法實(shí)現(xiàn)“麻舌感”感官評(píng)價(jià)的定量,麻度等級(jí)為1時(shí)為炮制終點(diǎn)。
5 討論
在標(biāo)品的檢測(cè)中,多數(shù)研究采用單、雙酯型生物堿混合檢測(cè)的方法,但在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)雙酯型生物堿標(biāo)品存在分解現(xiàn)象,為保證標(biāo)品結(jié)果的精確性,故將單、雙酯型生物堿標(biāo)品分開(kāi)進(jìn)行檢測(cè)。
4種炮制方法單酯生物堿峰值差異不大,主要差異在炮制時(shí)間長(zhǎng)短;煮制的方法較蒸制達(dá)到單酯型生物堿轉(zhuǎn)化最大值時(shí)間明顯減少,分析原因是煮制藥材暴露在水中會(huì)使水解反應(yīng)更加完全;高壓的方法較常壓的方法炮制時(shí)間也明顯縮短,表明在高溫高壓的條件下會(huì)加快水解反應(yīng)速率。
綜上所述,川烏在6種炮制方法中都可以在1h內(nèi)使雙酯型生物堿降至0.04%以下,單酯型生物堿呈增加后下降的趨勢(shì),符合生物堿水解規(guī)律,雙酯型生物堿水解生成單酯型生物堿,此時(shí)雙酯型生物堿含量下降,單酯型生物堿含量升高,繼續(xù)加熱后單酯型生物堿進(jìn)一步水解生成醇胺型生物堿,單酯型生物堿含量因此下降。所以需要合適的炮制時(shí)間,時(shí)間過(guò)短,單、雙酯型生物堿不符合藥典要求,時(shí)間過(guò)長(zhǎng)造成單酯型生物堿繼續(xù)變化。本研究中川烏炮制單酯生物堿含量最大值均在藥典規(guī)定范圍,故建議炮制達(dá)到單酯生物堿含量最大值時(shí)作為最佳炮制時(shí)間。結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)工藝現(xiàn)實(shí)(設(shè)備、成本、環(huán)保),為達(dá)到省時(shí)省工的目的,通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明常壓煮制的炮制工藝較其它幾種方法對(duì)設(shè)備需求低,炮制時(shí)間合適,是符合工業(yè)生產(chǎn)較佳方法。再與含量測(cè)定結(jié)果對(duì)比,結(jié)果顯示生川烏在常溫浸泡24 h,常壓煮制2 h為較佳生產(chǎn)工藝。
通過(guò)觀察不同炮制時(shí)間的藥材切片顏色和麻度評(píng)價(jià),與含量測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比對(duì),發(fā)現(xiàn)川烏炮制過(guò)程中顏色的變化和單酯型生物堿的生成存在相關(guān)性,川烏隨炮制時(shí)間的增加,白心逐漸變黃,此時(shí)單酯型生物堿呈現(xiàn)上升趨勢(shì),當(dāng)炮制時(shí)間繼續(xù)增加時(shí),藥材切片的心由黃變暗黃色,此時(shí)生物堿呈現(xiàn)平穩(wěn)下降趨勢(shì),且蒸制法炮制暗黃色會(huì)加深,甚至接近黑色,此時(shí)單酯型生物堿急劇下降。可以觀察到藥材的中心為暗黃色時(shí)最佳,比對(duì)含量測(cè)定結(jié)果,均達(dá)到藥典標(biāo)準(zhǔn)。所以可以用切片顏色來(lái)判斷炮制終點(diǎn),切開(kāi)藥材,內(nèi)心為暗黃色可作為炮制終點(diǎn)。結(jié)合斯科維爾指數(shù),麻度強(qiáng)度為1時(shí),可以視為炮制終點(diǎn)。川烏無(wú)法炮制與HPLC檢測(cè)同時(shí)進(jìn)行,在炮制過(guò)程中含量檢測(cè)前,麻度評(píng)價(jià)與藥材切片顏色這兩項(xiàng)因素可以作為質(zhì)量評(píng)價(jià)的參考,判定炮制終點(diǎn)。最后結(jié)合含量測(cè)定,對(duì)川烏質(zhì)量評(píng)價(jià)做出明確判斷。
本研究為制川烏的規(guī)范化生產(chǎn)提供了選擇和參考,通過(guò)觀察川烏炮制過(guò)程中切片顏色,實(shí)現(xiàn)了川烏炮制過(guò)程中質(zhì)量評(píng)價(jià)和技術(shù)指標(biāo)的快速評(píng)判,并首次將斯科維爾指數(shù)應(yīng)用于川烏麻度評(píng)價(jià),為川烏麻度評(píng)價(jià)的量化提供了參考,以及給炮制后川烏的質(zhì)量和臨床用藥安全提供一定的理論依據(jù)。
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