吳福林 吳偉樂斯

(1內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院胸外科,內(nèi)蒙古 通遼 028000;2內(nèi)蒙古科技大學包頭醫(yī)學院)

肺癌是呼吸系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,在全球惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率中位居首位〔1,2〕。肺癌一般可分為小細胞肺癌和非小細胞肺癌,其中非小細胞肺癌是肺癌的常見類型,還包括鱗癌、腺癌和大細胞癌,占肺癌80%以上〔3,4〕。目前非小細胞肺癌發(fā)病機制尚不清楚,其首選治療方案是手術治療,胸腔鏡微創(chuàng)因其創(chuàng)口美觀、損傷小、恢復快等優(yōu)勢已逐步取代開胸術式。提高患者術后生存率,術后治療、預測預后及防止復發(fā)是關鍵〔5〕。本文通過酶聯(lián)免疫吸附試驗和免疫組織化學法檢測非小細胞肺癌患者癌及癌旁組織和血清中癌基因紡錘體與著絲粒相關蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3結合蛋白(G3BP)2和Prospero相關同源異形盒蛋白(PROX)1的表達及分析其與非小細胞肺癌臨床病理特征的關系,探尋非小細胞肺癌治療的靶點及預測預后和復發(fā)的指標。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇2019年10月至2022年8月內(nèi)蒙古民族大學附屬醫(yī)院行微創(chuàng)手術的非小細胞肺癌患者102例,其中男65例,女37例;平均年齡(68.25±3.19)歲。

1.2入選標準 納入標準:①術后經(jīng)病理學檢測確診為原發(fā)性非小細胞肺癌,術中清掃淋巴結;②年齡≥65歲,可自行簽署知情同意書;③均行單孔微創(chuàng)切除術,入院前未接受放化療治療。排除標準:①伴有嚴重心、肝、腎功能不全及腦、血液系統(tǒng)等疾病;②伴有其他原發(fā)性腫瘤或自身免疫性疾病;③伴有精神系統(tǒng)疾病或自我認知能力障礙。

1.3試劑和儀器設備 抗人的癌基因紡錘體與著絲粒相關蛋白(SKA)3、TP酶激活蛋白SH3結合蛋白(G3BP)2和Prospero相關同源異形盒蛋白(PROX)1酶聯(lián)免疫試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供;抗人一抗SKA3、G3BP2、PROX1由北京博奧森生物技術有限公司提供;鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)和顯色試劑盒由福州邁新生物技術有限公司提供;bioteck酶標儀(美國);Liaca石蠟切片機(德國)。

1.4非小細胞肺癌患者手術前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗,手術前清晨空腹和術后7 d清晨空腹抽取靜脈血5 ml,3 000 r/min離心10 min后,留取上層血清液氮保存,待檢測。

1.5非小細胞肺癌患者癌和癌旁組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達強度檢測 取非小細胞肺癌患者癌和癌旁組織,甲醛溶液固定、脫水和包埋,制備3 μm的病理切片3張,采用SP免疫組織化學染色法進行染色,染色結果通過Motic Images Advanced3.2圖像分析軟件測定光密度(OD)值,OD值越大陽性表達越強,反之越弱。

1.6癌組織中SKA3、G3BP2、PROX1的表達與非小細胞肺癌臨床病理特征的關系 分析SKA3、G3BP2、PROX1表達陽性率與患者組織學分型、病理分級、臨床分期及淋巴結轉(zhuǎn)移的關系。

1.7統(tǒng)計學分析 采用SPSS23.0統(tǒng)計學軟件,計量資料均符合正態(tài)分布,組間采用t檢驗;計數(shù)資料采用χ2檢驗。

2 結 果

2.1非小細胞肺癌患者手術前后血清中SKA3、G3BP2、PROX1蛋白含量的比較 與術前比較,術后非小細胞肺癌患者血清中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白含量均顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 非小細胞肺癌患者手術前后SKA3、G3BP2、PROX1蛋白血清中含量及癌和癌旁組織陽性表達強度的比較

2.2非小細胞肺癌患者癌和癌旁組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達強度的比較 非小細胞肺癌患者癌組織中SKA3、G3BP2、PROX1的蛋白陽性表達強度明顯高于癌旁組織(P<0.05)。見表1。

2.3SKA3、G3BP2、PROX1的陽性表達與非小細胞肺癌臨床病理特征關系 不同組織學分型的非小細胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05);不同病理分型、臨床分期、有無淋巴結轉(zhuǎn)移的非小細胞肺癌患者SKA3、G3BP2、PROX1表達差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且陽性表達隨病理分級越低、臨床分期越高及發(fā)生淋巴結轉(zhuǎn)移有增高趨勢。見表2。

表2 SKA3、G3BP2、PROX1陽性表達與非小細胞肺癌臨床病理特征關系〔n(%)〕

3 討 論

肺癌是全球腫瘤死亡的主要原因之一,也是致死率最高的惡性腫瘤,其中非小細胞肺癌占 85% 以上,治療以手術切除為主,但大部分患者術后轉(zhuǎn)移、復發(fā)及預后不良〔6,7〕。近年針對非小細胞肺癌的特異性靶向治療取得了較大進展〔8～11〕,對非小細胞肺癌患者的全基因組篩查為不同分子分型的患者提供了個體化醫(yī)學的個體化用藥的治療機會,因此尋找非小細胞肺癌的新的治療靶向基因、預測預后和復發(fā)的基因是當下醫(yī)學研究熱點。

SKA3位于人類13q號染色體,是線粒體外層子單元SKA復合物,直接介導染色體兩側(cè)動粒與微管、染色體的分離與分裂及調(diào)節(jié)細胞增殖與凋亡,在肝、甲狀腺、結直腸癌等腫瘤的增殖、侵襲、惡化和轉(zhuǎn)移中高表達〔12,13〕。PROX1位于人類1q32號染色體,介導細胞分化、器官發(fā)育、促進淋巴管的生成,是具有高度保守性的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,主要表達于淋巴管內(nèi)皮細胞,參與新生毛細血管的生成,從而促進腫瘤的增殖、侵襲及淋巴轉(zhuǎn)移〔14,15〕。G3BP2位于人類4號染色體,是RNA結合蛋白家族中Ras GAP SH3結構域特異性結合蛋白,在食管癌、膀胱癌等腫瘤中高表達,亦參與腫瘤的生長、分化、侵襲及轉(zhuǎn)移〔16,17〕。

綜上,SKA3、G3BP2、PROX1蛋白在肺癌發(fā)生及病情進展中均發(fā)揮重要作用,能夠影響非小細胞肺癌的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移及預后,SKA3、G3BP2、PROX1可作為關鍵分子標記物,有望成為非小細胞肺癌治療的靶點及預測預后和復發(fā)的指標,為臨床應用靶向基因治療提供實驗依據(jù)。